Питательная среда для выявления sтарнylососсus aureus

Питательная среда для выявления sтарнylососсus aureus

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины , в частности к микробиологии, и касается выявления Staphylococcus aureus. Цель изобретения - ускорение выявления Staphylococcus aureus в исследуемом материале . К 900 мл расплавленного мясопептонного агара (МПА) добавляют 0,001-0,0001 г ВМ-3-86 и 70,0-75,0 г NaCI, рН полученного солевого агара доводят до 7,2-7,4. Затем в солевой агар вносят водный раствор ДНК, для чего 0,25-0,5 г ДНК растворяют в 7-10 мл дистиллированной воды. После стерилизации среды перед разливом в чашки Петри в среду добавляют 0,2-0,3 г CaCIa и 50-100 г желточной взвеси. При посеве Staphylococcus aureus на среду видимый рост культуры отмечается через 6 ч в средах без препарата - через 9 ч; ДНК-ная и лецитовителазная активность - через 9 ч (в средах без препарата - 24-48 ч). сл

союз соВетских социАлистических

РЕСПУБЛИК (st>s С 12 Q 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4737916/13 (22) 09,08.89 (46) 23,11.91. Бюл, N 43 (71) Иркутский государственный медицинский институт и Иркутский институт органической химии СО АН СССР (72) А.П. Федосеев, P.Â. Киборт, М В, Малетина, А.Н. Мирскова, Г.Г, Левковская и С.А.

Гусева (53) 576.8.093,1(088.8) (56) Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., 1978, с. 455.

Там же, с. 358. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ STAPHYLOCOCCUS AUREUS (57) Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии, и касаИзобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для ускоренного выявления в исследуемом материале Staphylococcus

aureus.

Широко применяется для выявления названных микроорганизмов питательная среда "кровяной агар", Она содержит двухпроцентный мясопептонный стерильный агар, в который добавлено 5-10% дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана (-1).

Однако при посеве материала от больного на данную среду выделенные культуры стафилококков требуют проведения дополнительного исследования, чтобы их можно было отнести к виду Staphylococcus aureus.

„„. Ж„„1693060 А1 ется выявления Staphylococcus aureus. Цель изобретения — ускорение выявления

Staphylococcus aureus в исследуемом Материале. К 900 мл расплавленного мясопептонного агара (МПА) добавляют

0,001 — 0,0001 г BM — 3 — 86 и 70,0 — 75,0 г NaCI, рН полученного солевого агара доводят до

7,2 — 7,4. Затем в солевой агар вносят водный раствор ДНК, для чего 0,25 — 0,5 r ДНК растворяют в 7 — 10 мл дистиллированной воды.

После стерилизации среды перед разливом в чашки Петри в среду добавляют 0,2 — 0,3 г

СаС1г и 50 — 100 г желточной взвеси. При посеве Staphylococcus aureus на среду видимый рост культуры отмечается через 6 ч в средах без препарата — через 9 ч; ДНК-ная и лецитовителазная активность — через 9 ч (в средах без препарата — 24-48 ч), Наиболее близкой в предлагаемой среде, позволяющей культивировать стафилококки, является питательная среда

Чистовича, содержащая мясопептонный агар (рН 7,2 — 7,4), 10% поваренной соли и

20% стерильной желточной взвеси (1 желток . куриного яйца на 150 — 200 мл стерильного физиологического раствора (2).

Через 48 ч после посева исследуемого материала на данную среду отмечают наличие лецитовителлазной активности исследуемой культуры стафилококков (появление мутной зоны и радужных венчиков вокруг выросших колоний), К недостаткам известной среды относится медленный рост стафилококков и невозможность одновременного выявления других факторов патогенности. Так, после

1693060 выявления лецитовителлазной активности исследуемой культуры стафилококков на среде Чистовича необходима дальнейшая идентификация стафилококков, например определение ДНК-ной активности на среде, содержащей ДНК, Следовательно, удлиняется время проведения анализов, увеличивается расход питательных сред и трудоемкость исследования возрастает, Целью изобретения является ускорение выявления Staphylococcus aureus в исследуемом материале, Используемая в качестве компонента диагностической среды 1,3-дигидро кси-1-(4-н ит рофе н ил) и ро и ил-2аммониевая соль 4-хлор-фенилтиоуксусной кислоты (BM — 3 — 86) формулы 4CICgH4SCHzCOO ЙНзСН(СНОН)СН2ОН

CgH4NOz (вещество BM — 3 — 86) — первые синтезированное соединение, водорастворимое, без запаха, слегка окрашенное, дешевое и доступноее.

Соединение получают взаимодействием соответствующей кислоты с алканоламином в среде низших спиртов (этанол, метанол, пропанол) при 70 — 85 С и соотношении реагентов 1;1 в течение 0,1 — 0,5 ч по схеме

4-г 1СбН4$СН2СООН+

+ НгСН (СН ОН(СНОН (CsH4NOz — 4)

4-С1С6Н4ЯСНгСОО х х йНзСН(СН20Н)СНОН (CsH4NOz — 4)

Питательную среду готовят следующим образом.

К 900 мл расплавленного мясопептонного агара (МПА) добавляют 0,0001 r BM—

3 — 86 и 70 r NaCI, учитывая, что при приготовлении МПА добавляют 5 г NaCI на

1 л МПА, рН полученного солевого агара доводят до 7,2 — 7,4. Затем в солевой агар вносят водный раствор ДНК, Для этого

0,25 — 0,5 r ДНК растворяют в 7 — 10 мл дистиллированной воды. Для лучшего растворения ДНК в ее водный раствор добавляют раствор 3-5 капель 10 NaOH. Стерилизацию среды, содержащей солевой агар и

ДНК, проводят текучим паром в течение 30 мин.

Перед розливом в чашки Петри в среду добавляют 0,2 — 0,3 r CaClz и 50-100 г желточной взвеси. Желточную взвесь готовят из свежего куриного яйца известным путем (в стерильных условиях отделяют желток и помещают в емкость с 150 — 200 мл физиологического раствора). Емкость энергично встряхивают в течение нескольких минут.

0,4

0.25

72,5

50 Из полученных данных следует, что среда предлагаемого состава для идентификации Staphylococcus aureus обладает значительным преимуществом перед известными средами — средой Чистовича и Мор55 двиновой, а именно обеспечивает быстрое (в течение 9 ч вместо 48 ч) выявление стафилококков в исследуемом материале и, следовательно, позволяет ускорить время проведения анализов при одновременном снижении материальных затрат.

Пример 1, Готовят питательную среду для выявления стафилококков следующего состава, г/л:

ДНК 0,25

5 CaCIz 0,2

NaCI 70,0

1,3-Ди гидро кси-1-(4-н итрофен)-пропил-2-аммониевая соль 4-хлор-фенил10 тиоуксусной кислоты 0,0001

Желточная взвесь 50

МПА До1л

При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост куль15 туры отмечается через 6 ч, ДНК-ная и лецитовителазная активность — через 9 ч.

Пример 2. Готовят питательную среду для выявления стафилококков следующего состава, г/л:

20 ДНК

CaCI2

NaCI

1,3-Ди гидро кси-1-(4-н итрофенил)-пропил-2-аммоние25 вая соль 4-хлор-фенилтиоуксусной кислоты 0,0015

Желточная взвесь 75

МПА До 1л.

При посеве Staphylococcus aureus на

30 данный вариант среды видимый рост культуры отмечается через 6 ч, ДНК-ная и лецитовителазная активность — через 9 ч.

Пример 3, Готовят питательную среду для выявления стафилококка следующего

35. состава, г/л:

ДНК 0,5

СаС1г 0,3

NaCI 75,0

1,3-Дигидрокси-1-(4-нитро40 фенил)-пропил-2-аммониевая соль 4-хлор-фенилтиоуксусной кислоты 0,001

Желточная взвесь 100

МПА До1л

45 При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост культуры отмечался через 6 ч, ДНК-ная и лецитовителазная активность — через 9 ч.

1693060

Формула изобретения

Составитель А.Завадская

Редактор О.Юрковецкая Техред М.Моргентал Корректор. Э.Лончакова

Заказ 4052 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Питательная среда для выявления

Staphylococcus aureus содержащая мясопептонный агар, хлористый натрий, жел- 5 точную взвесь, отл и ч а ю ща я ся тем. что, с целью ускорения выявления

Staphylococcus aureus в исследуемом материале, она дополнительно содержит ДНК, хлористый кальций и 1,3-дигидрокси-1-(4- 10 нитрофенил)пропил-2-аммониевую соль 4хлорфенилтиоуксусной кислоты при следующем соотношении ингредиентов, г/л.

Хлористый натрий 70-75

Желточная взвесь 50-100

ДНК 0,25 — 0,50

Хлористый кальций 0,2 — 0,3

1,3-Ди гидро кси-1-(4-н итрофенил)пропил-2-аммониевая соль 4-хлорфенилтиоуксусной кислоты

Мясопептонный агар