Способ хроматографического анализа биологически активных веществ

Способ хроматографического анализа биологически активных веществ

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение касается жидкостной хроматографии и может быть использовано в медицине и фармацевтике для проведения качественного и количественного анализов сложных смесей биологически активных природных соединений, применяемых в качестве лекарственных средств, преимущественно наркотиков. Цель изобретения - повышение достоверности определения наркотических веществ в биологических жидкостях при проведении химико-токсикологической экспертизы. Для этого хроматографирование обрабатываемой анализируемой смеси проводят на пластинах с силикагелем и с модифицированным силикагелем и применяют в качестве подвижной фазы для пластин с модифицированным еиликагелем 1,0-1,5 М раствор хлорида натрия в смеси CaHsOH-HaO при объемном соотношении компонентов 80:20 (определение гашиша) и 0,1-0,3%-ный раствор диэтиламина в смеси C2HsOH-H20 при объемном соотношении компонентов 70:30 (определение алкалоидов группы опия и метадона). 3 з.п.ф-лы, 3 табл. СО с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4728037/25 (22) 13.07.89 (46) 23.11.91, Бюл. N 43 (71) Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт хроматографии (72) M.H.Ермолова, С.И.Никуличева, С.К.Еремин, Б.Н.Изотов, О.Б.Дорогокупец, Э.С.Дроздов и В.Д,Красиков (53) 543,544 (088.8) (56) Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. — M.: Мир, 1981, ч. 1, с.434-438.

Egll R. Comarison of silica-gel and

reversed-phase TLC and LC in the testing of

drugs. — J. Chromatogr, 1984, ч.291. р,249-256. (54) СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧ ЕСКОГО

АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение касается жидкостной хроматографии и может быть использовано в медицине и фармацевтике для проведения качественного и количественного анализов

Изобретение относится к анализу биологически активных веществ, в частности к хроматографическому анализу наркотиков в тонком слое сорбента, и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для определения микроколичества сложных многокомпонентных смесей с целью достоверного подтверждения позитивных результатов.

Цель изобретения — повышение селективности и достоверности результатов хроматографического анализа биологически активных веществ, преимущественно нар котиков, при их определении в бдиологических жидкостях.

„„SU ÄÄ 1693539 А1

s G 01 N 30/90 сложных смесей биологически активных природных соединений, применяемых в качестве лекарственных средств, преимущественно наркотиков, Цель изобретения— повышение достоверности определения наркотических веществ в биологических жидкостях при проведении химико-токсикологической экспертизы. Для этого хроматографирование обрабатываемой анализируемой смеси проводят на пластинах с силикагелем и с модифицированным силикагелем и применяют в качестве подвижной фазы для пластин с модифицированным силикагелем 1,0-1,5 М раствор хлорида на- . трия в смеси CzHsOH-HzO при объемном соотношении компонентов 80:20 (определение гашиша) и 0,1-0,3 g,-ный раствор диэтиламина в смеси ÑzÍsÎH-Н20 при объемном соотношении компонентов 70:30 (определение алкалоидов группы опия и метадона). 3 з,п.ф-лы, 3 табл, Способ осуществляют следующим образом.

Пробы анализируемых веществ наносят на хроматографическую пластину с готовым слоем силикагеля и на пластину со слоем модифицированного силикагеля, элюируют смесью органических растворителей в камере с насыщением, пластины осматривают в

УФ-свете, обрабатывают цветореагентом и идентифицируют анализируемые вещества по значениям R<, причем для пластин с немодифицированным силикагелем используют неполярные системы растворителей, в для пластин с модифицированным силикагелем - полярные системы этанол-вода при объемном соотношении компонентов

1693539

3

55 (70-80):(20-30), содержащие I,0-1,5М хлорида натрия (при определении гашиша или

0,1-0,3 (диэтилэмина прй определении алкалоидов группы опия и метадона), Пример 1, На линию старта (1,5 см от края) пластины Силуфол УФ:.254 (силикагель) наносят 10 мкл спиртового стандартного раствора каннабиноидов (гашиш), пробы анализируемых веществ. и проводят элюирование восходящим методом в системе петролейный эфир,40-70 С) — диэтиловый эфир в соотношении компонентов

80:20. По окончании злюирования (фронт элюента не доходит до края пластины 1 см) пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе 5 мин и после высушивания опрыскивают 0,5 -ным водным раствором прочного синего Б. На пластине наблюдаются красные, оранжевые и фиолетовые пятна i-.à светло-коричневом фоне. Величины значений R< разделяемых компонентов гашив.а приведены в табл. 1. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину c: модифицированным силикагелем(к силикагелю привиты алкилсилильные группы Ср) наносят по

10 мкл стандартного раствора каннабиноидов, проб тех же анализируемых веществ образцов и пластину помещают в камеру, содержащую 1М раствор хлорида на грия в смеси этанол-вода (80:20).

После хроматографического разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе в течение 20 мин и опрыскивают

0,5 -ным раствором проччого синего Б. На пластине наблюда отся красные, оранжевые и фиолетовые пятна на светло-коричневом фоне (табл, 1).

Изменение порядка выхода Л -тетрагидроканнабинола, обладающего психотропными свойствами, позволяе: идентифицировать его с большей достоверностью.

Пример 2. На линию старта пластинь, типа Силуфол УФ-254 (силикагель) наносят по 10 мкл одновременно стандартные хлорофомные растворы алкалоидов группы опия (морфин, кодеин), исследуемые пробы и хроматографируют в системе этилацетат— метанол — аммиак (90:10;5). После хроматографического разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе и затем просматривают в УФ-свате, измеряют величину Rr пятен и проявляют реактивом Марки. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину с привитой алкилсилильной фазой

С2 наносят одновременно по 10 мкл хлороформных стандартных растворов морфина и кодеина и тех же самых исследуемых проб, Хроматографируют в системе зтанал — вода (70:30), содержащей 0,1 g, об. диэтиламина.

После хроматографирования пластину вынимают из камеры, сушат на воздухе 20 мин и просматривают в УФ-свете, фиксируя значения Rg,и проявляют реактивом Марки, Данные по разделению анализируемых апкалоидов опия представлены в табл. 2.

Пример 3, На линию старта пластины типа Силуфол (силикагель) наносят хлороформные растворы метадона, исследуемые пробы и храматографируют в системе толуол — ацетон — зтанол — аммиак (45:45;7,5:7,5).

После разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе, просматривают в

УФ-свете, измеряют величины Rf пятен и проявляют 5 -ным раствором ванадата аммония. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину с привитой фазой С2 наносят по 10 мкл хл.>роформных стандартных растворов метадона и проб тех же самых исследуемых веществ. Хроматографируют в системе этанол — вода (70:30), содержащей

0,3 диэтиламина. После хроматографирования пластину вынимают из камеры, сушат на воздухе s течение 20 мин, просматривают в УФ-свете, фиксируя значения Rg, и проявляют 5; -ным раствором ванадата аммония, Резульгаты а;.ализа представлены в табл, 3, Формула изобретения

1. Способ хрсматографического анализа биологически активных веществ, включаощий разделение проб анализируемых веществ на хроматографической пластине с силикагелем и на хроматографической пластине с абращеннофазовым сорбентом, обработку хрсматограмм цветореагентом и идентификацию веществ по их величинам хроматографической подвижности, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения достоверности результатов анализа при определении наркотиков в биопробах, разделение пробы вещества на пластине с обращеннофазовым сорбентом проводят с применением в качестве подвижной фазы полярной смеси растворителей этанол-вода с добавкой органического основания или неорганической соли при содержании этанола в смеси 70-80 об, Д, а идентификацию осуществляют путем сравнения величин хроматографической подвижности анализируемого вещества на пластинах обоих типов.

2, Способ по и, 1, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности определения основных компонентов гашиша, в качестве добавки используют хлорид натрия с концентрацией 1,0- !,5M в смеси, 1693539

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Соединения

Значения Rg

Силикагель

Модифицированный силикагель

Мета он

Сине- иолетовая

0,80

0,50

Составитель В. Агинский

Редактор М. Бланар Техред М.Морге нтал Корректор С. Черни

Заказ 4075 Тираж. Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

3. Способ по п.1, отл ича ю щи йс я тем, что. с целью повышения достоверности определения алкалоидов группы опия и метадона, s качестве добавки используют диэтиламин.

4. Способ по и, 1, отличающийся тем, что в качестве обращен нофазового сор- бента используют силикагель с привитой фазой С2.

Окраска пятен, выявленных проявляющим реактивом