Способ определения активных красителей в крови

Способ определения активных красителей в крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям и может быть использовано для количественного определения активных красителей. Целью способа является повышение чувствительности и специфичности способа. Способ позволяет определять количество каждого из красителей ярко-красного 6С и черного К в крови при одновременном их присутствии в организме за счет полного их извлечения из биосубстрата и повышения специфичности разделения красителей. Количественное определение красителей в крови проводится предварительной обработкой проб диметилформамидом с последующим кипячением в течение 1 мин, упариванием до объема 0,5 мл и проведением тонкослойной хроматографии на пластинках с широкопористым силикагеле i (силуфол). Хроматография проводится путем нанесения проб крови после предварительной обработки на пластинку с последующим элюированием в хроматографической системе изобутиловый спирт - диметилформамид - вода в объемном соотношении 11:3:11, а количество активных красителей определяют по калибровочному графику путем сравнения площади разделенных пятен с эталоном. Чувствительность способа 0,01 мг в пробе, точность 96,0 ±3,0%. 5 табл. лвижв с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ls!)s 5 01 М 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТО Р C КО МУ С В ИДЕТ ЕЛ Ь СТВУ (21) 4763461/14 (22) 28.11,89 (46) 07.12.91. Бюл, и 45 (71) Пермский политехнический инсти:. ут (72) М,iV1.Дедюкина, Н.B.Çàéöåpn. У..А.Землянова и " И,Хрущев (53) 612. l1.1 (088.8) (56) Кузменко Н.M. и др. Гигиена и санитария, 1976, Н 6, с. 40. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНЫХ

КРАС . 1ТЕЛЕЙ В КРОВИ (57) Изобретение огносится к медицинским токсикологическим исследованиям и может быть использовано для количественного определения активных красителей. Целью способа является повышение чувствительности и специфичности способа. Способ позволяет определять количество каждого из красителей ярко-красного 6С и черного К. в крови при одновременном их присутствии в организме за счет полного их

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в част-, ности санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения активных красителей в крови, Цель изобретения — повышение чувствитальности способа и специфичности способа, Способ осушествляется следующим образом.Пробы, содержащие 1 мл крови затрав2 ленных краслтелями крыс, экстрагируют мл диметилфсрмамида с последующим кипячением 1 мин. После удаления белка цен(1в 50 („, 1 69/()0,5 : Д ) извлечения из биосубстрата и повышения специфичности разделения красителей. Количественное определение красителей в крови проводится предварительной обработкой проб диметилформамидом с последующим кипячением в течение 1.мин, упариванием до обьема 0,5 мл и проведением тонкослойной хроматографии на пластинках с широкопористым силикагеле .(силуфол). Хроматография проводится путем нанесения проб крови после предварительной обработки на пластинку с последующим элюированием в хроматографической системе изобутиловый спирт — диметилформамид — вода в объемном соотношении 11:3:11, а количество активных красителей определяют по калибровочному графику путем сравнения площади разделенных пятен с эталоном. Чувствительность способа 0,01 мг в пробе, точность

96,0 +- 3,0%. 5 табл. трифугированием при 8000 o6/мин в течение 15 мин центрифугат упаривают до

0,5 мл, Определение активных красителей ярко-красного 6С и черного К в подготовленных пробах проводится методом тонкослойной хроматографии.

Структурные формулы красителей;

1. Активный ярко-красный 6С

16 l7005

2. Активный черный К

+ бала

Анализируемы8 прОбы наносгп на плаСТИНКИ С IjJMPOKOrlOPMСТЫМ С,.ËMKBÃBËBÌ (СИг1уфол) и для элюировяния пластинку помещают B стакан с:. хроматографической системой изобутиловый спирт — диметилформямид — вода в объемном =оотношении

11 .3:11. Процесс элюировяния занимает 1 ч.

Затем пластинки вынима1ст и подсушивак т

С помощью планиметра измеряют площади окрашенных пятен на пластинке, Количественное определение красителей осуществляют по калибровочному графику путеM срявнения площяди oofI)÷8HHB K рязг1еленных пятен с эталоном. Для этого строится калибровочн ы1л график — эталон, Калибоовочный график строится следуОщим образом, Пробь. крови контрольных жиВОтных Объемом 1 мл экстсагируют 2 мл диметилформямида, содержащего различные концентрации активных ".ðàñèòåëåé ярко-красного бС и черного К -, посгедующим кипячен i8M B течение 1 MI,H. Белок удаляют центрифугирование1 при 8000 О1з/клин, а проб :-.I упариBЯют до объема 0,5 мл. На плаcTMHKó с широкопористым силикагелем нанося предварительно обрабо1янныепробы крови, содержащие красители активный ярко-красный 6С и черный К в различных КоНuентрациях, Пластинку помещак;т э хроматографическую систему изобутилоВый спирт — диметилформамид — вода в объ8ìíoì соотношении 11:3;1 . Процесс

"„-л юирОВяния заним яет . .I, ятем с грея 1 график зависимости г1лощядл полученных пятен на пластинке гт концен грации краси"

18лЯ..

8 opBpllага8Moé xpoIMЯToi pBôич8ñKoé сМсТ8М8 изобутиловый cl 1! IpT — pM vi8TMI I@op" мамид — Вода анализируемые К1!Ясители сбладяют рязл лчной подвижностью Щ, В результате чего повь ша-.":: ся специфичность разделения двух соецинений и чувствительность, что позволяет количественно Определять эти краситег1и при одновременном их пРиСутСтвии B KPQBM, В табл,1 приведены значения подвижности анализируемых красителей в хрома5 тогряфической системе изобутиловь,й спирт — диметиг1формамид — вода в объемном соотношении 11,3;11 и в этой же системе при других объемных соотношениях, а также в

ИЗВЕСТНой СИСТBМ8, 10 Предварительная экстракция проб крови диметилформамидом с последующим кипячением в течение 1 мин позволяет более полно выделить красители из крови, что повышает чувствительность способа.

15 В табл.2 представлен выбор оптимального растворителя для экстракции активных красителей ярко-красного 6С и черного К из крови, В табл,3 представлен выбор оптималь20 ного времени кипячения проб крови для денатурации белков крови, В табл,4 представлены нормы точности измерений предлагаемого способа.

8 табл.5 представлень1 данные по срав

25 нени1о чувствительности предлагаемого и известного способов.

Технико-экономическая эффективность предлагаемогс1 способа по сравнению с изВЕСТНЫМ СОСТОИТ В ТОМ, ЧТО ОН ПОЗВОЛЯЕТ

30 раздельно определять активные красители ярко-красный 5С и черный К при одновременном их присутствии в крови затравленных животных с заданной степенью чувствительности и точности определения, 35 что позволяет использовать его для проведения санитарно-ToKcMKoлогического контроля и исследования.

Формула изобретения

40 Способ спределения активных красителей в крови путем экстракции органическим растворителем и последующего разделения методом тонкослойной хпоматографии, О т л1697005 и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичнос;и способа, экстракцию проводят диметилформамидом с последующим кипячением в течение

Таблица 1

Хроматографическая система

Активный ярко-красный 6С Активный черный К

П е агаемая система

0,42

0,54

0,60

0,42

0,60

0,40

Нет разделения (все красители в одном пятне)

Известная система

Нет разделения, идут с фронтом растворителя

Таблица 2

ТаблицаЗ

Из обута нол-диметил-фармамид — вода (11;3:11) Изобутд нол-диметил-формамид — вода (12:3:11) 9:3:11

Изобутанол-диметил-формамид — вода (11:3:12) 11:4;11

Изобутанол пропанолэтилацетат — вода

20:40:10:30

1 мин, осаждают белки, центрифугируют и упаривают супернатант, а разделение проводят в системе изобутиловый спирт — диметилформамид- вода в соотношении 11:3:11.

По вижность сое инений Rf i697005! абг!лца 4

Задан f-f.-lv. конLI8H 1 PBLIM>! ВЕщеc i" ва, л !-/ л !/

До в(грител ь интервал о деця .-!!,!с! м

Среднеквадра- Вероятная ихное L!TI . IOHc- о но !1-Г!- л Ilац

Вещество по и, !-,, ь ! ние

Активный рко-красн ы

6С 3,16

1,64

2,50

Активный черный K табл!ЛLIа5

С!пределение сп ..!соба, %

Ь

Ч вствительность способа (м:I- в проб!е1 у

Предлагаемого Известного Извь.стнГл î !р Длагаемо. о

0,05 75,8 =-5,0

W i

96,0,0

0,01

Сс1став!.!Тел ь В,м!лт!а!!! Iл!-!

Редактор В. Бугре н ковш: ехред У., М:!р-ентал 1 орректоо lv,!."!а!,".;!. !ми!!!инец

Заказ 4303 тëðà>ê Подписное

ВНИИ ! N Г ос дPilýc. TÂPI HÎÃÎ коми тк! По и зоб ретс I!лйм Ii I о ткpbi i f,i!, I! 1 Г! пи Г,н (I,(.p

113035, Москва,, К-,35, Ра" ыска наб,. 4/5

П! роиз Г!од(т !!вг! ! о изДател ьскл!л ко мои нет !ате!!т, I, />кгород, "л, ага вина, 1 О!

1,0

0,75

0,50

0,25

1Я

С,75

0,5О

0.25

0,95й О, 0-rs . 0 0

0,48:+ ",012

0.25::- О,О I,0 " 0,О

О 73 .: 0,012

0., 7 - .— 0,01I::., 0,25 - 0,0

0,025

0,0! О

О, 010

0,0

О,О

О,С10

О,C !5

ОО