Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом

Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и касается способов определения аномального липопротеида в сыворотке( крови больных гепатитом. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа. Способ осуществляется посредством проведения встречного электрофореза сыворотки больных в присутствии детергента тритона Х-100 или Твина-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1% в градиенте потенциала 15-20 в/см в течение 50-60 мин.

СООЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИМИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУ БЛИН (51)5 С 01 N 33 48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЭОБРЕТЕНИЯМ И QTHPbfTHAM

ПРИ ГКНТ СССР !

Б»...=,„,,;":: Т=. КА

К АВТОРСНОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

{21) 4490676/14 (22) 03. 10.89 (46) 15. 12.91. Бюл. № 46 (71) Витебский медицинский институт (72) К.С.Азаренок и Н.В.Железняк (53) 616.003.215 (088.8) (56) тапсе, 1970, № 2, р. 579-581. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНОМАПЬНОГО

ЛИПОПРОТЕИДА В CblBOPOTKE КРОВИ БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ (57) Изобретение относится к медициИзобретение относится к медицине и касается способов определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом ., Целью изобретения является упрощение и ускорение способа..

Пример конкретного осуществления способа.

На стеклянную пластинку наливают прозрачный 1Х-ный агар (фирма "Диф-» ко") или 1Х-ный бактоагар (фирма "Фе- .рок"), приготовленный на натрий-ацетат-барбиталовом буфере рН 8, 1-8,6.

Для приготовления 1 л буфера требуется 8,14 rp барбитала натрия (медикал), 6,48 г уксусно-кислого натрия, 90 мл 0,1 мо нормального раствора соляной кислоты.

После застывания агара в нем делают лунки на расстоянии 6 мм друг от друга. Со стороны катода в лунки помещают испытуемые сыворотки, а со стороны анода детергент (0,5-1%-ный; раствор тритон Х-100 или твин-80, или сульфанола в дистиллированной водЕ) . Затем стекло помещают в прибор

„„ЯЦ„„1698763 Д 1

2 не и касается способов определения аномального липопротеида в сыворотке» крови больных гепатитом. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа. Способ осуществляется посредством проведения встречного электрофореза сыворотки больных в присутствии детергента тритона Х-100. или Твина-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1% в градиенте потенциала 15-20 B/ñì в течение 50-60 мин. для электрофореза. В электродные сосуды наливают натрий-ацетат-барбиталовый буфер рН 8,1 — 8,6, разведенный 1:10 дистиллированной водой.

Электрофорез проводят при силе тока !

5-20 ма, напряжении 300-400 В и градиенте потенциала 15-20 ма напряжении 3 в/см в течение 50-60 мин.

Для учета результата пластинку просматривают в косом проходящем свете. При наличии аномального липопротеида s сыворотке крови между лунками обнаруживается, четкая полоса преципитации, не исчезающая после обработки пластины 10Х-ным раствором КС1, эта полоса преципитации принадлежит ! аномальному лупопротеиду (АПП).

При изучении морфологических и физико-химических свойств миланского антигена было выявлено, что он .является липопротеидом низкой плотности, плавучая плотность которого в градиенте сахарозы 1,06, не окрашивается суданом черным, но окрашивается жировым красным 7 В и нафталиновым черным, при электронной микроскопии

1698763

Т а б л и ц а 1

Частота обнаружения АЛП при различных заболеваниях

Обсле- Продолжи- Частодовано тельный та, 7. результат

Пример Заболевания

1 Вирусный гепатит А

2 Вирусный гепатит В

77,4

48

55,5

3 Недиференць(рованный вирусный гепатит

12 3

1136 14

803 15

25,0

1,23

1,87

4 Доноры

5 Другие заболевания

Достоверность различий:

Р > 0,005

P c 0,001

P (0,001

P С 0,05

Р а 0,05 р (0,01

P с 0,001

P (0,001 представляет собой дископодобные частицы величиной 40-50 нм. Однако в сыворотке больных и перенесших гепатит

А из-за его слабых антигенных свойств.5

Таким образом при упрощении и ускорении способа обнаружена довольно высокая частота обнаружения АПП в сыворотках больных гепатитом.

В табл. 1 и 2, 3 представлены дан- 10 ные по частоте обнаружения АЛП при различных гепатитах в зависимости от тяжести заболевания, а также в зависимости от положительной реакции аланиновой аминотрансферазы.. Из пред» ставленных данных следует, что имеет-. ся положительная корреляция на обнаружение АЛП и тяжестью заболевания, данные табл. 3 свидетельствуют о бо-, лее высокой чувствительности обнаружения АЛП по сравнению с тестом А и

AT. При этом упрощение способа. дости-! гается эа счет исключения использова" ния специфической BHTHcblBopoTKH> также значительно ускоряется и время проведения реакции с 18-24 ч до 1 ч (вреиени,проведения встречного элект" рофореэа).

Формула и э обретения

Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом путем исследования сыворотки больных в реакции преципитации, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, преципитацию осуществляют встречным электрофорезом в присутствии детергента тритона х-100.или твииа-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1Х, в градиенте потенциала 15-20 в/см в течение 50-60 мин.

1698763 Таблица 2

««»«»»Ь««««L

День желтухи

Тяжесть

Всего

1-5

16-20 20 и более

t 1-15

6-10

42/О 145/39

0Х 26,9X

19/О

0Х

29/8 14/О

27,6% 0Х

41/31

75, 6Х

Легкая

Среднетяжелая

6/5 13/8 8/5 11/1 56/33

83,3Х 61,5Х „ 62,5Х .9,1Х 58,9Х

18/14

77,8%

2/2 3/3 2/1 5/5 . 15/14

100% 100Х 50Х 100Х 93,3Х

3/3

100%

Тяжелая

37/15 30/11 29/6 58/6 217/86 .

40,5% 36,7Х 20,7Х 10,3Х 39,8Х

62/48

77,4%

Всего

АпП обнаружен » «»»э»ю

Та блица 3

Частота обнаружения АЛП и повышенная активность АлАТ у детей.и взрослых в организованных детских коллективах.

Учреждения и возраст

АлАТ, 0,68 ммоль/л-ч

1 абс доверит инт.

Х при P .0,05Х

° » ««Й«4» «««Ь Ь» абс

Х оверит. интерв. при р 0,05 в Х

0-4,8Х

Достоверность различий

А-Б

Р,в (0,001

Р », > 0;05

Составитель С «Мельникова

Редактор В«Фельдман Техред К.Дрык Корректор А.Обручар

Заказ 4391 Тираж; .Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по Изобретениям и открытиям при ГКНТ;СССР.

113035, Москва, Ж-35, Раушская неб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарииа Ю1

А Учреждения, где наблюдались случаи гепатита А/42/

1 Дети (1041)

2 Взрослые (145) Б Учреждения, где гепатит А не наблюдался в течение года (2) 1 Дети (50)

2 Взрослые (8) 125

12Х

22

14,2%

10Х-14%

8,6%-19,8Х

3,9Х-6,УХ

0-.5,8Х