Штамм бактерий brucella авоrтus, используемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота

Штамм бактерий brucella авоrтus, используемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к получению биологических препаратов, и может быть использовано для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота. Целью изобретения является штамм бруцелла абортус, обладающий стабильными свойствами, безвредностью и высокой иммуногенностью. Штамм бактерий Brucella abortus Ns 75/79A (35) депонирован в коллекции Всесоюзного государственного научноисследовательского института ветеринарных препаратов. Использование штамма Brucella abortus 75/79A(35) в качестве противобруцеллезной вакцины позволяет использовать ее в комплексе мер по профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота любого возраста, без учета периода стельности. СП с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s С 12 N 1/20. А 61 К 39/10

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4603578/13 (22) 20.09,88 (46) 30.12,91. Бюл. М 48 (71) Алтайская научно-исследовательская ветеринарная станция (72) И.П.Никифоров (53) 619.616.24-002,5.6.36.22/28(088.8) (56) Сборник научных трудов. Алма-Ата, изд.

Восточного отделения ВАСХНИЛ, 1986, с,105 — 106.

Ветеринария, 1975. N7,,с,43-45, Ветеринария, 1975.М 11, с,32-33. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BRUCELLA

ABORTUS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к биологическим препаратам, и может быть использовано для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Одним из средств для успешной профилактики бруцеллезной инфекции является применение в комплексе противобруцеллезных мер средств специфической профилактики бруцеллеза.

В настоящее время для изготовления противобруцеллезной вакцины применяются штаммы бруцелла абортус hh 19 и шт. М

82.

Штамм М 19 по культуральным призна-. кам является, стойким вариантом Bfucella

abortus, хорошо растет на обычных пита„„5U ÄÄ 1701743 А1 (57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к получению биологических препаратов, и может быть использовано для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Целью изобретения является штамм бруцелла абортус, обладающий стабильными свойствами, безвредностью и высокой иммуногенностью. Штамм бактерий ВгосеИа

abortus М 75/79А (35) депонирован в коллекции Всесоюзного государственного научноисследовательского института ветеринарных препаратов. Использование штамма Brucella

abortus 75/79А(35) в качестве противобруцеллеэной вакцины позволяет испольэовать ее в комплексе мер по профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота любого возраста, без учета периода стел ьности. тельных средах, умеренно продуцирует сероводород, растет на средах с основным фуксином 1:50000 и 1:100000 и не растет на средах в тех же разведениях, но с добавлением тионина, проявляет высокую чувствительность к пенициллину. Обладает сравнительно высокой иммуногенностью (75 — 80%).. .При окраске колоний по У-Вилсону шт.N 19 и полевых штаммов колонии в 3-6суточном возрасте имеют фиолетовый ободок и светло-желтый центр. а колонии

R-штаммов — синий цвет.

К недостаткам известного штамма следует отнести то. что штамм 1Ф 19 ВгисеИа аЬогмз высокоагглютиногенен. обладает длительной приживаемостью в организме

1701743 иммунизированных животных (5 — 8 лет), обладаетостаточнойвирулентностью, абортогенностью, Отсутствие способа дифференциации не позволяет применять его на взрослом поголовье скота в очагах инфекции и в угрожаемых по бруцеллезу стадах, Вакцина из шт-, N. 82 Bruceita abortus— живая, слабоагглютиногеннэя, обладет иммуногенностью 75-100% на морских свинках, зараженных через 5 мес после их

,иммунизации.

У шт. N. 82 при окраске по У-Вилсону на 3-и сутки роста колонии мелкие и имеют фиолетовый ободок и светло-желтый центр, на 4-й день у них появляется исчерченность и включения в центре, к 5 — 6-му дню колонии при окраске становятся синими, При высеве на среду с агаром в чашках

:Петри образует колонии SR-формы, круглые, гладкие, прозрачные с голубов òûì оттенком.

Агглютинирует е растворах S- u R-специфических бруцеллезных сывороток, дает слабую пробу в трипафлавине, термоагглютинация слабая или не агглютинирует, Растет на средах с фуксином 1:50000 и не растет с тионином (1;25000). При росте на агаре образует сероводород, Обладает слабыми.агголютиногенными и вирулентными свойствами, Однако штамм N 82 ВгосеИа

abortus в SR-форме не стабилен, абортогенен (10 — 20/ абортов у стельных коров и нетелей). Культура шт. М 82 в образцах производственных серий вакцины характеризу ется неоднородностью формы колоний, антигенные свойства субкультур генетически не закреплены, субкультуры в Я-, SR- u

R-формах имеют различную вирулентность.

У 0,4 — 0,8% вакцинированных животных сохраняются поствакцинальные реакции на длительный период, Целью изобретения является получение штамма бруцелла абортус, обладающего стабильными свойствами, безвредностью и высокой иммуногенностью.

В результате отбора и исследований был селекционирован штамм бруцелла абортус 75/79-А, отвечающий основнь1м требованиям вакцинного штамма бруцеллеза крупного рогатого скота. Штамм l3rucella

ebortus 75/79-А депонирован в коллекции

Всесоюзного Государственного научно-исследовательскогоо института ветеринарных препаратов под номером 75/79-А(35).

Штамм 75/79-А бруцелла абортус — диссоциированный штамм в SR-форме, выделен из высева надвымянного лимфоузла реагирующей на бруцеллез коровы в виде колоний бруцелла абортус в аназробных условиях на 7-е сутки инкубации в термостате.

Полученной из заявляемо о штамма вакциной прививают крупный рогатый скот (например, стельных телок) в дозе 100 млрд. микробных клеток, Селекционированный штамм бруцелла абортус 75/79-А имеет следующие морфологические, культурально-биохимические характеристики, Морфологические признаки, Штамм бруцелла абортус 75/79-А — зто очень мелкие микроорганизмы, в микроскопических препаратах встречаются одновременно в кокковидных и пэлочковидных формах, при окраске по Козловскому окрашиваются в красный цвет, хорошо растет на твердых питательных средах: мясопептонном печеночном глюкоза-глицериновом агаре, печеночном глюкоза-глицериновом агаре как с добавлением перевара Хоттингера. так и без него.

Культурально-биохимические признаки, Штамм 75/79-А полностью (75-100%) агглютинируется S- u R-бруцеллезными сыворотками, не агглютинируется с физраствором, дает положительную реакцию (++++) в пробе с акрифлавином. положительную или слабоположительную реакцию термоагглютинации. На агаре в чашках популяция однородная, колонии ровные, гладкие, выпуклые, блестящие. При окраске по Уайт-Вилсону 3 — 4-суточные колонии культуры исходного штамма и 5-го пассажа через организм морской свинки, выращенные на косяках агара Щелковского биокомбината, ВГНКИ и Алтайской НИВС, окрашиваются однородно в основном (до

80;ь) как SR-форма (по сине-фиолетовому фону желтая исчерненность по диагонали, середине, иногда по периметру колоний ближе к краю), 5-200/, колоний — как RS-форма. R- u S-формы колоний в популяции не наблюдались, Штамм и его субкультура хорошо растет на средах с тионином и фуксином 1;50 тыс. (++), не чувствителен к эритритолу и натриевой соли бензилпенициллина в концентрации до 50 ЕД в 1 мл среды. Продуцирует НгЯ (1-29 мм).

По морфологическим, культуральным. агглютинабельным свойствам, реакции термоагглютинации и пробе с акрилфлавином штамм 75/79-А представляет собой диссоциант бруцелл, аналогичный штамму

Bruceiia abortus!Ф 82. Отличием изучаемого штамма от последнего является относительная однороднсть популяции и отсутствие в ней микробных клеток, образующих на 3 — 4 — е сутки инкубирования колоний e S-или Я-форме.

1701743

40 робных клеток по оптическому стандарту 45

Пример 1. Приживаемость и возможность миграции штамма 75/79-А (5-й пассаж) изучены в опыте на 50 морских свинках, 25 из которых были иммунизированы в дозе 1 млрд. микробных клеток и содержались вместе с непривитыми в течение 4 мес. Морских свинок по 5 голов иэ каждой группы убивали через 15, 30, 60, 90, 120 дней и проводили бактериологическое и серологическое исследования материала на бруцеллез, В результате проведенных исследований установлено, что штамм 75/79-A приживается в организме иммунизированных морских свинок в генерализованной форме в течение 60 дней.

При серологическом исследовании в

РБП, РА, РСКс биофабричными антигенами и в РСК с R-антигеном КВИ сывороток крови от иммунизированных морских свинок положительная реакция с биофабричным антигеном была получена только у одного животного через 60 дней в Р БП и СК в титре

1:20. В PCK c R-антигеном КВИ все морские свинки положительно реагировали с 15 дня до 60 в титрах 1:5 — 1:80. Через 90 дней отмечена положительная РСК в титре 1 5 у двух морских свинок из пяти, через 120 дней все животные утратили серопозитивность к Rантигену. При совместном содержании в течение 120 дней иммунизированных морских свинок и животных контрольной группы не установлено явление миграции изучаемого штамма, что подтверждается результатами бактериологического и серологического исследований.

Пример 2, Остаточная вирулентность и агглютинабельные свойства штамма

75/79-А (5 пассаж) изучали в опыте с ВГНКИ на 90 морских свинках в сравнении со штаммами М 82 и вирулентным шт. Вгисе!!а

abortua 54. Животных иммунизировали взвесью двухсуточных агаровых культур в дозах 10, 100, 1 тыс., 10 тыс. и 1 млрд. микмутности. Морских свинок убивали через 20 и 40 дней, проводя бактериологическое и серологическое исследования на бруццелеэ, отмечая в эти сроки видимые патолого-анатомические изменения в лимфоузлах и органах животных, вычисляя индекс селезенки.

В результате проведенных исследований установлено, что штамм 75/79-А обладает низкими вирулентными свойствами, так как в указанные строки генерализовано расселяется в организме морских свинок. привитых только в дозе 1 млрд.м.клеток,-а приживается в дозе от 1 тыс.м.клеток, в то время как шт. N. 82 — от 10 микробных клеток.

При серологическом исследовании в

РБП, PA u PCK на бруцеллез в сыворотке крови морских свинок, привитых разными дозами культуры штамма Bruceila abortus

75/79-А, отсутствовали антитела, выявляемые антигенами биофабричного производства. В PCKc R-антигеном в первый срок убоя выявлены специфические антитела у всех морских свинок, иммунизированных в дозе 1 млрд.м,клеток (титр 1:10-1;20), через

40 дней в аналогичной группе положительно реагировали все животные в высоком титре (1:40), в остальных группах — по 1-3 м.свинки в титре 1:5.

Пример 3, Безвередность (абортогенность) штамма 75/79-А изучена на 8 бере-. менных морских свинках, привитых 1, 2, 7.

5, 10 млрд.м,клеток суспензией двухсуточной агаровой культуры исходного штамма и его пассажей. За период наблюдения в сроки 15, 20, 30, 60 сут перечисленные дозы штамма аборта не вызывали, а при послеубойном вскрытии из полостей маток 8 беременных морских свинок извлечено 26 сформировавшихся плодов.

Пример 4. Абортогенность и агглютиноггеность штаммов 75/79-А и шт. N 82 изучены на 9 (2 — 3 мес. стельности) телках. иммунизированных в дозе 100 млрд. микробных клеток каждого штамма.

За 7 мес. опыта установили следующее.

В группе телок (4 головы), иммунизированных 100 млрд. микробных клеток двухсуточной суспензии штамма 75/79-А, аборта не отмечалось, Все телки, иммунизированные суспензией штамма 75/79-А, благополучно растелились, а из 5 телок, иммунизированных штаммом N 82 в дозе

100 млрд.м.к. биофабричной вакцины, через

2 мес после иммунизации одна телка абортлровала.

Результатами серологических исследований сывороток крови животных обоих групп в сроки 12 дней, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 мес после иммунизации установлено, что у телок опытной группы sce реакции с биофабричными антигенами дали отрицательные результаты исследований на бруцеллез через 2 мес после иммунизации, à PCK c R-антигеном 16/4 ИЭВСиДВ через 3 мес, тогда как из 5 телок, иммунизированных шт. М 82, у одной сохранились реакции в РСК со стандартным антигеном (в титре 1:10++++ и РСК с R-16/4 антигеном ИЭВСиДВ 1:40++++), Пример 5. Иммуногенность штамма

75/79-А на морских свинках высокая и колеблется от 66,6 до 100;, при заражении через 3,5 мес. после их иммунизации. В опытах при апробации штамма совместно с

ВГНКИ на 94 морских свинках иммуноген1701743

Составитель И.Никифоров

Редактор Т.Лаэоренко Техред M,Moðãåíòàtl Корректор С.Черни

Заказ 4512 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ность штамма 75/79-А (5 пассаж на морских свинках) в дозе 2 млрд. микробных клеток составила 88,8 при индексе инфицированности (ИИ) 8,3, у штамма hL 82 в той же дозе иммунитет составил 65ф> (ИИ 20,0), у шт, N

19 в дозе 1 млрд.м,к. иммуногенность составила 84,2 при ИИ 11,5.

Использование штамма 75/79-А(35)

Brucella abortus в качестве противобруцеллезной вакцины позволит применить ee e комплексе мер по профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота лк>бого возраста и без учета стель ности, 5 Формула изобретения

Штамм бактерий Brucella abortus

ВГНКИ М 75/79A(35), ипользуемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.