Матрица для обнаружения пестицидов, обладающих антиэстеразным действием

Матрица для обнаружения пестицидов, обладающих антиэстеразным действием

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области аналитической химии, касается разработки простейших средств обнаружения пестицидов и может быть использовано для производства индивидуальных средств контроля за содержанием пестицидов в воде, пищевых продуктах, воздухе и пробах почвы. Целью изобретения является упрощение проведения анализа. Матрица индикаторного устройства выполнена на одной бумажной подложке, на которую нанесены все компоненты биохимической рецептуры: фермент, фосфатный буфер, субстрат и индикатор . При этом в качестве субстрата берут а-тмонафтмл ацетат, в качестве индикатора - дихлорфениликдофеколят натрия , в качестве фермента - ацетилхолпнэстеразу эритроцитов или зст-jpasy t. Чувствительность анализа до 1 мг/л. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sl)s С 12 Q 1/46

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

/ (21) 4719987/13 (22) 24.04.89 (46) 30.12.91. Бюл. М 48 (71) Государственный союзный научно-исследовательский химико-аналитический институт (72) В. А. Апухтин, И. Л. Беззубов, Ю.А,Мазин, M. П. Николаева, В. А. Самокиш, и

В.Я.Стацевич (53) 677.15.08(088.8) (56) Патент Румынии М 82028, кл. 6 01 N

31/22, 1983.

РСТ/SE М 85/00158, кл. С 12 Q 1/46, 1985, (54) МАТРИЦА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ПЕСТИЦИДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ АНТИЭСТЕРАЗНЫМ ДЕЙСТВИЕМ (57) Изобретение относится к области аналитической химии, касается разработки

Изобретение относится к области аналитической химии, касается разработки простейших средств обнаружения пестицидов и может быть использовано для производства индивидуальных средств контроля за содержанием пестицидов в воде, пищевых продуктах, воздухе и пробах почвы.

Известно индикаторное устройство, включающее подложку с буфером, ферментом, индикатором крахмалом и глицерином.

Субстрат наносится в процессе анализа.

Недостатком является необходимость в проведении нескольких операций.

Наиболее близким по своей технической сущности к предлагаемому обьекту и взятым в качестве прототипа является инди-,. каторное средство для обнаружения.пестицидов.

„„. Ж„„1701749 А1 простейших средств обнаружения пестицидов и может быть использовано для производства индивидуальных средств контроля за содержанием пестицидов в воде, пищеBbIx продуктах, воздухе и пробах почвы.

Целью изобретения является упрощение проведения анализа, Матрица индикаторного устройства выполнена на одной бумажной подложке, на которую нанесены все

KoMflohåHòû биохимической рецептуры: фермент, фосфатный буфер, субстрат и индикатор. При этом в качестве субстрата берут а-тионафтилацетат, в качестве индикатора — дихлорфенилиндофенолят натрия, в качестве фермента — ацетилхолинзстеразу эритроцитов или зст.-разу

Чувствительность анализа до 1 мг/л, 1 табл.

Конструктивно инди .аторное средство выполнено в виде двух бумажных подло)кек, на одной из которых нанесены фермент и фосфатный буфер, а на другой подложке нанесен субстрат. Для удобства эксплуатации обе подложки соединены между собой, в частности выполненьl на одном носи еле.

В качестве фермента используется холинзстераза камбалы, иммобилизоьанная с помощью стабилизаторов: csxBp03bl и низкомолекулярногодекстрика Т10. В качестве субстрата служит 2,6-дихлориндофенилацетат. Бумагой служит хроматографическая бумага из целлюлозы типа Whatman ОЕ 81.

Процесс обнаружения пестицидов заключается в смачивании анализируемой водой ферментной подложки, инкубации ее в течение нормированног..з времени и после1701749 дующим контактировании субстратной подложки на ферментную путем подгиба обеих подложек.

Недостатком описанного средства является относительная сложность в проведении анализа, вызванная наличием нескольких операций, регламентированных во. времени, а именно необходимость использования специальной емкости с водой, (например, шприц-тюбик) для смачивания ферментной бумажной подложки, инкуба цию ее в течение нормированного времени ,и контактирования ее с субстратной бумажной подложкой путем их подгиба. Все это вызывает определенные неудобства в эксплуатации, требует точности проведения операций и определенного навыка.

Целью изобретения является упрощение проведения анализа.

Матрица (индикаторное средство) выполнена на одной бумажной подложке, на которую нанесены все компоненты биохимической рецептуры: фермент, фосфатный буфер, субстрат и индикатор. При этом в качестве субстрата берут а-тионафтилацетат, в качестве индикатора-дихлорфенилиндофенолят натрия, в качестве фермента— ацетилхолинэстераза эритроцитов крови человека или микробную зстеразу 1.

Пример 1, Процесс изготовления индикаторного средства.

Бумажную матрицу (подложку) пропитывают буферно-индикаторным раствором фермента, а именно сначала готовят раствор индикатора в буфере. Затем полученным раствором разбавляют сухую навеску фермента. Полученным раствором пропитывают бумажную подложку, после чего ее сушат на воздухе. Затем этот билет пропитывают бензольным раствором субстрата и повторно сушат на воздухе. Подложкой служит хроматографическая бумага.

По описанной технологии были изготовлены экспериментальные образцы индикаторных средств с содержанием ингредиентов, приведенных в таблице.

Затем индикаторные средства испытывались на чувствительность к пестицидам, обладающим антиэстеразним действием в воде. В качестве пестицидов использова5 лись хлорофос, ДДВФ и метафос. Чувствительность оценивалась по изменению окраски зараженного пестицидам индикаторного средства по сравнению с незараженным, а именно 2 индикаторных средства

10 параллельно погружались на 4-5 с соответственно в воду, содержащую пестицид и не содержащую его, и визуально наблюдали разницу в окраске обоих средств. При этом при погружении индикаторного средства в

15 чистую воду окраска индикаторного средства к 15 — 17 мин обесцвечивалась, в то время как при погружении в воду, содержащую пестицид, окраска индикаторного средства к этому времени сохранялась голубой, Чув20 ствительность индикаторного средства ко всем трем пестицидам практически одинаковая.

Результаты испытаний представлены в таблице.

25 Результаты испытаний показывают, что в диапазоне указанных в таблице концентраций хлорофоса, ДДВФ и метафоса индикатора средство обеспечивает надежную чувствительность к ним в воде в концентра30 ции 2 10 мг/мл и выше.

Формула изобретения

Матрица для обнаружения пестицидов, 35 обладающих антиэстеразным действием, включающая импрегнированную ферментом и фосфатным буфером бумажную матрицу, отличающееся тем,что,сцелью упрощения проведения анализа, бумажная 0 матрица дополнительно импрегнирована субстратом и индикатором, при этом в качестве субстрата берут а-тионафтилацетат, в качестве индикатора — дихлорфенилиндофенолят натрия и в качестве фермента—

45 ацетилхолинэстеразуэритроцитов кровичеловека или микробную эстеразу 1.

1701749

Субстрат, концентраЦня, 11

Индикатор, концентрация, И

Чувствительность к лестнцндан с концентрацне4! -10

5 10

2 10

Зстерааа концент1> Еlнл рация рН

+ +

+ + 4 +

+ +

+ +

+ +

+ . +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+

+

+ + +

+ + +

+ + +

+ + +

+ + +

+ +

+ +

+ + +

+ +

Составитель А.Семенов

Редактор Т.Пилипенко Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М.Шэроши

Заказ 4513 Тираж. Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Ацетилхолннзсте

pssa>

E/ȑ

50000

40000

0,05

0,1

0,2

0,25

0 3

0,33

0 35

0,4

0,5

0,7

6,0

7,о

8,0

8,7

9,0

9,3

10,0

10,5

11,0

1.10

1,5 ° 10

2 ° 10

4 10

5 10

7 10

8 10

1>5 10

2 ° 10

0> 15

0,2

0>25

0,27

О ° 3

0>34

0,37

0,4

0,45

О ° 5