Питательная среда для выделения бифидобактерий

Питательная среда для выделения бифидобактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для приготовления питательных сред для выделения бифидобактерий при различных исследованиях, например, при исследовании на дисбактериоз. Цель изобретения - повышение чувствительности. Питательная среда имеет следующее соотношение компонентов , г/1 л среды: ферментативный гидролизат мясо-костного фарша тюленя 11-15, ферментативный гидролизат печени тюленя 12-15; лактоза 9-12; хлорид натрия 4,5-5.5; агар-агар 0,75-1; вода дистиллированная остальное. Чувствительность предлагаемой среды рН 7,0 ±0,2 к росту тест-штаммов бифидобактерий . 2 табл. Ё

СОЮЗ СОПЕТСКИХ

СОЦИЛЛИСТИЧЕ СКИХ

РЕСПУБЛИК анs С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕ)НЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Остальное (21) 4780023/13 (22) 08.12.89 (46) 15.01.92, Бюл. N 2 (71) Научно-исследовательская лаборатория биологически активных веществ гидробионтов и Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского (72) И.В,Критская, Е.С.Гиршович, Л,А.Рязанова, Н.И.Бевэ, И.А.Бордашевская и

Г.И.Гончарова (53) 576.8.093 (088.8) (56) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам под ред. Биргера М.: Медицина, 1982, с, 78, Авторское свидетельство СССР

М 1402616, кл. С 12 N 1/20. 1986.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для приготовления питательных сред для выделения бифидобактерий при различных исследованиях, например, при исследованиях на дисбактериоэ.

Цель изобретения — повышение чувствительности среды.

Пример 1. Питательная среда для выделения бифидобактерий содержит сухую питательную основу из смеси ферментативных гидролизатов печени и мясо-костного фарша тюленя, а также хлорид натрия, лактозу, агар-агар при следующем соотношении компонентов, г на 1 л среды:

Ферментативный гидролизат мясо-костного фарша тюленя 11-15

Ферментативный

SU 1705341 А1 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для приготовления питательных сред для выделения бифидобактерий при различных исследованиях, например, при исследовании на дисбактериоэ. Цель изобретения— повышение чувствительности. Питательная среда имеет следующее соотношение компонентов, г/1 л среды: ферментативный гидролизат мясо-костного фарша тюленя

11-15, ферментативный гидролизат печени тюленя 12 — 15; лактоэа 9-12; хлорид натрия

4,5-5,5; агар-агар 0,75-1; вода дистиллированная остальное. Чувствительность предлагаемой среды рН 7,0 0.2 к росту тест-штаммов бифидобактерий 10 . 2 табл. гидролизат печени тюленя 12-15

Хлорид натрия 4,5-5,5

Лактоза 9 — 12

Агар-агар 0,75-1

Дистиллированная вода рн 70+02

Пример 2. С целью выявления оптимального сооношения основных компонентов при конструировании питательной среды опробованы различные ее варианты, Данные приведены в табл, 1. Основным критерием оценки качества среды в опытах является чувствительность ее к росту тест-штаммов бифидобактерий. Испытания сред проведено на тест-штаммах

Bifidobacterium longum Я-3 и

Blfldobacterlum bifidum ЛВА-3 при посеве методом десятикратных разведений.

1705341

Принимая во внимание данные табл. 1, оптимальной концентрацией гидролизатов печени и мясо-костного фарша тюленя является — 12-15 r гидропизата печени и 11--15 г гидропиэата мясо-костного фарша тюленя, так как при этом достигается максимальная чувствительность (10 8), а также не изменяются морфология и размеры клеток (по сравнению с контролем), При изменении концентрации указанных компонентов ниже 12 г (гидролиэат печени) и 11 г (гидролиэат мясо-костного фарша) уменьшается чувствительность среды, клетки утончаются, исчезает бифуркация.

Пример 3, Для приготовления 1000 мл питательной среды 11 г ферментативного гидролизата мясо-костного фарша, 12 г ферментативного гидролизата печени тюленя. 9 г лактоэы, 4,5 г хпорида натрия, 1 г агар-агара растворяют в небольшом количестве горячей дистиллированной воды, доводят объем среды до 1 л дистиллированной водой и кипятят 1-2 мин, не допуская пригорания, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают в стерильные флаконы по 300-350 мл. Стерилизуют текучим паром в течение 30 мин 2 дня или при 0,5 атм 30 мин 2 дня, Разливают в стерильные пробирки по 9 мл. Непосредственно перед посевом регенерируют кипячением в течение 30-45 мин и быстро охлаждают под струей холодной воды. Чувствительность среды определяют, высевая по 1 мл приготовленной суспенэии фекалий из разведений 10 -10

5 — 10 в полужидкую среду Блаурокка в модификации Гончаровой и в предлагаемую среду параллельно. Через 48 ч инкубирования делают мазки, начиная с последней пробирки, где имеется рост. Пастеровской пипеткой отбирают характерные колонии в виде гвоздиков, комет, крупинок, или в случае равномерного помутнения, производят забор со дна пробирки. На предлагаемой среде имеется видимый рост в 9-й пробирке, на контрольной (среда Блаурокка в модификации Гончаровой)- в В-й, При просмотре мазков, окрашенных по Граму, учитывают разведение, при котором в мазке выявляются грамположительные палочки, слегка изогнутые, с бифуркацией на одном или двух концах, расположенные в виде римской цифры Ч, гантепевидной формы, с булавовидными утолщениями ипи в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы.

В данном случае типичные клетки выявляются в мазке, сделанном из 9-й пробирки с предлагаемой средой и в 7-й с контрольной.

Таким образом чувствительность предлага..g — 7 емой среды 10, контрольной 10

Пример 4. Для получения 1000 мл питательной среды 15 г ферментативного гидролизата мясо-костного фарша тюленя, 15 г ферментативного гидролизата печени тюленя, 12 г лактозы, 5,5 г хлорида натрия, 0,75 агар-агара растворяют в небольшом количестве горячей дистиллированной воды, доводят обьем среды дистиллированной водой до 1 л и кипятят в течение 1-2 мин, не допуская пригорания. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в стерильные флаконы по 300-350 мл, стерилиэуют автоклавированием при 0,5 атм 2 дня по 30 мин. Разливают в стерильные пробирки по

9 мл, регенерируют кипячением и быстро охлаждают. В ампулу с лиофилиэированным штаммом вносят 1 мл физиологического раствора. растворяют содержимое и переносят в пробирку с питательной средой, считая это разведение за первое, Далее культуру титруют, методом десятикратных разведений до 10 в предлагаемой среде и

-9 в контрольной среде блаурокка и инкубируют в течение 48 ч при температуре 37,337,5 С. В данном случае на предлагаемой среде имеется видимый рост (4 колонии s виде "комет" ) на 9-ом разведении и 18 колоний на 8-ом. На контрольной среде в 9-ом разведении роста не было, на 8-ом 1 колония, на 7-ом — 11 колоний в виде комет. Иэ каждого разведения с видимым ростом берут мазки и окрашивают по Граму. Морфология клеток типична как в контрольной среде, так и в экспериментальной. Таким образом, чувствительность контрольной среды 10, предлагаемой 10

Пример 5. Дпя приготовления 1000 мп питательной среды 14 г ферментативного гидролиэата печени тюленя, 13 r ферментативного гидропизата мясо-костного фарша тюленя, 5 г хлорида натрия, 10 r лактозы, 1 г агар-агара суспендируют в небольшом количестве горячей дистиллированной воды, затем доводят объем среды до

1 л дистиллированной водой, кипятят в течение 1 — 2 мин, не допуская пригорания, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают в стерильные флаконы по 300350 мл, стерилиэуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин 2 дня. Непосредственно перед посевом среду, предварительно разлитую в стерильные пробирки по 9 мл, регенерируют кипячением в течение 30-45 мин.

Посев производят иэ разведений фекалий

10 -10 (по схеме, принятой для анализов на дисбактериоз), Посевы помещают в термостат на 38 ч. После инкубации делают мазки, начиная с последней пробирки, где имеется видимый рост. На предлагаемой среде в 8-й пробирке отмечается интенсив1705311

12-15

9-12

4,5-5,5

0,75-1

До 1л

Таблица 1

Чувствительность питательных сред с различным содержанием ферментативных гидролизатов печени и мясо-костного фарша тюленя при посевах тест-штаммов Blfldobacterlum

longum Я-3 и Blfldobacterlum blfidum ЛВА-3 ное помутнение, на контрольной среде в

7-й, Типичные клетки выявляются при микроскопии в 8-ом разведении в предлагаемой среде и на 7-ом в контрольной. Таким образом, чувствительность предлагаемой среды 10, контрольной 10

Пример 6, Для изучения качества предлагаемой среды для выделения бифидобактерий из фекалий проводят посевы из разведений 10, 10 в, 10, 10, 10 в, 10, которые затем помещают в термостат при

37 5 С на 48 ч. Делают мазки из всех пробирок с видимым ростом, окрашивают по Граму и микроскопируют, Результаты экспериментов показаны в табл. 2.

Таким образом, предлагаемая среда является более чувствительной, более простой по составу и стандартной.

Упрощение среды достигается уменьшением числа компонентов за счет исключения наиболее дорогостоящих и дефицитных из них (твина. цистеина}.

Для приготовления среды используется непищевое сырье, а именно отходы эверобойного промысла, что уменьшает ее себестоимость, Данная среда позволяет получить более точный диагноз бифидодефицита при исследованиях на дисбактериоэ, удобна в хранении и транспортировке, так

5 как может быть приготовлена в сухом виде.

Формула изобретения

Питательная среда для выделения бифидобактерий, содержащая питательную основу, лактозу, хлорид натрия, агар-агар и

10 воду,отл ичающа я с я тем,что,с целью повышения чувствительности. в качестве питательной основы она содержит ферментативные гидролиэаты мясо-костного фарша и печени тюленя при следующем

15 соотношении компонентов, г/л:

Ферментативный гидролизат мясо-костного фарша тюленя 11-15

Ферментативный

20 гидролизат печени тюленя

Лактоза

Хлорид натрия

Агар-агар

25 Дистиллированная вода

1705341

Продолжение табл. 1

Таблица 2

Сравнительные данные чувствительности экспериментальной и контрольной сред при посевах фекалий на дисбактериоз.

Соста в ител ь Г. Соболева

Редактор В.Трубченко Техред М.Моргентал Корректор M,Êó÷åðÿâàÿ

Заказ 170 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент, г. Ужгород, ул.Гагарина, 101