Способ выделения сперматозоидов
Иллюстрации
Реферат
Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии, и может быть использовано , в частности, для лабораторного анализа сперматозоидов. Целью изобретения является повышение выхода целеоо. о продукта . Поставленная цель достигается тем, что образец спермы смешивают с раствором гепарина до конечной его концентрации 2-3%с последующим центрифугированием. Способ позволяет повысить выход целевого продукта до 34,9%, что почти в 2 раза выше прототипа. 2 тгбл.
СО ГЗ С<-<",Е Г«", И<Х
СГ„<*И,;г;,:, -т;,; <",Г К< Х
Р< C Tr-::ЛИК
v.. <
<—
ГОСУДГ,РСт;1ЕГ; 1:-,1й:,0;.;Л гт
ГГ) <1".<<Г РЕТЕНИЯМ И О < К< Ц ИЯМ
ПР 1 ГКН Г СССР
С1Л . 1<"rI-
К Р.В ГОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (2 1) 4760694/14 (2 2) 2 1. 1 1. 89 (46) 23Л)1 92, Б<ол. М 3 (i l) Астсз".à»ñl:èll государст енный медиц11нский институт им./„B.Jl.8) (56) Функциональные методы исследования в биохимии,/Под ред. Ц1охно, — Киев, 1981, с,182, 104. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СП<ЕРМАТОЗОИДОВ. Изобретение относится к медицине, а
«,..1ен.".о к биохимии, и может Ь.ть испол<ьзовэ НО, в частности, дГ1 я лабораторного а 11 зли за сперм<зтсзои; Ов, Целью изобретениа явл".åòñà повышеi<1«: выхода;.елового продукта, Образец спермы ct- àlG»ýàcTñq с рзствоpG; ° ГЕПЭ 1<ца дО К Н, Ч-1С» КОН<,
3 ;Г. - с Г<осГ елу<ощи<1 центрифугировэнием. В
<ре Г "<зГ аемом eG „co зе использу отса носое с;.:С-.со гспа.",.1<<а аггл1отин<1рG;..=.-. cnenf l a T G 3 G 1Д =< . l l с С 1 Е Д t< Е . 1 "< Л 3 Г Г Л <С Т L l Н а Ц11 Я
G v "vGÏ« .ТСЯ <1 1 . P: j<»; Е ц<РМ ВЗаИМОд. <=,Ст;;;= 1 Г;-<1арина и елка лакTG åpp«на, ПОКРЫС3 3 ЖГО С<1Г.П. . а iGÇGÈv-,÷, У ХЭН;<ЗМ
Ра<ЗО L<:;<: < . ;<РИ ЕГ;1,,< С -Э "< а -, о СЧ«у о
1 сз 1 >;<
< < о м -г< <3 ° п;, Р ц о С.< - —, <-<т КО< (Я)ю A 61 К 3О/52У/< 01 N 33/48 (57) Изобретение относится к меди<<ине. э
ИМЕННО К бИОХИМИИ, И MGivGT б1-;тЬ ".ÑÏGË<ÇGвано, в частности, для лабораторного анэл11За СПЕрМатОЗОИдОВ. ЦЕЛЬ<О ИЗОбрЕто,ия
ЯВЛЯЕТСЯ BGBÈØÅl<::Å ВЫХСДР ЦЕЛЕ . Gl -, ПРОдукта, Поставленная цель достигается 1ем, что образец спермы смешива.от с раствором гепарина до конечной его концентрации 2 — Зо/; с последу<ощим центрифугировэнием. Способ позволяет г;овысить выход целевого продукта до 84,9,ß., что почти в 2 раза BbllLå прототипа. 2 Tc,5ë. троль за осаждением сперматозоидов проводится путем подсчета их числа в надосадочной жидкости, при использовании
ГЕП,:рииа GG3., GGTG.-<;;:-. МЕноЕ 8ЬР;. СПора!Лтозоидов. Т:ким образом. использование гепарина приводит к повышени:a вьxo„.à сперматозоидов, Прс,","агае.1ь<Й спосоо апробирова.- в результате исследований 23 образца спермы. Во всех Ho"i.3àäåíèëõ получ H положительный 3<."фект — повышен 1;=
-ффехт1<вн«- ти < Г1«-Г)ЕР«j эбл 1},"<;,GG< al ия
В табЛ.1 ПОКаЗзна 3:"« .;. .<ССГЬ GG3»:дЕНИР СПЕР113TGÇGv,, оа GT КО<<ЦЕ<< < Раи«<; Г< Г<.:рин:.
Пример 1, СГ«ер<.<Г) QT боль.;его С., 2 <: ь дов 30 мл< СГ<е<1мь< с .1 ..1Бл 3Г .,6) г.1»
170. „;-, 8
5 -,-íого рэст;-.".,", Гепэрпнэ (ло конечной ко 1ц >lTP;ll„ èë,i,, ) !1 g".,э "9 . ек ГP:.i 7Ã"«РУют при 000 об/v . l! те е;l"..-: 10, ."1".. < 1Ол« ценный осадок использу От для приготовления
133K0lh В надое" «:.Гцной::;идкости I OÐc÷cT спер;.;этозоид, "; 2a 10 .
Пример 2. Эх:;, л«лт бель ного А,, 18 лет, сбьсм 3 0 мл, кол .т :;ство сперматозоидов
100 .10 . Для:i дел1«ния спер 1,".то:оидов
2,0 м.л спер лы см «. О«1в=.оТ с 0,5 глл 10,,,-ного гепэринэ (до ro:- е-:: " l конце Tpì,;1!I 2;, ) и далее центрифугиру От при 3000,б/м <н в течение 10 мин. Полуценнь и осадок спсрматозоидоа испол.;зу от для выделен.1я о;;росина. В надосэ,,Оц:. Ой жидкости подсчет сперматозоидов ... "ииют Око" о 17 ° 10з.
Пример 3. Эхг, лят здоров ° oãо человека 3., 22 лет, сбь".. 1 2,5 мл, испо сперматозоидов 53 10 . Для выделения 6 сперматозоидов 2,0 мл спеомы смсжива от с 0.5 мл 10,-"oro гепаринэ (до конечной концентрации 2";,) и далее центрифугируloT и ри 3000 об/м:;и в течение 15 мин. ялуценный осадок содержит сперматозоиды. В нэдосадочной жидкост1л осталось 11,2 10" сперматозоидов.
Пример 4. Эякуллт здорового человека M.. 33 года, севела 4,5 мл, число спорма-,озоидов 7о.0.10 . Для выделения
СПЕрМатОЗОИр-ОВ 3Я гя СПЕРМЫ С,.1ЕЛИВаЮТ с 3,0 мл 6%-ного раствора гепэрина (до гоневкой кон„е, трэци13) .,) и центрифугируют при 3000 сб/м" н « 5 ми! ь Пол ценя ь«й
ОСС«ДО К ИСПОЛ «З /«О Г ДЛЛ ПОЛ ЦЕ 1«ИЯ с К РОСИ««! 3
0 надосадоцн ой хгидкости осталась 8,2 10" спер латозои яв.
П р и M е р 5. Эхr! "RT здо".ОвогО целсвека П.. 29 лет, Ооьем 5,0 ll, ко .!.цество с ерматозоидов 130 10 . Для выделения сперматоэои,,оа 3,0 мл спермы с;.сшивают с 1.0 мл 10 -ного раствора гепэрина (цо коне ной кскцентрэци;; 2,5, ) и . еитрифугируат при СГО сб/:....;. 15:-л.«;;. Полуценный осадок. исполь.-уют „-,ля получен 1я экросинэ. Б кэдосэдоцной жидкости остав
rnc!. 29 10 сп o. ",.3Toçoè,o!i.
Пример 6. Эякулят больного A., 42 года, Обьем 3,2 мл, Количество спер;лэтоэо5 идол 65 .10 . Для выделен;1я сперматозоидов 3,0 мл спермы смешивают с 1,0 лл
10,:;-ного раствора гепаринэ (до конечной
l:окцентрации 2,5%) и цснтрифугируют при
30QQ об/мин 10 мин. Полученный осадок
10 используют для изготовления мазков. В нэдосадоцной жидко .ти число сперматозоидов 15 10 .
Способ неосуществим при концентрациях гепэринз менее 2%, так кэк при этом
15 "-нацительно снижается эггл:отинэция сперматозоидоь. При концентрациях более 3% резкого увеличения агглю аниру ощей способности гепэрина не наблюдается и не имеет смысла применять более высокие концентрации (табл.1).
20 В тэол.2 показана эффективность выделения сперматозоидов.
В предлагаемом способе по сравнению
° с известными эффективность выделения сперматозоидов составляет 84,9%. Прове25 денное выделение fio известному способу показало, что осаждается только 47,4% спе матозоидов (табл.1), Таким образом, предлэгае;лый способ почти в даа раээ (точнее в 1,79 раза) более эффективен.
30 Указанные преимущества позволяют использовать предлагаемый способ в лабораторном исследовании спермы и научных исследованиях по биологии и биохимии репродукции.
Формула изобретения
Способ выделения сперматозоидов, включающий центрифугировэние образца спермы при 3000 об/мин в течение 10-15
40 мин,отлицà!Oщийся тем,что,с целью повышения выхода целевого продукта, к образцу сп рмы добавляют гепарин в конечной концентрации 2-3%.
1705620
Таблица 1 4" -, ос
Таблица 2
Состзеитель !l,Тс„"енина
Техред M.Моргентал Корректор С.Черни
Рсдз <тор Л.Шуллз
П i .—:,-. - ..-.;.--.;; —:„.-:,:,.1 о;, "л.; .=.. "Патент", г, огород, ул.Гагарина, )Oi
Заказ 220 Тираж Подоисное
БИ 1. .П ., Государстл .-". îãñ wã;..òàòä по иеобретенил,1 и отхрытия л при ГКНТ СССР
-г,ез .,- =. г» о "y÷ нл6