Способ индикации возбудителя чумы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии , в частности к специфической индикации биологических объектов методом флуоресиир ющих антител. Целью изобретения является повышение чувствительности способа. Поставленная цель достигается тем. что биопробным животным подкожно в область спины вводят 0.5-1 .С мл исследуемой пробы. Исследуемый материал вводят в одном шприце г. равным объемом смеси гепэричизированной крови морской свинки, желтка куриного яйца и кортизона. В месте введения делают мазок-отпечаток, которь.й фиксируют в хлороформе с последующей обработкой пюминесцирующими антителами и учетом результатов. Способ позволяет выявлять отдельные клетки еозбудит-:-ля. введенного биопробным животным 2 i ч б.г

СОЮЗ CQBt;ТГких

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕспуБлик (.Г!

ГОСУДАРСТВЕННОЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4813098/13 (22) 10.04.90 (46) 23.01 92. Бюл. N- 3 (71) Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья (72) 8 И.Щедрин и Г.И.Гямкин (53) 576.8.073.3(088.8) (56) Методическое пособие для врачейзпидемиологов и микробиологов. — М.: Минздрав СССР, 1972, с,34-35, 48-49, (54) СПОСОБ ИНДИМцИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ

ЧУВАЛЫ (57) Изобретение относится к микробиологии в частности к специфической инд«лации биологических объектов методом

Изобретение относится r микробиологии, в частности к специфической индикации биологических объектов методом флуоресцирующих антител.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Пример 1. Приготавливают смесь гепаринизированной крови морской свинки с желтком куриного яйца в соотношении 1:1 в количестве 2 мл. К смеси добавляют 2 мл исследуемого материала, содержащего 10 микробных клеток возбудителя чумы в 1 мл, и кортизон из расчета 5 мг на одно животное. Приготовленную смесь набирают в шприц и вводят под кожу спины четырем белым мышам поровну. Две белые мыши вскрывают через 24 я, а две другие — через

48 ч. С места введение делают мазки-отпечатки, фиксируют в хлороформе 10 мин и

» . Ж«» 1707080 А1 (Ял5 С 12 0 /04 6 01 М 33/569

РЕТЕНИЯ флуоресн«р ощих антител. Целью изобре тен«я является повышение чувствительности спссоба. Поставленная цель достигается тем. что биопробным живо-ным ппдкожно в область спины вводят 0.5-1.0 мл исследуг лей пробы. Исследуемый л.атер«ел вводят в одном шприце с. равным объемом смеси ге ep«-II зиоованной крови морской свинки, желтка куриного яйца и кортизона.

В месте введения делают мазок-отпечаток, которь,й фиксируют в хлороф"рме с последующей обработкой лю .инесцирующими антителами и учетом результатов. Способ позе яет BI. =;lRTb отдельные к "етки еозбуди;-.л:, введенного биопоабнь rI ж. вотным T -3бе окрашивают коммерческими флуоресцирующими и 1муноглобулинами.

Под люминесцентным микроскопом через сутки при просмотре 10-15 полей зрения обнаруживают единичные микробные клетки, а через 48 ч — в каждом поле зсения обнаруживают 10-15 л1икробных клеток.

Пример 2, Приготавливают смесь гепаринизированной крови морской сВ .нки с желтком куриного яйца в соотношении 6.4 в количестве 2 мл. К смеси добавляют 2 л л исследуемо.о материала, содержащего 10 микробных леток возбудителя чул1ь| в 1 мл, и кортизон из расчета 6 мг на одно животное. Приготоеленную смесь наб«раот в шприц и El. äÿò под кожу спины четырем белым мыша л поровну. Две белые мыши вскрывают через 24 ч, а две другие — ерез

48 4. С л еста введения делают мазки-0Т печатки, фиксируют вхлороформе 15 мин и ок1707080

Таблица1

Примечание. "+ — в каждом лоле зрения обнаружено 10-15 микробных кле;ок;

"Ед. кл." — при просмотре 10-15 полей зрения обнаружены единичные микробные клетки: "-" — возбудитель не обнаружен. рашивают коммерческими флуоресцирую щими иммуноглобулинами. Под люминесцентным микроскопом через сутки при просмотре 10-15 полей зрения обнаруживают единичные микробные клетки, а через

48 ч в каждом поле зрения обнаруживают

10-15 микробных клеток.

П р и. м е р 3. Приготавливают смесь гепаринизированной крови морской свинки с желтком куриного яйца в соотношении 7:3 в количетве 2 мл. К смеси добавляют 2 мл исследуемого материала. содержащего 10 микробных клеток возбудителя чумы в 1 мл, и кортизон иэ расчета 7 мг на одно животное. Приготовленную смесь набирают в шприц и вводят под кожу спины четырем белым мышам поровну. Две белые мыши вскрывают через 24 ч, а две другие — через

48 ч. С места введения делают мазки-отпечатки, фиксируют в холроформе 20 мин и окрашивают коммерческими флуоресцирующими иммуноглобулинами. Под л юминесцентным микроскопом через сутки при просмотре 10-15 полей зрения обнаруживают единичные микробные клетки, а через 48 ч в каждом поле зрения обнаруживают 1О—

15 микробных клеток.

Результаты биопробы представлены в табл.1 и 2.

Таким образом, при использовании известного способа повышается чувствитель5 ность биологической пробы при обнаружении возбудителя чумы прямым методом флуоресцирующих антител.

Формула изобретения

Способ индикации возбудителя чумы, 10 включающий введение исследуемого материала животным с последующим взятием патологического материала, изготовлением мазков-отпечатков, их фиксацией, нанесе-нием флуоресцирующих иммуноглобулинов

15 и учетом результатов при люминесцентномикроскопическом исследовании, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, исследуемый материал предварительно смешивают с гепа20 ринизироеанной кровью морской свинки и желтком куриного яйца в соотношении

1:1:1-1:7:3 соответственно, к полученной смеси добае яют 5 — 7 мг кортиэона, введение осущсстеляют подкожно в области спи25 ны в дозе 0,5- 1 мл, патологический материал берут с места введения, а фиксацию мазков осуществляют хлороформом в течение 10-20 мин.

1707080

Т а б л и ц а 2

Исследуемый матс риал

Количеств з микробных клеток возбудителя чумы в 1 мл

Результаты ндикации возбудителя чумы методом фд через 24 и 48 ч после постановки биопробы способом пре лагаемьм

104

;,Ог

Возбудитель чумы (монокультура) Ед. кл.

++

Ед. кл.

»tI»

tt» н

+ +.т

Ед, кл, 4Возбудитель чумы в смыве почвы

Ед. кл.

Е д кле

++

Ед, кл.

Возбудитель чумы в смыве фуража

Ед. кл.

Ед. кл.

44

4-+

+

Ед, кл.

II

I I»

П р и M е ч а н и е. "4+ - в каждом и .-е

100 и 1кpобныx кле-.ок; зрения обнаружечо 10"Ед.кл." - при поосмо зрения обнаружень еди ки; "-" - воэбудител зречля =бнер, сно в к=..-дом поле

15 микробнь х клеток; тре 10-15 г,олей ницчье микробнье клеть не обнаружен

Составитель А,Федоров

Редактор И.Дербак Техред М.Моргентал Корректор Н.Король

Заказ 242 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб;, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101