Способ прогнозирования рецидива тиреотоксикоза

Способ прогнозирования рецидива тиреотоксикоза

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования возникновения рецидива у больных тиретоксикозом. Цель изобретения - повишсние точности способа. У больного осуществляют забор крови, выделение сыворотки и лейкоцитов с последующим выявлением антител к рецептору тиреотропина, HLA-B 8, HLA-DR антигенов, количество Т-хелперов, Т-супрессоров, вычисляют соотношение между Т-хелперами и Т-супрессорами и при обнаружении антител к рецептору тиреотропина, HLA-38, HLA-DR. антигенов и при величине соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам, большем 2, прогнозируют возникновение рецидива у больных тиреотоксикозом. По сравнению с прототипом увеличивается точность прогноза на 35%.

. Я0„„170753 сооз соеетсних со.удлистичесних ресчуьлик

А1 (g))5 С 01 N 33!53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ с рецепторами.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО изоьретениям и Открыл иям при Гннт сссР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4768141/14 (22) 11. 12. 89 (46) 23.01.92. Бюл. Р 3 (71) Ленинградский педиатрический медицинский институт и Институт акушерстза и гинекологии АМН СССР (72) A.Н.Бубнов и Н.Н.Ткаченко (53) 615.574(088.8) (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦ1ЩИВА

ТИРЕОТОКСИКОЗА (57) Изобретение отнгсится к медицине и может быть использовано для прогнозирования Bos -.èê-.свения рецццива у больных тиретоксикозом. Цель изобретения — пошш ение точности способа.

Изобретение относится к медицине, а именно эндокринологии, и может быть использовано при хирургическом и конI — сервативном лечении диффузного токсического зоба.

Цель изобретения — повышение точности прогнозирования рецидива тиреотоксикоза.

Способ осуществляют следующим образом.

Определение антител к рецептору тиреотропина проводят с помощью коммерческого набора фирмы "Mallincrodt"

ФРГ. Метод основан на вьггеснении бычьего тиреотропного гормона (БТТГ), меченого < I (I БТТГ) из рецепторов для тиреотропного гормона (ТТГ) на

Ct меибранах т п еоцн-.ов антителами к рецептору ТТГ. 1ем больше.антител находится в исследуемой сыворотке, тем

-меньше I БТТГ остается связанным

У больного осуществляют забор крови, выделение сыворотки и лейкоцитов с последующим выявлением антител к рецептору тиреотропина, Н?.А-В 8, HLА-DR> антигенов, количество Т-хелперов, Т-супрессоров, вычисляют соотношение между T-хелперами и Т-супрессорами и при обнаружении антител к рецептору тиреотропина, HLA-B8, HLA-DR антигенов и при величине соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам, большем 2, .прогноз;руют возникновение рецидива у больных тиреотоксикозом. По сравнению с прототипом увеличивается точность прогноза на 35Х.

В виалы из набора с лиофилизи1 ованным 1 БТТГ и ТТГ рецепторами до- Я

125 бавляют по 2,5 мл дистиллированной воды. Для полного растворения каждую дан виалу оставляют стоя т ь в т еч е ние .

10 мин, периодически встряхивая, избегая образования пены. Реагенты сле- 4 дует использовать однократно, хране- Л ние не рекомендуется. 1,-А...

В соответствующие пробирки вносят по 50 мл сыворотки крови больного, сыворотки для позитивного контроля р (из набора), реферанс-сыворотки

1 (из набора). Для определения неспецифического связывания (NSB-non specific 1пд п8) вносят 50 мл веференс сыворотки в отдельную пробирку.

В пробирки добавляют по 100 мл ТТГрецепторов (из набора) и тщательно перемешиварт на вертушке (Чогсех).

3 170753

Для определения NSB. в пробирку вместо ТТГ рецепторов добавляют

100 мл дистиллированной воды.

Инкубируют. пробирки при:20 С в течении 20 5 мин.

В каждую пробирку затем добавляют по 100 кл I БТТГ и тщательно перемешивают (Vortех). Инкубируют при

20 < в течение 2 ч. Добавляют 1 мл полиэтиленгликоля (ПЭГ, из набора) и тщательно перемешивают. Центрифугируют в течение 30 мин при В 2500 g (рефрижераторная центрифуга). Сразу после центрифугирования тщательно аспирируют сунернатаит. Преципитат не следует аспирировать.

Оставшуюся активность подсчитывают на -счетчике. Расчет проводят по формуле. 0

Г срш исследуемой сыворотки1

Р 1 х срш референс-сыворотки х100 °

5 где F — содержание антител в ТТГ-рецепторе, cpm †количество импульсов в 1 мин.

Проба считается положительной, если

F p 15K.

Неспецифическс е связывание должно 0 быть (97, оно рассчитывается по формуле

cern NSB

Общая активность

Определение антигенов системы HIA осуществляют при помощи панели типирующих сывороток ЛенНИИ гематологии в стандартном микролимфоцитотоксическом тесте двуступенчатым методом.

2 мл гепаринизированной крови (100 ЕД гепарина на 10 мл крови) смешивают с равным объемом среды Хенкса и наслаивают на градиент плотности . фиколл-верографин (плотность 1,076—

1,077); центрифугируют 30-40 мин при

200 g, аспирируют лимфоциты, находящиеся в интерфазе, и переносят в мерную пробирку; добавляют 2 объема трисбуфера и центрифугируют 10 мин при

200 g, супернатант удаляют, а осадок ресуспендируют в растворе Хенкса, доводя концентрацию лжфоцитов до

2-4 х 10 кл/мл.

Типируюшие сыворотки в количестве

1 мл вносят в лунки планшетов Тераа- 5 ки под вазелиновое масло.

Лимфоцитарную взвесь вносят в те же лунки по 1 мл и инкубируют в тече8

4 ние 30 мин при -2 Ñ вместе с типирующей сывороткой. В каждую лунку добавляют по 5 мл свежеразмороженного кроличьего комплемента и инкубируют при

20 С 1 ч.

Планшеты встряхивают для удаления ваэелинового масла, вносят в каждую лунку 1 мл трипанового голубого, через 10 мин избьггок краски удаляют стряхиванием и учитывают реакцию, клетки, разрушенные антптелами, окрашены в голубой цвет и имеют нечеткие контуры.

Определение Т-хелперов (Т ) и Тсупрессоров (Тс-) производят с помощью коммерческих моноклональных антител (МАг) ОКТ-4 и 0КТ-8 (0rto Diagnostics) в комплементзависимом микролимфоцитотоксическом тесте.

Для этих целей лимфоциты периферической крови выделяют на градиенте плотности фиколл — верографин по методу Boyum А.

Лимфоциты собирают из интерфазы с помощью пастеровской пипетки, дважды отмывают в среде 199 и ресуспендируют в среде РРИТ-1640, содержащей 10Х эмбриональной телячьей сыворотки в концентрацнь (2-4)х10 кл/мкл.

В лунки планшета Терасаки вносят под слой вазелинового масла по 1 мкл

Иа в разведениях (1:4)-(1:640) в среде РРИТ 164. ) с 10 эмбриональной телячьей сыворотки, используя 3 лунки для каждого разведения. В каждую лунку добавляют по 1 мкл лимфоцитарной взвеси в концентрации 2-4i10 кл/мкл и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч. В каждую лунку добавляют по 5 мкл цельного кроличьего комплемента и инкубируют 2 ч при комнатной температуре. Затем в каждую лунку вносят по 2 мкл 5Ж-ного раствора эоэина на физиологическом растворе, инкуби1 руют 5 мин при комнатной температуре, добавляют по 1 мкл 377-ного формальдегида (РН-7,n).

Клеточную суспензию иэ каждой лунки переносят в камеру Горяева с помощью микрошприца, где и учитывют результаты реакции, подсчитывают количество нежизнеспособных (окрашенных) и живых клеток (н" 200 клеток).

Реэульта рассчитывают по формуле

А-B

ЦИ= — --- 100, 100-.В

I где А — количество нежизнеспособных

1707538 клеток в опыте, .;

 — количество нежизнеспособных клеток в контроле, .;

ЦИ вЂ” цитогоксическпй индекс, Пример 1. Больна 3. 18 лет, 5 поступила в клинику кафедры хирурги" ческих болезней Р 1 ЛПЖ! 18. 06.88 r. для оперативного лечения с диагнозом:

ДТЗ. Тиреотоксикоз П. Офтальмопатия П, р в состоянии медикаментоэного эутиреоэа.

22.06.88 r произведена субтотальная резекция щетов|щной железы с оставлением у левбго верхнего полюса 6 г 5 ткани железы. Послеоперационный период без осложнений. Выписана на 8-й день после оперативного вмешательства, зэживление пег prinun. Осмотрена через 1 месяц после операции. Больная в эутиреоидном состоянии. Проведено определение антител к рецепторам тиреотропина, иммуногенетическое типирование по антигонам HIA и субпопуляций лимфоцитов описанными выше методами.

Результаты: TRAB — 18K, НЬА *енотип

А2, 19 В8, 17 СИЗ DR 1 3 Т /Тс- 3, 2.

В виду того, что данные соответствовали предлэгаемо:iy методу, прогнозирована высокая степень риска воэникно-!р вения рецидива тиреотоксикоза.

Осмотрена через 6 месяцев после оперативного вмешательства. Жалобы на сердцебиение, чувство жара, повыг енную возбудимость. Объективно: эмоциональна лабгпьна, тахикардия 95 Ъ!, тремор пальцев рук. Увеличения тиреоидного остатка не выявлено.

При контрольном лабораторном обследовании обнаружено: поглощение I,p 31

6 ч — 64 ., 12 ч — 78, 24 ч — 76,, 48 ч — 52 (N 35 ма»о) Т

3,4 нмоль/л (N=1, 5 — 2, 7); Т вЂ” 190 нмоль/л (N=105-170) .

Диагностирован ред щив тиреотокси- > коза. Больная направлена в эндокринное отделение для проведения тиреостатической терапии.

П р и и е р 2. Больная И., 21 г, поступила в хирургическую клинику

22.12.87 г. с диагнозом: ДТЗ III.

Тиреотоксикоз II в состоянии медикаментс чного зут1",.ео 3э для оперативного лечения .

26.12. произведена субтотальная резекция щитовидной железы с оставлением у левого верхнего полюса 6 r ткани щитовидной железы.

Послеоперационный период без осложнений, эаживление рег рг!.гаиш. Выписана на 8-й день после оперетт:явного вмешательства.

Осмотрена через 1 месяц после операции. Жалоб нет, больная в эутиреоидНОМ СОСТОЯНИИ

Произведено определение антител к рецептору тиреотропина, иммуногенетическое типирование по антигенам системы HIA, определение субпопуляций лим4оидных клеток методами, описанными выше.

Результаты: TRAB — 23 ; Н1.А генотип: А1, 19 В7, 40 СУ4, DR 1,4, Т» /Tc — 1,4. Результаты соответствуют прототипу исследования.

Осмотрена через 1/2 года после операции. Жалоб нет. Больная в состоянии кли птческого эутиреоэа.

Лабораторные исследования: погло" щение I 6 ч — 14, 12 ч — 21 ., 24 ч — 28 ., 48 ч — 18 (N 35 .ya„c).

Т g — 2, 1 нмоль/л (N 1, 5-2, 7); Т вЂ”

130 нмоль/л (N=105-170).

Осмотрена через год после операции. Клинический эутиреоз. Т вЂ”

2,2 нмоль/л; Т4 — 120 нмоль, ..

Через полтора года после .. ер ции больная в эутиреоидном состоянии, T> - 1,9 нмоль/л, Т вЂ” 110 нмоль/л.

Таким образом, использование предлагаемого способа обеспечивает повышение точности прогнозирования возникновения рецидива тиреотоксикоза на 35 по сравнению с известным способом благодаря выявлению всего комплекса нарушений иьмунного гомеостаза, что позволяет использовать его в клинической практике для диспансеризации людей группы риска, имея целью раннюю диагностику и коррекцию возникшего нарушения. С помощью предлагаемого способа точность диагностики составляет 81,.4, а с помощью известного—

46, 1Х.

Формула изобретения

Способ прогнозирования рецидива тиреотоксикоза, включанлчий забор крови у больного, вьщеление сыворотки и определение в ней антител к ре ;сптору тиреотропина, о т л и ч а ю ц и и с я тем, что, с целью повыпения точности способа,из крови больного дополнительно вьщеляют лимфоциты и определяют антигены Н!.А-В8, Н!.А-DR, 7 1707538 8 количество Т-хелперов, Т-супрессоров, HLA-BS, HLA-DR антигенов и соотношевычисляют соотношение между Т-хелпе ния Т-хелперов к Т-супрессорам, больрами и Т-супрессорами и при выявле- шем 2, прогнозируют рецидив тиреотокнии антител к рецептору тиреотропина, сикоза у больного.

Составитель В.Литовченко

Редактор H.Ëàçàðåíêî Техред М.Моргентал . Корректор А.Обручар

Заказ 264 Тираж Подписное чКИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, le-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101