Способ моделирования гиперкоагулемии

Способ моделирования гиперкоагулемии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии и может применятьсяпри моделировании гиперкоагулемии. Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа, приближение модели к естественной патологии и повышение длительности гиперкоагулемии . Животному однократно внутривенно вводят высокодисперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированные этомами кобальта из расчета 7-15 мае.%, в количестве 0,05-0.5 г/кг массы при рН 7,0- 8,0 со скоростью 0,02-0.05 г/мин. Изосретение может быть использовано в кэчес ге теста для определения функциональны. возможностей крови. Ё

СО 03 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК а >s G 09 В 23/28

ГОСУДАРСТВС ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

СО,> (21) 4797238/14 (22) 01.03.90 (46) 23.01.92. Бюл. М 3 (71) Лаборатория медицинской кибернетики

Института кибернетики АН ГССР (72) M.Ã,Àõýëàÿ, M.С,Какиашвили, B.Ï,Áåрия и Е,P.Âoëüòåð (53) 615.475(088.8) (56) Зубаиров Д.М. Биохимия свертывания крови. М., 1978, с.161-166.

Авторское свидетельство СССР 1 1336088, кл, G 09 В 23/28, 1985. (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ГИПЕРКОАГУЛЕМИИ

Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии. а именно к способам моделирования заболеваний внутрисосудистого свертывания крови, и л1ожет быть испрольэовано в мед, î-биологических целях в качестве теста для определения функциональных возл1ожностей крови.

Известен рефлекторный способ моделирования внутрисосудистого свертывания крови путем прямого активирования контактной фазы однократным внутривенным введением хлористоводородного адреналина в количестве 0,5 мг/кг.. Длительность ГК-состояния 15-30 мин с пиком на 5 мин после введения препарата. Процесс сопровождается возрастанием тромбоцитарного материала из зндотелиальных клеток и троекратным увеличением активности тромбоцитарного фактора, причем активность

„„SU „„1707618А1 (57) Изобретение относится к экспериментальной медицине и биологии и может применяться при моделировании гиперкоагулемии. Цель изобретения — повышение воспроизводимости способа, пр1ближение модели к естественной патолог и и повышение длительности гиперкоагулемии. Животному однократно внутривенно вводят высокодисперсные частицы ма-"етита размером 8-15 нм, допированные атомами кобальта иэ расчета 7-15 ма",, в количестве 0,05 — 0.5 г/кг массы при рН 7,08,0 со скоростью 0,02-0.05 г/мин. И зо рет.ние может быть исгользоэан в ачес; е теста для определения функциснальнь л возможностей крови. тромбоцитарного фактора -видетельст;ет об активации фактора XII.

Недостатками способа являются н; кая воспроизводимость и малая продо".;ëi .—.е-ьность ГК. Это свя ано с быстр v ...е($33 цией хлopистоводоpодного адрен":-.ина и ее захватом клетками ретикулоанд;елиальной системы, в результате чего они исчезают из кровеносной системы. Кроме того. хлористоводородный адреналин активно действует íà л ногие функциональные звенья организма, регулирующие процессы кровообращения (усиление и учащение сердечных сокращений, расширение коронарных сосудов, сужение артериол и капилляров и др.). что затрудняет интерпретацию причинно-следственных сьсэей модели.

При атом количество введенного биологически активного препарата почти в 20 раз

1707618 атомами кобальта иа раската 7-15 мас.1ь а са превышает норму (в норме 30 нг/мл адреналина), что нарушает физиологическое состояние организма.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ моделирования ГК путем внутримышечного однократного введения ботулинического токсина типа С в дозе 2,2-2,5 мышиных ЛД5о/кг тела. При этом ГК длится 24-48 ч и наступает спустя

6-12 ч после введения препарата, медленно нарастая.

Однако процесс идет с огромным зкзогенным токсикозом, так как повреждаются все ткани организма, включая кровеносную систему. У животных возникают длительные лихорадочные состояния, мышечная слабость, парезы туловища и кснечностей, резко угнетается фагоцитоз. Все это приводит к частой гибели животных, которые погибают через 1-3 су. при явлениях диспноэ, вследствие чего воспроизводимость способа невысокая, модель сильно зависит от чувствительности 4, ного и сверхтонкой дозировки, так как 1U мл токсина приводит к мгновенной гибели животного. Процесс развития ГК протекает эа счет реакции сосудистой системы в ответ на интоксикацию, минуя естественныи и ключевой пункты внутренней свертывающей системы — контактный фактор свертывания Xll и гепатоциты, иэ которых начинается путь фибриногена, Все эт-. выключает иэ рассмотрения важные звенья свертывающей системы, в, альных условиях обеспечивающие включение свертывающей системы (адсорбция и ак-; вация фактора Xli), пролиферацию и транспорт фибриногена, т.е. модель неестестве-<на и недостаточно общая.

Кроме того, анализ модели усложняется тем, что отсутствует возможность управления процессами распределения и накопления активного агента. а также виэуализирования и локализирования его, не нарушая жизнедеятельности организма.

Контроль ГК возможен тояько по биохимическим анализам, которые при остро протекающих клинических проявлениях дают трудно идентифицир»емые результаты.

Целью изобретен,1я является повышение воспроизводимости способа, приближение модели к естественной патологии и повышение длительности гиперкоагулемического состояния.

Способ осуществляют следующим образом.

Лабораторному животному внутривенHQ вводят высокодисперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированныв

55 количестве 0.05-0,5 г/кг массы при рН 7 08,0 со скоростью 0.02-0,05 г/мин.

Готовят водный коллоидный раствор феррита кобальта Co>Fe3-õÎð дисперсностью 8-15 нм, для чего берут 10,4 г хлорного железа ГеС!з7Н20 и растворяют в 100 мл дистиллированной воды, аналогично берут эакисное сернокислое железо РеБОлбНгО и двуххлористый кобальт CoCIz2HzO общей массой 5,6 г, причем количество железа (il) должно превышать количество кобальта (II), и также растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Затем берут 10,0 г гидроокиси натрия NaOH и растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Растворы трехвалентного и смеси двухвалентного железа с двухвалентным кобальтом смешивают и медленно капельно переливают в раствор гидроокиси натрия, непрерывно перемешивая смесь.

На дно выпадает темный осадок кристаллов феррита кобальта. Полученный осадок декаптацией промывают дистиллированной водой до рН 7,0 — 8,0. Далее раствор фильтруют через двойную фильтровальную бумагу и пасту феррита кобальта массой 4,8 г переносят в сосуд и доводят объем дистиллированной водой до 50 мл, т.е. в 1 мл находится 0,1 г высокодисперсного феррита кобальта или 10 -10 част. Полученную

15 16 коллоидную суспензию набирают в шприц в количестве 0,5-5,0 MR и вводят внутривенно медленно в течение 1-5 мин иэ расчета

0,05-0,5 г/кг массы животного.

Через 0,5-2,0 мин после введения наблюдают перв-. е признаки ГК-состояния: время свертывания крови 4-8 мин, время кровотечения 20-55 с, протромбиновый индекс 40-607р. тромбоциты 40-70 . В дальнейшем на протяжении двух-трех суток уровень ГК остается стационарным, после чего наблюдается монотонное снижение этого уровня в течение 24-72 ч до нормы.

Клиническая картина без отклонений. Сердечно-сосудистая система, выделительные органы, дыхание и ориентация животного в пределах нормы.

Таким образом, модель гиперкоагулемического состояния воспроизведена с первой минуты после внутривенного введения препарата, функционировала 72 ч с признаками ГК без отклонений в клинической картине состояния животного.

Высокодисперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированные атомами кобальта, введенные внутривенно, функционируют в кровеносной системе 24-48 ч, что подтверждено методом ферромагнитного резонанса и электронно-микроскопически.

В дальнейшем частицы перераспределяютв печени и селезенке, причем внешним

1707518 магнитным полем напряженность до 5 кАlм имеется воэможность регулировать это перераспределение, удерживая частицы в заданном месте. Геометрические размеры используемого вещества соизмеримы с биологическими молекулами, что позволяет отнести их к промежуточным между инородным телом и биосовместимым материалом.

Обладая высокой поверхностной энергией, они адсорбируют контактный фактор Xll, вызывая его активацию и запуск всей цепи биохимии свертывания крови. Имея столь малые размеры, комплекс частицы — фактор

Xil остается соизмеримым с размерами пор и каналов микроциркуляторного русла, вовлекая в рассматриваемую модель все уровни кровообращения. После исчезновения частиц иэ кровеносного русла ГК поддерживается частицами, аккумулированными в клетках РЭС. Через определенное время частицы переносятся s гепатоциты. причем процесс этот можно наблюдать электронномикроскопически. В связи с тем, что концентрация высокодисперсных частиц определяют активность фактора Xll, то по концентрации можно суд ть о степени ГК.

Разработаны остальные приемы способа; скорость внутривеннаго ввдения препарата в организм, диапазсн дат<иравания магнетита атомами кобальта, диапазон рН.

Повышение воспроизводи«1асти способа достигается внутривеннь<м аднарззавым введением вь<сокадисперс <а;а магнетита размером 8-15 нм допира.-а.ната атомами кобальта, так как ьещества именна такого размера вызывает 100 -ную активацию контактного фактора Х!!, чему, I.ðîMå геометрических размеров, спаса атакуют потенциал поверхности (апти<., м рН выше изазлектрической точки) и и„.; снь<е дбавки атомов кобальта. Пр 15л.

v

П р И М Е р 1. fOTC T т<ад«< Г т;:-Г,„, солей двух- и треквале«гна< а > <е1л (3 8 г

Ре504 и 10,4 г ЕеС!з в 100 Мп д<1-.тизл. рав.»<ной воды каждый), причем в pa<. Tv p двух«а лентного железа дабавля<ат 2.0 г СаС!

Растворы сливают и осаждают в избытке щелочи (10,0 г NaOH в 100 Mil д< ст11ллираванной воды). Осадок пра«1ь<вают дистиллированной водой до р Н 7,5 и фил ьт Г уют через двойную фильтровальну<а бумагу. Па -р<еную массу объемом 20 мл (4,8 r Сс,Fez-,0,1, остальное вода) переносят в сосуд и дистиллированной водой доводят объем до 50 мл.

Данную коллоидную суспензию набирают в шприц в количестве 0,5 Мп и вводят белым беспородным крысам весом 160 г внутривенно медленно в те«ение 1,0 t«н. Через 30 с после введения и;:eapaTa наблюдаот признаки ГК: время кровотечения — 35 с, время свертывания кГ ав< 5,5 мин, пра ра<1биновый индекс 47";1, т; амбациты 54;ь. Такие показатели набл<ада ат 72 ч и в тече< ие суток они линейно персхадят в норму. Клинические показате;и в пределах нормы.

Выбранные паказзтели исс Igg,< -<ь . признаков по прим.-;, 1 — ка. . нтрацl ч дисперснай фазы, г.!:. LtаГа=ть .;-„-,-w. ц приводят к четко т<.;. -:- <най«; -<н ГК которая длится чет. ; а г, tr.t I, .: вызь<т.я -.т резких отклонений г<:,»,,< .ц =н.;ав;. «1и срганизма.

Пример 2. Па,".;;, -. v 1 e < у- -, в .«о белой беспородная г.-;.. ге=.-м !83 т вяnдят каллаидную су"-=- i, .а в <... °, ч стье 1,0 млс рН8,0в1еч» . »х.1-. Чс; з 2 с после введения v=. -. и,. а .1 ГК время кааьатече> . -.. :...;.: — = се=-сть<вания кров<1 4 мин, t ., t.:.Iíñ: ь,. ° и< л ь

40;,, тр t.<бациты - - 7 эх <" па °;. з1-,.„ли наблюдают четверо, i, ас" "= e те>е ние 1,5 сут QTI еча ;-. - Гс ° а„- в < а;к<у. QTклонений в клини-.=.:,,лгт<1«: нет, Уаха<<Ь1ЗЛЬ <ЫЕ 3 ..-< <1 „-, ?????????? ???????????????????? ???????????????????? -:.;,??,".??-?? .",5 ??>

8,0, скорость введен .- 0.05 г/<.1., риаадят к выраженной карти<. Г!; б -3 а-».;,= <ения в клинической картине и вазн< кнавения тромба.

Пример 3, Па пГ.

55 с. время свертывания крови 7 мин, пратромбинавый индекс 607,, тромбоциты

667. Такие показатели наблюдают 24 ч с переходом в норму в те <ение 12 ч. Клинических отклонений от нормы нет.

1707618

ФМР-контроля эа процессами перераспределения и магнитной локализации дисперсной фазы; используемое вещество можно длительно хранить беэ применения специальных мер предосторожности, легко получить в лабораторных условиях.

Формула изобретения

Составитель М, Ахалая

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор H. Ревская

Редактор Л. Гратилло а

Заказ 268 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательские комбинат Патент, г. Ужгород, уп.1 егарина. 101

Минимальное значение признаков способов приводит к ГК-состоянию. однако его количественное выражение снижается.

Использование предлагаемого способа моделирования гиперкоагулемии по срав- 5 нению с существующими упрощает процесс моделирования за счет применения в качестве активного вещества высокодисперсных частиц стандартного размера, формы, известными и легко контролируемыми фи- 10 зико-химическими характеристиками; повышает воспроизводимость способа за счет использования веществ, которые избирательно взаимодействуют с контактным фактором Xli свертывающей системы крови, 15 обеспечивая этим естественное функционирование модели.

Кроме того, появляется возможность включения в рассмотрение микроциркулярного русла кровообращения за счет ма- 20 лых размеров этих частиц; имеется возможность непрерывного визуального и

Способ моделирования гиперкоагулемии, включающий введение химических веществ лабораторному животному. о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, приближения модели к естественной патологии и повышения длительности гиперкоагулемического состояния, однократно внутривенно вводят высокодисперсные частицы магнетита размером 8-15 нм, допированные атомами кобальта иэ расчета 7-15 мас,ф, в количестве

0,05 — 0,5 г/кг массы при рН 7,0-8,0 со скоростью 0,02-0,05 г/мин,