Штамм sтrертососсus sp. - продуцент стрептококкцина

Штамм sтrертососсus sp. - продуцент стрептококкцина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано вмикробиологической и медицинской промышленности для получения коммерческого препарата томицид, основой которого является стрептококкцин. Целью изобретения является получение штамма стрептококка с повышенной биоактивностью томицида. Новый штамм Streptococcus sp. В-4596 получен с использованием традиционных генетико-селекционных приемов путем обработки мутагенами и отбором штамма с повышенным антибактериальным уровнем томицида. Новый штамм имеет более высокий уровень антибактериальной активности томицида, по сравнению с прототипом на 140% расширяются возможности использования штамма для получения очищенных препаратов медицинского назначения. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s С 12 N 15/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4772304/13 (22) 20.12.89 (46) 30.01,92. Бюл. М 4 (71) Центральный научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) Л,П.Блинкова, В,П.Степнов, Л,Г.Бутова, А.А,Харитонов, M,Þ.Çoòèíà и Е.В.Сахарова (53) 615.779.9(088.8) (56)Блинкова Л.П. Автореф. дисс. док.биол.н.—

M., t986, с. 48, 1986.

Авторское свидетельство СССР

М 772223,кл. С 12 N 15/00, 1980. (54) ШТАММ STREPTOCOCCUS SP. — ПРОДУЦЕНТ СТРЕПТОКОККЦИНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в

Изобретение относится к биотехнологии и может использоваться в микробиологической и медицинской промышленности для получения коммерческого препарата томицид, основой которого является стрептококцин.

Прототипом изобретения служит штамм

Streptococcus ар. TOM-1606 (2).

Недостатком этого штамма является его невысокая антибактериальная активность.

Цель изобретения — получение штамма стрептококка с повышенной биоактивностью томицида.

Новый штамм Streptococcus зр,  — 4596 получен с использованием традиционных генетико-селекционных приемов (путем обработки мутагенами и отбором штамма с повышенным антибактериальным уровнем томицида) из штамма-прототипа Ы „ 1708843 А1 микробиологической и медицинской промышленности для получения коммерческого препарата томицид, основой которого является стрептококкцин, Целью изобретения является пвлучение штамма стрептококка с повышенной биоактивностью томицида. Новый штамм Streptococcus sp.

 — 4596 получен с использованием традиционных генетико-селекционных приемов путем обработки мутагенами и отбором штамма с повышенным антибактериальным уровнем томицида. Новый штамм имеет более высокий уровень антибактериальной.активности томицида, по сравнению с прототипом на 140 g, расширяются возможности использования штамма для получения очищенных препаратов медицинского назначения. 2 табл.

Streptococcus sp. TOM — 1606, являющегося и родуцен том томи цида.

Штамм Streptococcus sp. В-4596 депонирован и хранится в ВКПМ "ВНИГенетика" и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Клетки грамположительные овоидные размером 1,0-6,8 мкм иногда в цепочках

Мясо-пептонный агар (+37 С, 48 ч). Образует мелкие круглые колонии диаметром

1 — 2 мм серовато-желтого цвета с полупрозрачным краем, непрозрачным центром и ровными краями, По консистенции колонии вязкие.

Мясо-пептонный бульон (+37 С, 32 ч).

Беэ встряхивания рост с помутнением сре1708843 ды и выпадением рыхлого осадка. При встряхивании на качалке среда мутная, На среде Хоттингер штамм-продуцент проявляет аналогичные свойства.

На синтетических средах (М-9 и др.) рост штамма не наблюдается.

На среде В (среда для оптимальной продукции томицида) следующего состава: пепсин-пептон 500 мл„мясная вода- 500 iìë, ацетат натрия 5 r, глюкоза 1 r, агар-агар 15 r, рН 7,6, при аналогичных условиях выращивания штамм обладает такими же культурально-морфологическими свойсгвами, KGK на МПБ, МПА и среде Хоттингер.

Эизико-биохимические признаки.

Штамм В-4596, как и прототип, принадлежит к ceporpyr М стрептококков, Факультативный анаэроб.

Грамположителен.

Оптимальная температура роста (+30)— (+37) С. Максимальная скорость роста при (+35) — (+37) С. Диапазон р Н 7,5 — 7,7, От двух типичных представителей

S.lactls u S.cremoris отличается более широким диапазоном роста (+10) — (+40) С и наличием способности расщеплять аргинин, Основываясь на этих критериях считае", что предлагаемый штамм (как и прототип}. занимает промежуточное положение между S.lactis u S.cremoris u тестируется как Streptococcus species (определитель Берги, 1986).

В табл 1 приведены сравнительные биохимические свойства штамма

Streptococcus зр. ТОМ-1606 (прототип) и штамма В-4596. и1з данных, представленных в табл.1, следует, что по биохимическим свойствам штамм 6-4596 не отличается от прототипа за исключением антибактериальной активности томицида, которая у него в 2,4 раза выше, чем у прототипа, Б генетическом отношении предлагаемый штамм., в отличие от прототипа, утратил устойчивость к антибиотику канамицину

jK } и стал канамицинчувствителен (K ), Таким образом, сходс1 во культуральноморфологических и биохимических свойств штамма В-4596 и прототипа устанавливае их родство, а различия в продукции томици" да и генетическом маркере устойчивости к канамицину позволяет идентифицировать предлагаемый штамм, как новый штамм. родуцент томицида.

Пример. Сущность изобретения поя нятеся следующим конкретным пример м использования штамма Steptococcus

sp, В-4596, 15

Q0 3 5

« i5

5U

5Г

Для получения посевного материала лиофилизованную культуру штамма в концентрации 200-,500 млн кл/мл засевают в среду В следующего состава: пепсин-пептон 500 мл, мясная вода 500 мл, ацетат натрия 5 г; глюкоза 1 r, рН 7,6-7,7, extempere сахароза до конечной концентрации 1;, культивируют при +37 С, Затем 16-часовую культуру вносят в среду того же состава в концентрации, что указана выше, и выращивают 6 ч при

37 С, Подросшую культуру вновь культивируют по аналогичной схеме 14-16 ч. Засев культуры в ферментер с питательной средой того же состава производят в 10-кратном разведении и выращивают 72 ч при +28 C.

После чего культуральную жидкость отделяют от клеток сепарацией, старилизуют фильтрацией и определяют антибактериальную активность препарата томицида методом серийных разведений (Государственная фармакопия), В качестве тест-культуры используют М сгососсиз luteus 2665 в конечной концентрации 10 — 10 кл/мл.

За единицу активности принимается наибольшее разведение препарата, задерживающее рост тест-культуры. Препарат хранят при+6 -4ОС в течение 2 л.

В табл, 2 приведены сравнительные данные по антибактериальной активности нескольких серий препарата томицида, полученных по схеме производственного регламента, штаммов Sterptococcus sp. В-4596 и

Т0М-1606.

Как видно из таблицы, средняя величина активности томицида у штамма B-4596 достоверно выше (в 2,4 раза), чем при использовании штамма-прототипа TOM-1606, Технико-экономическая или иная эффективность, Преимущества штамма

Ятreptoc ccus sp. 8-4596 по сравнению со штаммом Streptococcus sp. TGM-1606: более высокий уровень антибактериальной активности томицида — íà 140% и следовательно, более высокий выход целевого продукта; расширяются возможности ucnoëüço8àíèÿ штамма для получения очищенных препаратов медицинского назначения.

Таким образом, новый штамм В-4596 превосходит по уровню антибактериальной активности штамм-прототип TOM-1606 и обеспечивает получение более эффективного препарата, используемого при лечении инфекционных заболеваний.

Формула изобретения

Штамм Streptococcus зр. В-4596 — продуцент стрептококкцина, 1708843

Таблица 1

В-4596

Тест

1109,3+ 05,5

128 †2

< 2

2730,7й431,7

256 †5

Табли.ца 2 тамм ТОМ вЂ” 1606

Оксидазная активность

Протеазная активность

Лиазная активность

Нитратредуктазная активность

Рмидазная активность

И ндолообразование

Выделение сероводорода

Гемолизи н

Ферроментативная активность на углеводах:

Араби ноза

Ксилоза

Рамноза

Галактоза

Глюкоза

Целлобиоза

Лак:оза

Мальтоза

Сахароза

Трегалоза

И нулин

Крахмал

Салицин

Маннит

Сорбит

Инозит

Продукция томицида, ед/мл среда В среда Хоттингер среда М-9

Продолжение табл.2