Способ определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите
Патент 1719998
Авторы
Классы МПК
Способ определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите
Иллюстрации
Реферат
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии, и может быть использовано для определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Цель изобретения - повышение точности способа. Это достигается тем. что выделенные из крови больного лимфоциты инкубируют с препаратом антигена хряща (приалон) и без него, определяют уровни глобулинов, связанных с клетками, путем обработки антисывороткой к иммуноглобулинам человека, меченной ФИТЦ. Регистрируют уровни флуоресценции в опыте и контроле и рассчитывают показатель уровня глобулина по формуле Кг (Гоп/Гк- 1) -100, где Кг-показатель уровня глобулинов; Г0п и Гк - уровни флуоресценции в опыте и контроле соответственно. При значении Кг, большем или равном 6. определяют наличие специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Изобретение позволяет на 40% повысить точность определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. 1 табл. (Л
СОЮЗ СО8ЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)ю G 01 и 33/48
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4723322/14 (22) 20.07.89 (46) 15.03.92. Бюл. N. 10 (71) Киргизский государственный медицинский институт (72) Е. В. Бененсон, Е. Г. Цай и А. Т;Мамасаидов (53) 616.07(088.8) (56) Бененсон Е. В. и соавторы Здравоохранение Киргизии, 1987, N 4, с. 26. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревмэтологии. и может быть использовано для определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Цель изобретения — повышение точности способа.. Это достигается
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии, Целью изобретения является повышение точности способа за счет определения уровня специфических глобулинов, связанных с клетками, путем обработки клеток антисывороток к иммуноглобулинам человека, меченной флуоресценизотиоцианатом (ФИТЦ).
Способ осуществляют следующим образом.
Лимфоциты выделяют из крови центрифугированием над смесью фиколгипак
1,078 г/см, однократно отмывают, ресус3 лендируют в 0,5 мл физиологического растворайаС!. По 0,1 мл суспензии вносят в две центрифужные пробирки, в одну добавляют
„„Я „„1719998 A 1 тем, что выделенные из крови больного лимфоциты инкубируют с препаратом антигена хряща (приалон) и без него, определяют уровни глобулинов, связанных с клетками, путем обработки антисывороткой к иммуноглобулинам человека. мс-:ченной
ФИТЦ. Регистрируют уровни флуоресценции в опыте и контроле и рассчитывают показатель уровня глобулина по формуле Кг = (Гоп/Гк — 1) .100, где Кг — показатель уровня глобулинов; Гоп и Г» — уровни флуоресценции в опыте и контроле соответственно. При значении Кг, большем или равно 6. определяют наличие специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Изобретение позволяет на 40% повысить точность определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. 1 табл.
С: 1
0,02 мл разведенного в 20 раз препарата румалон (антиген хряща), в другую — 0,02 мл физиологического раствора ИаС!. Пробы инкубируют 18 ч при 37 С во влажной камере.
После инкубации во все пробы вносят по
0,02 мл люминесцентной сыворотки против GO глобулинов человека в удвоенном рабочем
1 титре, пробы встряхивают, инкубируют 1 ч при комнатной температуре, затем центрифугируют 5 мин при 800 g, надосадочную жидкость отбрасывают и осадок ресуспендируют в 1 капле физиологического раствора NaCI. Каплю суспензии из опыта и контроля переносят на предметное стекло, подсушивают и определяют показатели специфической флуоресценции лимфоидных клеток.
1719998
Далее рассчитывают коэффициент по формуле
Кг = (— — 1) х 100 уел.ед.
Гоп
Г
Пример 1. Больная P., 1935 года рождения, поступила в клинику с выраженным суставно-воспалительным синдромом мелких и крупных суставов рук, отмечены 10 потеря в весе, субфебрильная лихорадка, ускорение СОЭ до 35мм/ч, лейкоцитоз 9000 мкл, палочкоядерный сдвиг; Обнаружен ревматоидный фактор в титре 1:160. Показатель специфического иммунитета оказался 15 отрицательным (1 усл.ед.). Клинический диагноз: ревматоидный артрит серопозитивный, быстро прогрессирующее течение, активность 111 степени. Однако в дальнейшем у больной появились эритематозные 20 высыпания на лице, в сыворотке обнаружен антинуклеарный фактор в титре 1:800. Диагноз ревматоидного артрита был снят и выставлен диагноз: системная красная волчанка, острое течение. 25
Пример 2. Больная Т., 1945 года рождения, поступила в клинику с умеренно воспалительными изменениями колвнных и голеностопных суставов обеих ног. Общие анализы крови и мочи в пределах нормы. 30
Показатель специфическго иммунитета положителен (9 усл.ед.). Клинический диагноз: деформирующий остеоартроз с умеренным синовитом. В дальнейшем у больной развился воспалительный синдром в мелких су- 35 ставах кистей и стоп, отмечено нарастание
СОЭ до 40 мм/ч, лейкоцитоз 8,5.10 /мл.
Рентгенологически обнаружены эрозивные изменения в мелких суставах кистей. Диагноз остеоартроз был снят и выставлен диаг- 40 ноз ревматоидный артрит, активность 1) степени серонегативный.
Пример 3. Больная M., 36 лет, находилась на стационарном лечении с
12/Xl по 2/X111989 t.. с диагнозом; ревмато- 45 идный артрит, полиартрит медленно прогрессирующее течение, II стадия, 1 степень активности, серов гативный. Жалобы при поступлении на боли; припухлость голеностопных, лучезапястных суставов. мелких 50 суставов кистей, утреннюю скованность более 2 ч, ограничение движения в правом локтевом суставе. Из анамнеза; в течение
1,5 лет принимает с хорошим эффектом Дпенициламин. Объективно: дефигурация преимущественно пролиферативного характера лучезж-;ястных и голеностопных суcraaoe. Контра тура правого локтевого сустава. Со стороны внутренних органов беэ патологии. Лабораторно: Ha — 12,1 г/л; эр.; — 3,9х10; ЦП вЂ” 0,9; Л вЂ” 5,2х10 /л; СОЭ
-22 мг/г; СРБ+, фибриноген -4,1 ммоль/л, Рентгенограмма суставов: околосуставной остеопороз, сужение суставной щели, эрозии хряща.
Определение специфического иммунитета (СИ): ЛА: РФ отр. РТМЛ с АХ: 50,7
РГПЛ с АХ: Кг=+ 6усл.ед.
Из этого видно, что больной с достоверным ревматоидным артритом серонегативным вариантом; получающим в течение 1,5 лет с хорошим эффектом "базисный" препаратт Д-пенициламин, при определении специфического иммунитета РГПЛ-методом определяется минимальное значение Кг, равное 6 усл.ед., что коррелирует с мини- мальной клинико-лабораторной активностью болезни (1 степень активности).
Определяли наличие СИ в реакции торможения миграции лимфоцитов (РТМЛ), в реакции глобулинпродукции лимфоцитов (РГПЛ) с АХ, по выявлению ревматоидного фактора (РФ) в латекс-агглютинации (ЛА).
Результаты представлены в таблице.
Иэ данных таблицы следует, что СИ обнаруживается РГПЛ-способом в 87,5 Д случаев, что на 40,4 j превышает частоту положительных результатов РТМЛ-способом и на 37,57ь — ЛА-способом.
Формула изобретения
Способ определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите путем инкубации лимфоцитов крови с антигеном хряща и без него и с последующей оценкой реакции, отличающийся тем, что. с целью повышения точности способа, определяют уровни глобулинов, связанных с клетками, путем обработки клеток антисывороткой к иммуноглобулинам человека, меченной флуоресценизотиоцианатом, далее регистрируют уровень флуоресценции и рассчитывают показатель уровня глобулина по формуле
К,=- („ " — 1) t00, Гк где Kr — показатель уровня глобулинов;
Гол — уровень флуоресценции в опыте;
Гк — уровень флуоресценции в контроле, и при значении этого показателя, равном и больше 6, определяют наличие специфического иммунитета при ревматоидном артрите.
1719998
Частота обнаружения специфического иммунитета в группах обследованных
ЛА, $
РТМЛ, gj»
РГПЛ, $
Составитель П,Артюшина
Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова
Редактор А.Лежнина:
Заказ 769 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Группы обсле ованных
Здоровые
Больные PA
Число обсле ованных
5
47,1
87,5