Способ клонального микроразмножения растений огурца

Способ клонального микроразмножения растений огурца

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии , в частности к методам культивирования и микроклонального размножения растений огурца, и может быть использовано для селекции и семеноводства культуры огурца (Cucumis sativus L). Целью изобретения является сокращение продолжительности процесса и повышение коэффициента размножения . Поставленная цель достигается тем, что выделяют экспланты размером 0,25-0,35 мм, культивируют их до получения побегов на агаризованной среде Мурасиге- Скуга, содержащий витамины по Стаба, 1-2 мг/л гибберелловой кислоты и дополнительно 1-2 мг/л глицина, 0,4-0,6 мг/л кинетина, 30-40 мг/л аденина, 5-10 тыс.мг/л активированного угля. После этого побеги переносят для укоренения на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, содержащую элементы минерального питания, уменьшенные вдвое, витамины по Мусариге-Скугу и дополнительно индолилуксусную кислоту 0,8-1,2 мг/л, кинетин 0,02-0,04 мг/л и 5-10 тыс.мг/л активированного угля. Способ позволяет достичь высокого коэффициента размножения, -до 25-81 шт. черенков в месяц при сокращении продолжительности процесса за счет ускорения этапов размножения . 2 табл. с/ С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s А 01 Н 4/00 (7

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4773443/13 (22) 25.12.89 (46) 23.03.92. Бюл. hh 11 (71) Институт физиологии растений им.

К.А.Тимирязева и Всесоюзный научно-исследовательский институт селекции и семеноводства овощных культур (72) Н.В.Маркова, P.Ã.Áóòåíêo и Н.B.Äoíåö (53) 581.143.6(088.8) (56) 1.Annals of Botany, v. 52, р. 417-420, 1983.

Texnica sulla propagazion vegetation in

vitro di cetriolo (Cucumis sativus 1.)

Fortunato. 1.Moronå, L.Ìànñin! "Ann.

Fac.agr.Univ.Bari", 1981 — 1982, v. 32, р. 651689. (54) СПОСОБ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ ОГУРЦА (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам культивирования и микроклонального размножения растений огурца, и может быть использовано для селекции и семеноводства культуры огурца

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам культивирования и микроклонального размножения растений . огурца, и может быть использовано для селекции и семеноводства культуры огурца (Cucumls satlvus L).

Известен способ вегетативного размножения огурца из эксплантов гипокотиля через образование каллуса, соматических эмбриоидов, регенерации из них побегов, культивирования их.

Недостатки этого способа являются длительность процесса — 3-5 мес, получе„„, Ц „„1 720595 А1 (Cucumis sativus L). Целью изобретения является сокращение продолжительности процесса и повышение коэффициента размножения. Поставленная цель достигается тем, что выделяют экспланты размером

0,25-0,35 мм, культивируют их до получения побегов на агаризованной среде МурасигеСкуга, содержащий витамины по Стаба, 1-2 мг/л гибберелловой кислоты и дополнительно 1-2 мг/л глицина, 0,4 — 0,6 мг/л кинетина, 30-40 мг/л аденина, 5-10 тыс,мг/л активированного угля. После этого побеги переносят для укоренения на агаризованную среду

Мурасиге-Скуга, содержащую элементы минерального питания, уменьшенные вдвое, витамины по Мусариге-Скугу и дополнительно индолилуксусную кислоту 0,8-1,2 мг/л, кинетин 0,02-0,04 мг/л и 5 — 10 тыс.мг/л активированного угля. Способ позволяет достичь высокого коэффициента размножения, — до 25 — 81шт. черенков в месяцц при сокращении продолжительности процесса за счет ускорения этапов размножения. 2 табл. ние генетики разнородного материала и недостаточное количество получаемых растений.

Известен способ вегетативного размножения огурца посредством прямой регенерации побегов из латеральных апексов, имеющих размер 5 — 6 мм и выделенных из растений на стадии 4-5 листьев.

Этот способ включает выделение эксплантов, культивирование их на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга до получения побегов, пересадку их на питательную среду для укоренения и последу1720595 способом клонального микроразмножения 10 растений огурца (Cucumls sotivus Ц, включающим выделение эксплантов, культивиминеральных солей, г/л: МНайОз 33,0; КИОз

38; CaCIz2Н208,8; MgSO47Hz07,4; KHzPO< 55 ющую адаптацию растений-регенерантов в почве.

Недостатками указанного способа являются высокая продолжительность процесса и низкий коэффициент размножения.

Цель изобретения — сокращение продолжительности процесса и повышение коэффициента размножения.

Поставленная цель достигается новым рование их на питательной среде

Мурасиге-Скуга до получения побегов, пересадку их на питательную среду для укоренения и последующую адаптацию растений-регенерантов в почве, причем выделяют экспланты размером 0,25-0,35 мм, культивируют их до получения побегов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей витамины по Стаба, 1-2 мг/л гибберелловой кислоты и дополнительно 1-2 мг/л глицина, 0,4 — 0,6 кинетина, 30 — 40 мг/л аденина, 5 — 10 тыс.мг/л активированного угля, после чего побеги переносят для укоренения на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую элементы минерального питания, разведенные вдвое, витамины по МурасигеСкуга и дополнительно 0,8 — 1,2 мг/л индолилуксусной кислоты (ИУК), 0,02-0,04 мг/л кинетина и 5-10 тыс.мг/л активированного угля, Пример 1 (известный). Из растений огурца Cucumis sotlvus L,ñî степенью развития 4-5 листьев вычленяют апексы 5 — 6 мм, стерилизуют их, культивируют на высокогормональной среде, содержащий мг/л:

6-БАП 5-20, 21Р 1 — 30, а -НУК 1, СНз 0,010,025, до получения растений, которые затем укореняют. Этот способ длится от 4 до

6 мес при коэффициенте размножения от

1:3 до 1:5.

Пример 2. Апикальные меристемы получали из 3 — 4-дневных проростков семян.

Элементы предварительно стерилизовали

0,1 -ным раствором диацида с последующей отмывкой в трех порциях стерильной воды по 7 — 15 мин в каждой. Экспланты размером 0,25 — 0,35 мм, состоящие из конуса нарастания и 1 — 2 листовых примордиев культивируют на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, состоящей из

3,4; NazMo04 0,25; Cu$046Hz0 0,025; CoCIz"

«6Н20 0,025; НзВОз 6,2; Mn$04.4Н О 22,3;

ZnSO4 4Н О 8,6; KJ 0,83; FeS04 7HzO 27,8;

Naz -ЭДТА 37,8, а также витаминов по Стаба, мг/л: фолиевая кислота 100, рибофлавин

100, биотин 20, Са-пантотенат 200, пиродоксин 200, тиамин 200, никотиновая кислота

400, .цинкобаламид 0,3; стимуляторов мг/л: глицин 1, кинетин 0,4, гибберелловая кислота 1, аденин 30, исахароза 15000, древесный активированный уголь 5000, агар 6500, Меристемы культивируют в климатической камере при температуре 26 1 С, освещенности 5 — 8 тыс,лкс, 16-часовом фотопериоде и относительной влажности воздуха 70 в течение 3 дней.

Результаты испытаний образовавшихся побегов представлены в табл. 1.

После формирования побега из меристемы его отсаживали на агаризованную питательную среду следующего состава: минеральные соли по Мурасиге-Скуга, г/л:

ИН4ЧОз 33,0; КИОз 38; CaCIz 2 Н20 8,8;

М9$04 7Н20 7,4; КНгРО4 3,4; Ма2Мо04 0,25;

CuS04 5HzO 0,025; СоС!2 6Н20 0,025; НзВОз

6,2; Mn$04 4HzO 22,3; Zn$04 4Н20 8,6; К.)

0,83; Fe$04 7ÍzO 27,8; Naz-ЭДТА 37,8, разведенные в 2 раза; витамины по МурасигеСкуга, мг/л; пиридоксин 1, тиамин 1, никотиновая кислота 1, кинетин 0,04, индолилуксусная кислота (ИУК) 0,8; исахароза

10000, активированный уголь 5000, агар

6500, на которой культивируют 5 — 7 дней до получения миниатюрных растений высотой

5-7,5 см, имеющих не менее 3-5 настоящих листьев и мощный стебель с хорошо развитой системой корней, Результаты укоренения регенерантов огурца представлены в табл. 2.

Пример 3, Проводят аналогично примеру 2. Условия проведения примера, а также результаты испытаний представлены в табл. 1 и 2 (средняя графа).

Пример 4. Проводят аналогично примеру 2 (нижняя графа). Условия проведения примера, а также результаты испытаний представлены в табл. 1 и 2.

В результате клонального микроразмножения огурца (Cucumisativus L) происходит сокращение продолжительности процесса до 8-10 дней при коэффициенте размножения от 1:5 до 1:9. Кроме того, в результате указанного способа, который позволяет использовать экспланты меньшего размера (5 — 6 мм), что дает возможность освободиться от многих патогенных микроорганизмов; использование низких доз цитокининов уменьшает риск получения нарушений генетического аппарата растительных объектов, а также развитие каллуса в основании побега и связанной с этим утратой ценности размножаемого селекционного материала огурца; исключает формирование растений с мужскими цвет1720595

Таблица 1

Таблица 2

30

Составитель С.Куваева

Редактор H.Ëàçàðåíêî Техред М.Моргентал . Корректор М.Максимишинец

Заказ 904 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ками, что связано с использованием больших количеств бензиламинопурина.

Формула изобретения

Способ клонального микроразмножения растений огурца, предусматривающий выделение эксплантов, культивирование их на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга до получения побегов, пересадку их на питательную среду для укоренения и последующую адаптацию растений регенерантов в почве, отличающийся тем, что, с целью сокращения продолжительности процесса и повышения коэффициента размножения, экспланты выделяют размером 0,25-0,35 мм, культивирование их на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга ведут в присутствии витаминов по

Стеба, а гибберелловую кислоту вводят в концентрации 1-2 мг/л и дополнительно 1—

5 2 мг/л глицина, 0,4-0,6 мг/л кинетина, 3040 мг/л аденина и 5-10 тыс. мг/л активированного угля, пересадку побегов для укоренения проводят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, содер10 жащую элементы минерального питания в уменьшенной вдвое концентрации, витамины по Мусариге-Скугу и дополнительно 0,81,2 мг/л индолилуксусной кислоты, 0,02-0,04 мг/л кинетина и 5-10 тыс.мг/л

15 активированного угля.