Способ выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции

Способ выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии и хирургии , и предназначено для выбора серий нормального иммуноглобулине для лечения больных с острой гнойной инфекцией. Цель изобретения - повышение точности.выбора за счет подбора нормального иммуноглобулина к возбудителю гнойной инфекции конкретного больного. Для этого выделяют патогенный аутоштамм бактерий, который опсонизируют различными сериями иммуноглобулина , а затем осуществляют реакцию завершенного фагоцитоза лейкоцитов крови больного к опсонизированному аутоштамму с определением индекса завершенного фагоцитоза (ИЗФ). Для лечения выбирают ту серию нормального иммуноглобулина , которая максимально повышает ИЗФ, причем коэффициент эффективности этой серии, определяемый как отношение ИЗФ в опыте к ИЗФ в контроле (без иммуноглобулина), не должен быть меньше 1,5. При меньшей трудоемкости и сокращении времени исследования с 6-7 дней до 2 сут точность выбора препарата повышается на 64,7%. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (О) (11) (з1)з 6 01 и 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

j)0Urjj 2

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4690587/14 (22) 12.05.89 (46) 15.04.92,Бюл. М 14 (71) Челябинский государственный медицинский институт и Челябинская областная клиническая больница М 1 (72) И.А.Абушкин, Л.Б.Новокрещенов и И.И.Долгушин (53) 615.375 (088.8) (56) Чекан Л.В., Миньович Ф.Л., Кутимова

Л.Р. и др. Естественные. антитела против

Pseudomonas aeruglnosa в препаратах глобулина человека. — Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1981, Рв б. с, 85-89. (54) СПОСОБ ВЫБОРА СЕРИЙ ПРЕПАРАТА

НОРМАЛЬ НОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА

ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРОЙ ГНОЙНОЙ ИН-ФЕКЦИИ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии и хирургии, и предназначено для выбора серий норИзобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии и хирургии, и предназначено для выбора серий нормального иммуноглобулина больным с острой гнойной инфекцией, Известен способ выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции, заключающийся в определении протективных антител в опытах пассивной защиты мышей.

Способ включает иммунизирование подопытных животных внутрибрюшинно различными сериями иммуноглобулина (40 животных на мального иммуноглобулина для лечения больных с острой гнойной инфекцией. Цель изобретения — повышение точности, выбора за счет подбора нормального иммуноглобулина к возбудителю гнойной инфекции конкретного больного. Для этого выделяют патогенный аутоштамм бактерий, который опсонизируют различными сериями иммуноглобулина, а затем осуществляют реакцию завершенного. фагоцитоза лейкоцитов крови больного к опсонизированному аутоштамму с определением индекса завершенного фагоцитоза (ИЗФ). Для лечения выбирают ту серию нормального иммуноглобулина, которая максимально повышает ИЗФ, причем коэффициент эффективности. этой серии; определяемый как отношение ИЗФ в опыте к ИЗФ в контроле (без иммуноглобулина), не .должен быть меньше 1;5. При меньшей трудоемкости и сокращении времени исследования с 6 — 7 дней до 2 сут точность выбора препарата повышается на 64,7 . одну дозу и репарата), заражение иммунизированных животных внутрибрюшинно через 2 ч после иммунизации четырьмя дозами живой суточной культуры бактерий (10 подопытных животных на одну дозу), заражение аналогичным способом четырьмя меньшими дозами неиммунизированных животных, контроль (5 животных на дозу), учет гибели животных в течение 6 — 7 дней, расчет дозы живой суточной культуры бактерий, вызывающей 50 летальность у животных (ЛД50), определение коэффициента эффективности различных серий иммуноглобулина как отношение ЛДщ в опыте к

ЛДво в контроле, выбор серий препарата с высоким коэффициентом эффективности (КЭ) для лечения соответствующей гнойной инфекции. 5

Однако известный способ дает большой процент ошибок в выборе серий иммуноглобулина, т.е. имеет недостаточную точность, Цель изобретения — повышение точности способа, 10

Для достижения поставленной цели согласно способу выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции путем воздействия различных серий препарата на патоген- 15 ные микроорганизмы, 1 в качестве микроорганизмов используют аутоштамм бактерий, при этом обрабатывают его иммуноглобулином и добавляют к пробе крови больного, проводят реакцию завершенного 20

- фагоцитоэа лейкоцитов, определяют индекс завершенного фагоцитоза и при повышении его в 1,5 раза по сравнению с пробой без иммуноглобулина, выбирают данную серию иммуноглобулина для лечения. 25

Способ осуществляют следующим. образом.

У больного выделяют патогенный . аутоштамм бактерий, для чего производят забор материала из очага гнойного Восп8- 30 ления или крови больного и высевают его на скошенный агар, который помещают в термостат при 37 С на сутки. Из полученной суточной культуры патогенного аутоштамма бактерий по оптическому стандарту 35 мутности готовят на физиологическом растворе взвесь бактерий в концентрации

0,1 10 мкрб,кл./мл. Затем производят забор венозной крови больного в стерильную пробирку в количестве 0,1 мл на каждую 40 серию подбираемого иммуноглобулика и добавляют на 4 об.ч. крови.1 ч 3,8%-ного раствора цитрата натрия или на 1 мл крови—

0,1 мл гепарина. В другие селиконизированные стерильные пробирки помещают по 45

0,05 мл каждой серии иммуноглобулина в разведении 1:24 на физиологическом рас.творе.и по 0,02 мл приготовленной взвеси бактерий, перемешивают встряхиванием и помещают на 10-15 мин в термастат при 50

37 С (опсонизация бактерий). В одну пробирку вместо иммуноглобулина добавляют

0,05 мл физиологического раствора (контроль). В каждую пробирку с опсонизированными бактериями помещают 0,1 мл цитратной или гепаринизированной крови, перемешивают, забирают 0,02 мл сме- 5 си и переносят в пробирку с 3,0 мл физиологического раствора. После перемешивания содержимое пробирки в количестве 0,05 мл переносят на чашку Петри, на поверхность хорошо просушенного агара, и втирают жидкость досуха. Чашки Петри помещают в термостат на 17 — 18 ч при 37 С.

Оставшуюся в пробирках часть бактериально-иммуноглобулино-кровяной смеси помещают в термостат на 2,5.ч при 37 С (предварительная инкубация). После пред- . варительной инкубации пробирки легко встряхивают и вновь Отбирают из них по

0,02 мл смеси, которую переносят в 3,0 мл физиологического раствора, перемешивают, затем 0,5 мл смеси высевают на чашки.

Петри, последние инкубируют 17-18 ч при

37 С. После 17-18-часовой инкубации все чашки Петри с выросшими на них бактериями остужают в течение 10-15 мин в холодильнике при 4-6 С, смывают бактериальные колонии с помощью шпатели и 40 мл дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Затем определяют оптическую плотность смыва бактериальных колоний по концентрационному фотоколориметру (КФК-2M}, используя светофильтр 364 нм и кюветы шириной 5,1 мм. В контрольную кювету помещают дистиллированную воду, Индекс завершенного фагоцитоза лейкоцитов (ИЗФ) рассчитывают как отношение оптической плотности смыва колоний бактерий, выросших на агаре без предварительной инкубации смеси, к оптической плотности смыва колоний бактерий, выросших на агаре после предварительной инкубации смеси, Коэффициент эффективности

{КЭ) иммуноглобулина определяют как отношение ИЗФ в опыте к ИЗФ в контроле (инкубация .с физиологическим раствором).

После этого из различных серий нормального иммуноглобулина для лечения выбирают наиболее эффективные, а именно те, у которых КЭ является максимальным, но не менее 1,5 усл.ед, Подбор должен сопровождаться контролем используемых сред на стерильность.

Общая продолжительность исследования, включая выделение патогенного аутоштамма бактерий, 46 — 48 ч.

Пример, Больная Б., 3 года, поступила в клинику в тяжелом состоянии на 7-е сутки после начала заболевания, Последние трое суток лечилась в реанимационном отделении с диагнозом: острая гнойная правосторонняя невыясненной этиологии деструктивная пневмония, осложненная пиопневмотораксом, При чрескожной пункции плевры удалено 250 мл гноя. Проводили аспирационный дренаж плевральной полости, антибактериальную и дезинтоксикационную терапию. Без уточнения возбудителя гнойной инфекции больной в

1727073 течение 3 дней вводили антистафилококко- иммуноглобулина имеет КЭ=5,0 усл.ед., вую плазму в количестве 100 мл и антистафи- т.е. повышает ИЗФ аутоштамма бактерий лококковый иммуноглобулин s общей дозе s 5 раэ, остальные серии иммуноглобулина

0,5 мл/кг массы тела ребенка. Состояние ос- завершенный фагоцитоз лейкоцитов к тавалось крайне тяжелым, увеличивалась 5 возбудителю гнойной инфекции не повыинфильтрация верхней доли правого легко- шают. го и количества гнойного экссудата, выводи- В соответствии с предлагаемым спомого из плевральной полости. В связи с собом для лечения больной Б, выбрана отсутствием положительной динамики в за- серия f4 230486 нормального иммуноглоболевании, больная переведена в детскую 10 булина. хирургическую клинику, При поступлении. В тот же день произведена замена в той состояние тяжелое. Больная адинамична, же дозе используемой серии нормального

Выраженная бледность кожных покровов. иммуноглобулина на серию М 230486 с выТемпература тела 38,8 С. Частота дыхания. явленной ин витро(в соответствии с предла54/мин. Тоны сердца приглушены. Частота 15 гаемым способом) высокой активностью к сердечных сокращений 144 уд/мин. Уста- аутоштамму бактерий. На вторые сутки поновлен второй аспирационный дренаж сле начала введения подобранного предлаплевральной полости справа втретьем меж- гаемым способом. иммуноглобулийа реберье и сделан высев гноя на скошенный значительно улучшилось общее состояние, агар. Так как гной, выделившийся по дрена- 20 Больная активна. Улучшился аппетит. Темжам, по цвету и запаху был похож на гной пература тела снизилась до 37,2 С и на при синегнойной инфекции, то начали внут- третьи сутки нормализовалась. Частота дыримышечное введение серии М 360786 нор- хания 30/мин. Тоны сердца ясные. Частота мального иммуноглобулина с высоким КЭ сердечных сокращений 88 уд/мин, При рен(3,1 усл.ед).к синегнойной палочке, опре- 25 тгенологическом исследовании (контрольделенным ранее известным способом ном исследовании) на 8-е сутки с момента (прототипом), в дозе 0,5 мл/кг массы тела поступления в клинику инфильтрация легочбольного. Одновременно проводили ан-. ной ткани не определялась, избыточен тибактериальную, дезинтоксикационную бронхососудистый риСунок, легкое растерапию и ауготрансфузию ультрафиоле- 30 правлено, Через 4 дня после назначения товооблученной крови. выбранной серии иммуноглобулина проНесмотря на проводимое лечение, со- изведено повторное определение ее эфстояние оставалось тяжелым. Одышка до 50 фективности ин витро в соответствии с дыханий в 1 мин. Сохраняется высокая тем- предлагаемым способом: КЭ=0,9 усл.ед, . пература тела с повышениями до 39,4 С. 35 ИЗФ аутоштамма синегнойной палочки

На второй день с момента поступления повысился с 4,0 до 16,2 усл.ед. Препарат на скошенном агаре выросли бактериаль- отменен. Общая курсовая доза иммуноглоные колонии. При последующем бактерио- булина составила 2,8 мл/кг массы тела логическом исследовании идентифи- больного, После заместительной иммуноцирована синегнойная палочка, Проведен 40 терапии на фоне указанного выше компвыбор серии препарата иммуноглобулина лексного лечения у больной произошло по предлагаемому способу (ин витро) из 4 снижение лейкоцитарного индекса интоксерий нормального иммуноглабулина, сикации с 3,6 до 1,4 усл,ед., повышение включая и примененную для лечения боль-. лизосомальной активности нейтрофилов с ной серию N. 360786, и из одной серии ан- 45 402 до 444 усл.ед., активности фагоцитоза тистафилококкового иммуноглобулина. нейтрофилов к латексу с 20 до 32 усл.ед., Определяли индекс завершенного фа- интенсивности фагоцитоза нейтрофилов с гоцитоза как отношение оптической плотно- 72 до 160 усл,ед., повысилось абсолютное и сти смыва колоний бактерий, выросших на относительное количество В-лимфоцитов с агаре без предварительной инкубации бак- 50 0,44 10 /л (12/) до 0,61 10 /л (30 ) сооттериально-иммуноглобулино-кровяной сме- ветственно, содержание в сыворотке крови си, к оптической плотности смыва колоний с 102 до 130 ME/ë, На 13-е сутки у больной бактерий, выросших на агаре после предав- . удалены дренажи из плевральной полости, рительной инкубации смеси, Затем опреде- и на 25-е сутки она выписана домой в удовляли коэффициент эффективности серий 55 летворительном состоянии. нормального иммуноглобулина и серии ан- При обследовании и лечении. больных с тистафилококкового иммуноглобулина, острой гнойной инфекцией установлено, что

Результаты представлены в таблице. серии нормального иммуноглобулина с выПредставленные данные свидетельст- сокойэффективностью,выявленнойпосповуютотом,чтосерия М230486нормального собу-прототипу, эффективна в леченщд

1727073

Результаты выбора ин витро иммуноглобулина для лечения больной Б

Серия иммуноглобулина

Оптическая плотность колоний бактерий, выросших на агаре после предварительной инкубации смеси

ИЗФ, усл.ед.

Оптическая плотность колоний бактерий, выросших на агаре без предварительной инкубации смеси

КЭ, усл.ед.

0,47

3,0

0,75

1,4

Антистафилококк..

230486

360786

Конт оль

0,56

0,07

0,35

0„47

0,34

0,6

5,0

1,0

0,75

2,5

20,0

4,0

3,0

4,0 .

1,4

1,4

1,4

1,4

1,35

Составитель Н. Абушкин

Редактор Л. Пчолинская Техред M.Moðãåíòàë Корректор Н. Король

Заказ 1276 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, уш агарина, 101 только у 6 из 17 больных. Серии препарата, выбранные по предлагаемому способу, эффективны в лечении у 33 из 33 больных.

Полученные различия статистически достоверны (Х >6,63). Таким образом, процент совпадений результатов при выборе серий нормального иммуноглобулина известным способом составил 35,3, Процент ошибок при использовании известного способа выбора серий препарата для лечения больных с острой гнойной инфекцией составил

64,7, Ошибки в выборе серий нормального иммуноглобупина предлагаемым способом не наблюдались. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение точности выбора серий нормального иммуноглобулина, при этом точность повышается на 64,7О .

Следует отметить; что предлагаемый способ обеспечивает значительное сокращение сроков исследования: с 6 — 7 дней до

2 сут. Значительно уменьшается трудоемкость способа: в отличие от известного способа предлагаемый не требует иммунизирования и заражения большого количества животных, ухода эа ними.

Формула изобретения

Способ выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции путем воздействия

10 различных серий препарата на патогенные микроорганизмы, отличающийся тем, что, с целью. повышения точности способа, в качестве микроорганизмов используют аутоштамм бактерий; при этом обрабатыва15 ют его иммуноглобулином и добавляют к пробе крови больного, проводят реакцию завершенного фагоцитоза лейкоцитов, определяют индекс завершенного фагоцито-. . за и при повышении его в 1,5 раза по

20 сравнению с пробой без иммуноглобулина выбирают данную серию иммуноглобулина для лечения.