Способ прогнозирования рецидивов увеита

Способ прогнозирования рецидивов увеита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования развития увеитов у больных соматическими заболеваниями. Цель изобретения - прогнозирование увеитов у больного без симптомов основного заболевания. У больного берут кровь, определяют в ней уровень бласттрансформации лимфоцитов на неспецифический митоген, выявляют лимфоциты, содержащие la- и LFA-t-антигены, устанавливают групповую принадлежность крови и при снижении уровня бласттрансформации по сравнению со здоровыми, количестве la, содержащих лимфоцитов ниже 10%, количестве LFA-t, содержащих лимфоцитов ниже 5%, у больного с группой крови А(И) прогнозируют развитие увеита. Способ по сравнению с прототипом позволяет прогнозировать развитие увеита у больных до развития симптомов основного соматического заболевания. СО

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/53 -; О Ll g ., ГОСУДАРСТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

° К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4755326/14 (22) 14.11.89 (46) 15.04.92,Бюл. М 14 (71) Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им, Гельмгольца (72) Л.Е.Теплинская, Н.С.Зайцева, А.Ф.Кали бердина, В.В. Винокурова, А, Ю. Барышников и 3.Г. Када гидэе (53) 615.375 (088.8) (56) Клиника, диагностика и лечение увеитов при системных и синдромных заболеваниях. Методические рекомендации, M., 1984. (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИ.ДИВОВВ УВ ЕИТА (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования развития увеитов у больных соматиИзобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования характера течения эндогенных увеитов и ретиноваскулитов.

Цель изобретения — прогнозирование рецидивов увеита у больного до развития симптомов основного заболевания.

Способ осуществляется следующим об-. разом.

Периферическую кровь (15-20 мл) из локтевой вены забирают в пробирку с разведенным 1:100 гепарином, наслаивают на градиент плотности фиколлверографин

1077 (9 объемов крови на 3 объема градиента), центрифугируют в течение 30 мин. при 1000 об/мин. Мононуклеары собирают пастеровской пипеткой из интерфазы, Клетки отмывают средой 199 (5 — 7 мл) трех-.

„„5U„„1727074 А1 ческими заболеваниями. Цель иэобретения— прогнозирование увеитов у больного без симптомов основного заболевания. У больного берут кровь, определяют в ней уровень бласттрансформации.лимфоцитов ыа неспецифический митоген, выявляют лимфоциты, содержащие la- и 1 РА+антигены, устанавливают групповую принадлежность крови и при снижении уровня бласттрансформации по сравнейию со здоровыми, количестве la, содержащих лимфоцитов ниже 10 (, количестве LFA — 1, содержащих лимфоцитов ниже

570, у больного с группой крови A(ll) прогнозируют развитие увеита. Способ по сравнению с прототипом позволяет прогнозировать развитие увеита у больных до развития симптомов основного соматического заболевания. кратным центрифугированием по 20 мин при 1000 об/мин.

Выделенную таким способом культуру лимфоцитов разводят средой 199 для получения концентрации не более 1,5-2 х 10 б клеток в 1 мл.

Предметные. стекла заготавливаются следующим образом.

На предварительно обезжиренные и слегка подогретые на пламени газовые горелки накладывают кусочек парафильма M с вырезанными отверстиями-лунками диаметром от 3 до 5 мм и плотно прижимают к стеклу с целью полного приклеивания. Подогрев следует проводить осторожно, чтобы парафильм не расплавился, иначе лунка будет мелкой и содержимое ее может соединяться с содержимым соседней лунки, но и

1727074 не слабым, иначе содержимое лунки будет затекать под парафильм, Такие стекла могут храниться длительное время.

В день исследования в лунки наносят поли-L-лизин (20 — 50 мкг/мл) и для контакта помещают на 1 ч в термостат при 37 С.

Далее отмывают в среде 199 от избытка поли-L-лизина и в такие подготовленные лунки помещают культуру клеток в количестве 20 — 50 мкл в зависимости от диаметра лунки с последующей инкубацией в термостате в течение 1 ч. Далее в эти лунки вносят моноклональные антитела (МКАТ) и вновь инкубируют в течение 1 ч в термостате.

П ромы вают от излишка MKAT 5 раз по 1 мин в среде 199. Для окрашивания клеток наносят 20 — 50 мкл F (aa)z.— фрагмента кроличьей люминесцирующей сыворотки против глобулинов мыши. Контакт с красящим фрагментом проводят в течение 1 ч при 4 С в холодильнике, Затем промывают пятикратно в стаканах со средой 199 (по 30 — 50 мл среды} в течение 1 мин в каждом. После этого в лунку вносят 50%-ный глицерин, закрывают лунки покровным стеклом. Препарат готов к микроскопическому исследованию, В качестве MKAT служила асцетическая жидкость от мышей-носителей гибридомы, линии ВА В/С s разведении 1:100. В работе использованы MKAT серии ИКО:ИКО-1 против 1а-антигенов и IK0 — 11 против LFA-f-антигена, F(ab)z-фрагменты приготовляли из кроличьей антисыворотки против иммуноглобулинов белой мыши, меченых ФИТЦ, причем приготовляли их по стандартной методике, адсорбировали печеночным порошком и лимфоцитами человека и в реакции использовали в разведении 1:1 О.

Микроскопия проводится в фазовоконтрастном и люминесцентном режимах с исследо ва ни ем нес кол ьк их полей з рени я попеременно; то в одном, то в другом режиме с подсчетом 200 клеток специфического типа иммунофлюоресценции при увеличении объектива х90 — 100, окуляра 2,5 — 10 под масляной иммерсией.

Согласно литературным данным, Ia-антигены участвуют в презентации антигена, клеточном взаимодействии, определяют генетическую рестрикцию и силу иммунной реакции, LFA-!.-лимфоцитарный функционально ассоциированный аьтиген участвует в начальной распознающеадгезионной фазе реакции цито-оксических T-лимфоцитов и играет роль "адгезионного клея".

Недостаточность.и отсутствие )а- и LFA+ антигенов обуславливают дефект гумо10 ность экспрессии от 10% и ниже для! а- и от

45 тается сниженным и расценивается как угнетение функциональной активности Тл и м фо цито в.

По нашим данным у 42,7% больных часто рецидивирующими увеитами отмечался

50 сниженный пролиферативный ответ лимфоцитов на неспецифический митоген.

40 рального и клеточного иммуНитета и приводят к иммунодефициту.

В контрольной группе доноров — практически здоровых людей (75 чел) экспрессия! а-антигена составила диапазон от 11 % до

35% в среднем 29 2,3%. Экспрессия (.РА+ антигена в контроле (20 чел) колебалась в пределах 6 — 15% в среднем 12,4+.1,4%. Эти данные позволили расценивать выражен5% и ниже для LFA- антигенов как проявление дефицита la- u LFA-(-положительных клеток.

Сопоставление выраженности экспрессии la- и ЫА+антигенов на мононуклеарах крови у больных увеитами в зависимости от характера течения увеита показало достоверно выраженную связь между дефицитом

la- и LFA+положительных клеток и часто рецидивирующим характером течения увеита (р < 0,01; р < 0,01).

Реакцию бластрансформации лимфоцитов с неспецифическим митогеном про-. водят по общепринятой методике и используют либо фитогемагглютинин фирм

ОИЕо или Wellkome или отечественный лимфоцитарный митоген вдазе 0,,05.мл на 3 мл культуральной смеси. После трехдневной инкубации в термостате при микроскопировании мазка, приготовленного из инкубированной культуры клеток, определяют число бластных клеток на 500 лимфоцитов и выражают в процентах, Мазки окрашивались водным раствором азурэозина следующего состава: эозин 20 мл; азур 26 мл; дистиллированной воды до 100 мл. Краска наносилась на мазок в объеме 3-4 мл на

10 — 15 мин, Затем мазки промывались под струей проточной воды, Краска наносилась на мазок в объеме 3 — 4 мл на 10 — 15 мин, Затем мазки промывались под струей проточной воды. Краска готовилась excamporee. При наличии менее 55% бластов пролиферативный ответ лимфоцитов счиОпределение групповой принадлежности крови больного по системе АВ0 проводитсяя по ста нда ртной методике определения эритроцитарных антигенов с помощью коммерческих гемагглютинирующих сывороток 4-х групп кровищ(0, а, Pj, И(А, Д, !!! (В, а), lV (A, D. О), 1727074

Пример 1, Б-ной Б., 23 года, амбулаторная карта М 7870/88.

Диагноз: генерализованный увеит ОИ (обоих глаз), неактивный. Длительность заболевания 2„5 года. Заболевание левого глаза 5 (OS) возникло без видимой причины в фев-. рале 1987 года, правый глаз (ОД) заболел через год, в феврале 1987 г. До августа

1988 г рецидивы увеита ОД отмечались 3 раза, левого глаза — 10 раз, 10

При первичном иммунологическом обследовании обнаружены; низкое содержание Ia u LFA-f клеток (10 и 5% соответственно); сниженный ответ лимфоцитов на лимфоцитарный митоген (42%); 15 группа крови А(И).

Полученные данные позволили предположить неблагоприятный прогноз, Клиническое течение: возникновение рецидива увеита левого глаза через 6 мес в 20 виде субретинальных геморрагий и отека сетчатки.

Пример 2. Б-ной A„36 лет, амбулаторная карта Q 6153/88. Диагноз: ангиит

ОД, Процесс первичный, длительность за- 25 болевания 2 мес. Прибыл в институт для уточнения диагноза и лечения. При иммунологическом обследовании установлены низкие уровни 1а- и LFA- содержащих клеток (10 и 3% соответственно),, группа крови А 30 (II); снижение функциональной активности лимфоцитов (40% бластных форм). Прогноз неблагоприятный по иммунологическим показателям.

Клиническое течение: рецидив гемоф- 35 тальма ОД через 2 мес после окончания курса лечения.

Пример 3. Б-ой С„38 лет, амбулаторная карта М 12388/88. Диагноз: генерализованный уверит ON неактивный. 40

Длительность заболевания левого глаза

25 лет, правого глаза 1 год. До мая 1988 года обострения на левом глазу отмечались 12 раэ, на правом — 2 раза. В момент обследования установлены: группа крови 45

A(II), низкий уровень IA - и LFA-1 клеток (8 . и 1% соответственно), сниженный пролиферативный ответ лимфоцитов в РБТ на неспе. цифический митоген (45%).

Прогноз неблагоприятный по. иммунологическим данным. Клиническое течение; рецидива правого глаза — свежие полиморфные преципитаты через 8 мес.

Предложенный способ прост. Все исс55 ледования проводятся одномоментно, окончательный результат может быть получен в достаточно короткий временной промежуток (4 дн).

Предложенный способ прогнозирования тяжести течения увеита основан на последних достижениях фундаментальной иммунологии с применением новейших методов исследования, в частности моноклональных антител, позволяющих определять качественные и количественные дефекты в иммунной системе.на молекулярном уровне.

Использование предлагаемого способа на основании оценки функции иммунокомпетентных клеток, групповой принадлежности крови больного по системе АВО дает возможность прогнозирования рецидива увеита, определения групп больных повышенного риска рецидива, нуждающихся в диспансерном наблюдении, и возможность предупредить развитие тяжелых исходов путем своевременного профилактического патогенически обоснованного курса лечения с применением иммуномодуляторов направленного действия и, как следствие, сокращение и уменьшение трудопотерь, увеличение продолжительности трудоспособного периода больного.

Предлагаемый способ позволяет прогнозировать развитие рецидивов увеита без клинического проявления основного соматического заболевания. а по прототипу. возможно прогнозировать увеит только в . случае развития у больного симптомов общего заболевания.

Формула изобретения

Способ прогнозирования рецидивов . увеита, включающий забор крови, инкубацию ее с митогеном и определение уровня бласттрансформации, отличающийся тем, что, с целью раннего прогнозирования до развития симптомов основного заболевания, дополнительно выявляют в крови лимфоциты, содержащие la u LFA-1 антигены, устанавливают групповую принадлежность крови.и при снижении уровня бласттрансформации по сравнению со здоровыми при количестве Ia, содержащих лимфоцитов ниже 10%, и количестве LFA-1 содержащих лимфоцитов ниже 5, у больного с группой крови А(Ц), прогнозируют рецидив увеита.