Питательная среда для культивирования хлортетрациклина

Питательная среда для культивирования хлортетрациклина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: в микробиологической промышленности для производства антибиотика-хлортетрациклина. применяемого в животноводстве в качестве кормового витаминсодержащего и лечебного препарата. Сущность изобретения: споровым материалом штамма - продуцента Straureofaciens ТБ-633ФУ (ВКПМ S-755) засевают посевные колбы с 60 мл среды следующего состава, мас.%: кукурузная мука 6.0, кукурузный экстракт (са) 2,5, рН 6,75. Выращивают посевную культуру при 28° С на качалке (240 об/мин) в течение 24, ч. Выросший инокулят в количестве 5 об.% вносят в ферментационную среду следующего состава, мас.%: кукурузная мука 8.0. кукурузный экстракт (св.) 0.3. кормобактерин 0.2, NH CI 0.4. NH4N03 025. (INH ) НРО 0,02. мел 0.75. подсолнечное масло 1,0, роданистый бензил 0,00025. вода остальное. Ферментацию ведут в колбах Эрленмейера вместимостью 750 мл на качалке (24Х) об/мин) при 28° С. Через 144 ч культивирования штамм ТБ-633ФУ накапливает 11800 мкг/мл хлортетрацеклина. на 29.0% выше по сравнению с прототипом. 1 табл.

(19) ЯУ (и) (51) 5 С 12 P 29 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) (21) 4748864/13 (22) 17.07.89 (46) 15.12 .93 Бюл. Йа 45-46 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроор-ганизмов; Лотошинский биохимический завод (72) Зайцева З.М„Бобылева P.È.; Ломовская НД„

Воейкова ТА; Емельянова Л.К.; Шувалова ИА; Петренко АА: Крицкий В.И„Крицкая РА; Шашаева ВА (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ П РОДУЦЕНТОВ ХЛОРТЕТРАЦИКЛИНА (57) Использование: в микробиологической промышленности для производства антибиотика-хпортетрацикпина, применяемого в животноводстве в качестве кормового витаминсодержащего и лечебного препарата. Сущность изобретения: споровым материалом штамма — продуцента Str.aureofaciens

ТБ-633ФУ (ВКПМ S 755) засевают посевные колбы с 60 мл среды следующего состава, мас%; кукурузная мука 6,0, кукурузный экстракт (св.) 2,5, рН

6,75. Выращивают посевную культуру при 28 С на качалке (240 об/мин) в течение 24 ч. Выросший инокулят в количестве 5 об.% вносят в ферментационную среду следующего состава, MaG%: кукурузная мука 8,0, кукурузный экстракт (св.) 0.3, кормобактерин 0,2, NH Cl 04, NH NO 025, .4 3 (NH ) НРО 0,02. мел 0,75, подсолнечное масло 1,0, 42 «4 роданистый бензил 0,00025, вода остальное. Ферментацию ведут в колбах Эрленмейера вместимостью 750 мл на качалке (240 об/мин) при 28 С.Через 144 ч культивирования штамм ТБ-633ФУ накапливает 11800 мкг/мп хлортетрацекпина, на

29.0% выше по сравнению с прототипом. 1 табл.

1729123

8.0-9,0

0,3-0,8

0,2-0,4

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству антибиотика-хлортетрациклина (ХТЦ), который широко используется в животноводстве в качестве кормового витаминсодержащего и лечебного препарата.

Известны питательные среды для штаммов Streptornyces aurofaclens — продуцента хлортетрациклина, содержащие кукурузную муку, кукурузный крахмал, сахарозу, кукурузный экстракт, минеральные соли (аммонийные; .нитратные, фосфатные) и микроэлемента.

Извесь на- также среда следующего состава, мас.%:

Кукурузная мука 8,0-9,0

Кукурузный экстракт (с. в) 0.25-0,60

Источники хлора 0,2-0,8

Источники неорганического азота 0,5-1.3 (ЙН3)2НРОа 0,010 — 0,5

Мел

1 0,75-1,0

Жир 1,0 — 5,0

Роданистый бензил 0,0003-0,0005

Водопроводная вода Остальное

Недостатком прототипа является невысокий уровень накопления антибиотика (12000 мкг/мл) и большая длительность процесса ферментации (168 ч).

Целью изобретения является повышение уровня накопления ХТЦ при одновременном сокращении времени ферментации.

Для этого питательная среда для получения хлортетрациклина продуцентом

Streptomeces aureofaciens, содержащая кукурузную муку, кукурузный экстракт, источники азота и хлора, мел, жир, роданистый бензил, фосфорнокислый аммоний и воду, дополнительно содержит кормобактерин при следующих соотношениях компонентов, мас.%:

Кукурузная мука

Кукурузный экстракт (с.в.)

Кормобактерин

Источники азота и хлора 0,65-1, 1

Фосфорно кислый аммоний 0,02-0,04

Мел 0,75-1,0

Роданистый бензил 0;00025-0,0005

Жир 1,0 — 4,0

Водопроводная вода Остальное

Предлагаемая питательная среда позволяет при выращивании производственного штамма Str.aureofaclens ТБ-633 ФУ в течение 74-96 ч накапливать 7000 — 10000 мкг/мл ХТЦ, штамма Str. aureofaciens

"ВНИИгенетика-723" 9000-13000 мкг/мл

ХТЦ. За 120-144 ч культивирования штамм

Т Б-633 Ф У си нтезирует 10000-14600 мкгlмл, а штамм "В Н И И генетика-723"—

11800-16200 мкг/мл ХТЦ.

Эффективность предлагаемой ферментационной среды иллюстрируется следующими примерами, Пример 1, В качестве продуцента

10 используют штамм Str. aureofaclens ТБ-633

ФУ (ВКПМ S-755). Споровым материалом, хранящимся на агаризованной среде засевают посевные колбы с 60 мл среды следующего состава мас. кукурузная мука 6,0, 15 кукурузный экстракт (с.в.) 2.5, рН 6,75. Выращивают посевную культуру при 28 С на качалке (240 об/мин) в течение 24 ч. Выросший инокулят в количестве 5 об,% вносят в ферментационную среду следующего соста20 вэ, мас / °

Кукурузная мука 8,0

Кукурузный экстракт (с.в. ) 0,3

Кормобактерин 0,2

25 NH4CI 0,4

NH4N03 0,25 (NНа)2НРОа 0,02

Мел 0,75

Подсолнечное масло .1,0

30 Роданистый бензил 0,00025

Вода Остальное

Ферментацию вед т в колбах Эрленмейера вместимостью 750 мл на качалке (240 o6/мин) при 28 С. Антибиотическую

35 активность оценивают фотоколориметрическим методом через 144 ч культивирования.

Через 144 ч культивирования в культурной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накаливает

11800 мкг/мл ХТЦ.

40 Пример 2, Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 1 при использовании ферментационной среды следующего состава, мас.%:

Кукурузная мука 8,0

Кукурузный экстракт (с.в.) 0,42

Кормобактерин 0,25

NH4CI 0,4

NH4N03 0,6 (МНа)2Н РОа 0,035

Мел 0,8

Подсолнечное масло 3,0

Роданистый бензил 0,0003

Вода Остальное

55 В этом случае используют ферментационную среду с оптимальным соотношением компонентов.

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм ТБ-633ФУ накапливает 14600 мкг/мл ХТЦ.

1729123

Г

Пример 3. Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 2 при использовании ферментационной среды следующего состава, мас. :

Кукурузная мука 8;2 5

Кукурузный экстракт (с.в.) 0,42

Кормобактерин 0,25

NHqCI 0,4

NH

Мел. 0,8

Подсолнечное масло 3,0

Роданистый бензил 0,0003

Вода Остальное,15

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накапливает 13800 мкг/мл ХТЦ.

Пример 4. Выращивают посевной материал и ведут ферментацию как в приме- 20 ре 1 при использовании ферментационной среды с максимальным содержанием компонентов,.а именно, мас. /:

Кукурузная мука 9,0

Кукурузный экстракт 25 (с.в.) 0,8 .

Кормобактерин 0,4

NH4CI 0,45

МН4ЙОз 0,65 .-(ИН4)2НР04 0,04 30

Мел 1,0

Подсолнечное масло 4,0

Роданистый бензил 0,0005

Вода Остальное

Через 144 ч культивирования в культу- 35 ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накап- . ливает 10200 мкг/мл ХТЦ.

Пример 5. Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 2. Ферментационная среда отличо- 40 ется от среды, приведенной в примере 2, тем, что в качестве источника азота и хлора . в ней используют NH4CI в количестве 0,65 мас. /.

Через 144 ч культивирования в культу-:45 ральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накапливают 12980 мкг/мл ХТЦ.

Пример 6, Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 5, Ферментационная среда отлича- 50 ется от среды, приведенной в примере 5, тем, что в ней используют NH4CI в количестве 0,75 мас./.

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм ТБ-633 ФУ накап- 55 ливает 14620 мкгlмл ХТЦ, Пример 7, Выращивают посевной материал и ферментацию проводят как в примере 5. Ферментационная среда отличается от среды, приведенной в примере 5, тем, что в ней используют NH

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм TB-633 ФУ накапливает 12800 мкгlмл ХТЦ, Пример 8. В качестве йродуцента используют штамма Str. aureofaclens "ВНИ. Игенетика-723 (ВКПМ-863)". Споровым материалом, хранящимся на агаризованной среде, засевают посевные колбы с 60 мл среды, приведенной в примере 1. Выращивают посевную культуру при 32 С на качалке (240 об/мин) в течение 28 ч. Выросший инокулят в количестве 5 об.$ вносят в ферментационную среду, приведенную в примере 1. Ферментацию проводят при 32 С.

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости. штамм "ВНИИгенетика723" накапливает 12300 мкг/мл.ХТЦ, Пример 9. Используют штамм "ВНИИгенетика-723". Выращивают инокулят и ферментацию проводят как в примере 8 на ферментационной среде. представленной в примере 2, Через 144 ч культивирования s культурал ь ной жидкости штамм " В Н ЙИгенетика723" накапливает 162000 мкг/мл ХТЦ.

Пример 10. Используют:штамм "ВНИИгенетика-723". Выращивают инокулянт и ферментацию проводят как в примере 8 на ферментационной среде, представленной в примере 3.

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм "ВНИИгенетика723" накапливает 15100 мкг/мл ХТЦ.

Пример 11. Используют штамм "ВНИИгенетика-723". Выращивают..инокулят и ферментацию проводят как в. примере 8 на ферментационной среде. представленной в примере 4.

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм "ВНИИгенетика723" накапливает 11800 мкг/мл ХТЦ;

Пример 12. Используют штамм "В Н ИИгенетика-723". Выращивают инокулят и ферментацию проводят как в примере 8 на ферментационной среде, представленной в примере 5.

Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм "ВНИИгенетика723" накапливает 13200 мкг/мл ХТЦ.

Пример 13. Используют штамм "В НИИгенетика-723". Выращивают инокулят и ферментацию проводят как в примере 8.на ферментационной среде, представленной в примере 6, Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости штамм "ВНИИгенетика723" накапливает 16180 мкг/мл ХТЦ.

1729123

Пример 14, Используют штамм

"ВНИИгенетика-723". Выращивают инокулят и ферментацию проводят как в примере

8 на ферментационной среде, представленной в примере 7. 5

Через 144 ч культивирования в культу- ральной жидкости штамм "ВНИИгенетика723" накапливают 13600 мкгlмл ХТЦ.

Таким образом, предлагаемая среда позволяет повысить выход хлортетрациклина 10 (56) Авторское свидетельство СССР

М 437343, кл. С 23 P 29/00, 1975.

Сравнительное содержание ХТЦ в культуральной жидкости двух штаммов Str.

aureofacIens на среде-прототипе и предлагаемой

1 — концентрация хлортетрациклина в таблице указана в мкг/мл.

Кукурузный экстракт 0,3 - 0,8

Кормобактерин 0,2 - О;4

Источники азота и хлора 0,65 - 1,1

Фосфорнокислый аммоний 0,02 - 0,04

Мел 0,75- 1,0

Роданистый бензил 0,00025 - 0,0005

Жир 1,0-4,0

Вода Остальное

2. Питательная среда по п.1, отличающаяся тем, что в качестве источников азота и хлора используют смесь NH4CI и ЙН4ЙОз при следующем соотношении компонентов в среде, мас. :

25 NH4CI 0,4- 0,45

ИН4МОз 0,25 - 0,65 или NH4CI в количестве 0,65 - 1,1 мас, .

Формула изобретения

Составитель Н.Афанасьева

Техред М.Моргентал Корректор H. Милюкова

Редактор

Тираж Подписное

НПО ."Поиск" Роспатента .

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,. 4/5

Заказ 3353

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

1. ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОДУЦЕНТОВ ХЛОРТЕТРАЦИКЛИНА продуцентом

Streptomyces aureofaclens, содержащая кукурузную муку, кукурузный экстракт, источники азота и хлора, мел, жир, роданистый бензил, фосфорнокислый аммоний и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения накопления хлортетрациклина и сокращения времени ферментации, она дополнительно содержит

«ормобактерин при следующих соотношениях комйонентов, мас. :

Кукурузная мука 8,0- 9,0

8 по сравнению с прототипом для штамма

Str.aureofaclens ТБ-633 ФУ через 72 ч культивирования на 39,7, через 144 ч — на

29,0, а для штамма "ВНИИгенетика-723" через 72 ч культивирования на 29 0, а через 144 ч — 38,8%.