Адъювант вгнки для биопрепаратов

Адъювант вгнки для биопрепаратов

Реферат

 

Использование: биотехнология, изготовление биопрепаратов. Сущность изобретения: предложен адъювант для биопрепаратов, содержащий полиэтилсилоксановую жидкость марки ПЭС-3 в качестве основы и этерифицированный полиглицерин в качестве эмульгатора, при следующем соотношении компонентов, мас. полиэтилсилоксановая жидкость ПЭС-3 91-94, этерифицированный полиглицерин 6-9. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и касается адъювантов, используемых при изготовлении биопрепаратов. Известен адъювант для вакцин против пастереллеза животных, содержащий вазелиновое масло, безводный ланолин и триэтаноламиновое мыло жирных кислот кашалотового жира. Однако вакцина, приготовленная с его использованием, имеет высокую реактогенность, что сопровождается образованием абсцессов. Кроме того, при хранении происходит разрушение антигена на линии раздела фаз и, как следствие, снижение иммуногенной активности. Известен адъювант для ящурных вакцин, позволяющий изготавливать эмульсии множественного типа пониженной вязкости, содержащий минеральное масло, оксиэтилированную олеиновую кислоту, смесь моно- и диэфиров полиэтиленгликоля олеиновой кислоты. Наиболее близким к предлагаемому является адъювант, в состав которого в качестве основы входит 83% легкого минерального масла для эмульгированных вакцин и антигенов (ТУ-38101307) и в качестве эмульгатора 17% безводного ланолина. Вакцина на основе этого адъюванта представляет собой эмульсию типа вода в масле. Однако проблема адъюванта актуальна и в настоящее время. Известные адъюванты не всегда обеспечивают повышение эффективности биопрепаратов, так как часто сами относительно реактогенны и нестабильны, и соответственно препараты, содержащие такие адъюванты, реактогенны и нестабильны при хранении. Цель изобретения повышение эффективности биопрепаратов за счет снижения реактогенности, повышения иммуногенной активности и стабильности при хранении, а также снижение трудоемкости процесса иммунизации. Предложен адъювант для биопрепаратов, содержащий полиэтилсилоксановую жидкость марки ПЭС-3 в качестве основы и полиглицерин, этерифицированный в качестве эмульгатора, при следующем соотношении компонентов, мас. Полиэтилсилоксановая жидкость ПЭС-3 91-94 Этерифицированный полиглицерин 6-9 Полиэтилсилоксановая жидкость марки ПЭС-3 представляет собой смесь полимеров преимущественно линейной структуры, прозрачная, без цвета, химически инертна, взрывобезопасна, не токсична, не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки. Применяется как охлаждающая жидкость, а также в качестве добавки в полировальные составы (ГОСТ 13004-77). Этерифицированный полиглицерин включает смесь эфиров полиглицерина и непредельных жирных кислот, получаемую переэтерификацией рафинированного подсолнечного или хлопкового масла полиглицерином. Это подвижная вязкая жидкость, полностью растворяющаяся в 96%-ном этиловом спирте. Обладает хорошим эмульгирующим действием, применяется в косметической промышленности (ТУ 18-17135-75). Готовый адъювант прозрачная маслянистая жидкость с желтоватым оттенком, не растворяется в воде. Эмульсия адъюванта с водой не расслаивается после центрифугирования при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин и термостабильна с водой при 45^оС в течение 6 ч. Предназначен для изготовления вакцинных препаратов для профилактики вирусных и бактериальных заболеваний, а также в смеси с антигеном для гипериммунизации продуцентов при получении сывороточных препаратов. П р и м е р 1. К основе полиэтилсилоксановой жидкости ПЭС-3, добавляют эмульгатор этерифицированный полиглицерин. Смесь автоклавируют при 120^оС в течение 1 ч. Получают серии адъюванта со следующим компонентным составом, мас. Полиэтил- симокса- новая жидкость 1 2 3 4 ПЭС-3 91 92 93 94 Этерифици- рованный поли- глицерин 9 8 7 6 П р и м е р 2. Адъювант ВГНКИ используют при изготовлении вакцины против пастереллеза животных. Для приготовления адъюванта к 910 см³ полиэтилсилоксановой жидкости ПЭС-3 добавляют 90 см³ этерифицированного полиглицерина, смесь тщательно перемешивают и автоклавируют при 120^оС 1 ч. Получают 1 л адъюванта ВГНКИ и после охлаждения до комнатной температуры к нему медленно приливают при постоянно работающей мешалке (1,5-2,0 тыс. об/мин) равный объем антигена, перемешивание продолжают 20-30 мин. После этого эмульгируют на коллоидной мельнице проточного типа, откуда вакцина сразу поступает на расфасовку. В качестве антигена используют формалинизированную суспензию четырех производственных штаммов пастерелл, входящих в состав коммерческих вакцин, а именно штаммы N 796, 116, 877 и 656. Полученная вакцина, содержащая 50% антигенного материала и 50% приготовленного адъюванта ВГНКИ, представляет собой стойкую эмульсию, выдерживает центрифугирование при 3000 об/мин в течение 0,5 ч. Хранится без изменения 2 недели в термостате и 1 год при комнатной температуре, не загустевает при 4^оС, легко проходит через просвет иглы обычного диаметра. Реактогенность вакцины против пастереллеза животных, приготовленной с использованием предлагаемого адъюванта ВГНКИ, при проверке на белых мышах соответствовала 34,5% тогда как с использованием ангарского и парафинового масла с ланолином соответственно 142-150, маркола и ярославского масла 50-60% Приведенные данные коррелируют с результатами, полученными на кроликах. Испытание иммуногенной активности полученной вакцины в сравнении с биопрепаратами, в состав которых входит такой же антигенный материал, но другие адъюванты, проводят на кроликах. Препарат вводят животным внутримышечно в дозе 1,5 мл однократно. Через 21 день все группы вакцинированных и контрольных кроликов заражают путем введения в бедренную группу мышц вирулентного штамма пастерелл в заранее подтитрованной летальной дозе. Результаты представлены в табл. 1. Из представленных данных видно, что наибольшей иммуногенностью обладают вакцины, изготовленные с использованием в качестве адъюванта ангарского масла, ланолина и адъюванта ВГНКИ, несколько слабее ярославского масла с ланолином, а также жидкости ПЭС-3 с ланолином. Однако, принимая во внимание сильную реактогенность ангарского масла и высокую вязкость, связанную с ланолином, предпочтительным является адъювант ВГНКИ, состоящий из жидкости ПЭС-3 и этерифицированного полиглицерина. П р и м е р 3. Предложенный адъювант используют при изготовлении вакцины против ТГЭ свиней. Для изготовления адъюванта к 920 см³ полиэтилсилоксановой жидкости ПЭС-3 при перемешивании добавляют 80 см³ полиглицерина этерифицированного. Полученную адъювантную смесь, содержащую 92% полиэтилсилоксановой жидкости ПЭС-3 и 8% полиглицерина, после автоклавирования смешивают в соотношении 1:1 с инактивированным вируссодержащим материалом штамма V-91 вируса ТГЭС в 0,5%-ном гидролизате лактальбумина на растворе Хенкса с исходной биологической активностью 10^7,0 ТЦД_50/мл. Активность полученной вакцины изучают в сравнении с препаратами, содержащими идентичный антигенный материал, но другие адъюванты. Препараты вводят 21-23-дневным поросятам внутримышечно двукратно с интервалом 21 день. Антигенную активность определяют в РНГА по уровню титров антител в сыворотке крови животных через 21 день после вакцинации и через 15, 30, 45 дней после ревакцинации. Результаты представлены в табл. 2. Введение адъюванта в инактивированную вакцину усиливает ее антигенную активность, более выраженным эффектом обладает адъювант ВГНКИ. П р и м е р 4. Адъювант ВГНКИ, содержащий 94% полиэтилсилоксановой жидкости ПЭС-3 и 6% полиглицерина этерифицированного, смешивают в соотношении 1:2 с антигенным материалом из штаммов возбудителей рожи свиней. Вакцину вводят белым мышам по 0,5 мл внутрибрюшинно и на 30-й день заражают контрольным штаммом эризипелотриксов в дозе 10 ЛД₅₀. В итоге из 10 зараженных 9 мышей не заболели. Этот же препарат проверен и на свиньях при однократнорм внутримышечном введении по 2 мл. В результате контрольного заражения через месяц контрольным штаммом эризипилотриксов в дозе 1 тыс. ИД вакцинированные животные не заболели, а у непривитых отмечены клинические признаки рожи. Параллельно свиньи, привитые однократно КГОА формолвакциной в дозах 6, 3, 1, 5 мл, при заражении проявили разной интенсивности признаки рожи. Полученные данные показали, что использование адъюванта ВГНКИ в противорожистой вакцине позволяет уменьшить дозу, сократить кратность применения и повысить специфическую активность.

Формула изобретения

Адъювант для биопрепаратов, содержащий основу и эмульгатор, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности биопрепаратов за счет снижения их реактогенности, повышения иммуногенной активности и стабильности, а также снижения трудоемкости процесса иммунизации, в качестве основы он содержит полиэтилсилоксановую жидкость, а в качестве эмульгатора этерифицированный полиглицерин при следующем соотношении компонентов, мас. Полиэтилсилоксановая жидкость 91 94 Полиглицерин 6 9

РИСУНКИ

Рисунок 1