Способ получения производных тилозина

Способ получения производных тилозина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение касается производных тилозина, в частности получения соединений общей ф-лы I: .ОН HjCO ООН} ЭД Htt-(r -0-Hjll , Ь Hrtc -fl Из f A HLf4 О-fu-OR1 CHj «я1или водород; R2 , которые обладают высокой антимикробной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут оксимированием соединения ф-лы (I), где в положении 9 имеется кето-группа, и R2 -СН(ОСНзЬ с помощью 1-10 молей гидроксиламиногидрохлорида в присутствии избытка пиридина или карбоната натрия с использованием, при необходимости, растворителя - спирта в токе азота в течение от 15 мин до 10 ч при температуре от комнатной до кипения. В случае получения соединения с R2 -СН(ОСНз)2 проводят деацетализацию в среде водного раствора ацетонитрила в присутствии каталитического количества трифторуксусной кислоты или HCl при комнатной температуре. Новые вещества малотоксичны и проявляют антимикробную активность выше, чем известные аналоги. 2 табл. VI W О Os W

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ОН вн, ОК

Н ЕСО ОСа> Н, "2С, НС Н2С снэ (21) 4613684/04 (62) 4355567/04 (22) 27.03,89 (23) 13.04.88 (31) P 674/87 (32) 14.04.87 (33) YU (46) 30,04.92. Бюл, hb 16 (71) Соур Плива Фармацойтска, Кемийска, Прерамбена и Козметична Индустрия, н.сол. о. (YU) (72) Амалия Нарандя, Божидар Шушкович, Слободан Дьекич и Новенка Лопотар (YU) (53) 547.841.07 (088.8) (56) А Med. Chem., 1972, 15, с. 1011. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОД"

НЫХ ТИЛОЗИНА (57) Изобретение касается производных тилозина, в частности получения соединений общей ф-лы I:

Изобретение относится к получению новых биологически активных соединений тилозинового ряда, применяемых в фармацевтических препаратах, в частности в микробицидных средствах.

Тилозин представляет собой 16-членный макролидный антибиотик, применяемый в ветеринарной практике. Однако это,,5U„, 1731063 АЗ (з2)з С 07 Н 17/08//А01 и 43/90 з или водород; R = — СН=О, которые обладают г высокой антимикробной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель — создание новых более. активных веществ указанного класса. Синтез ведут оксимированием соединения ф-лы (I), где в положении 9 имеется кето-группа, и

R = -СН(ОСНз)г, с помощью 1-10 молей гидроксиламиногидрохлорида в присутствии избытка пиридина или карбоната натрия с использованием, при необходимости, растворителя — спирта в то ке азота в течение от 15 мин до 10 ч при температуре от комнатной до кипения, В случае получения соединения с

R2 = -СН(ОСНз1г проводят деацетализацию а в среде водного раствора ацетонитрила в присутствии каталитического количества трифторуксусной кислоты или НС1 при ком- а натной температуре. Новые вещества малотоксичны и проявляют антимикробную р активность выше, чем известные аналоги. 2 табл.

C) соединение обладает недостаточно высокой антибактериальной активностью.

Цель изобретения — получение новых производных тилозина, обладающих более высокой антимикробной активностью.

Эта цель достигается способом получения производных тилозина формулы I

1731063 раторном штамме Sarcina lutia и на 50 раз0}1 личных штаммах, выделенных из свежих об0}1 разцов пациентов. Минимальную е 1 ингибиторную концентрацию (MIC) опреде11 7

6 5 ляли методом разбавления на агаре.

Результаты испытаний представлены в

0}1

0Н табл. 1 и 2, Соединения формулы l малотоксичны.

Пример 1. Тилозин альдоксим (la).

10 Тилозин (ila) 4,58 r (5,0 ммоля) растворяли в этаноле (100 мл) и после перемешивания добавляли пиридин (2,5 мл) и гидрохлорид гидроксиламина (0,348 г, 5 ммоля), полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 15 мин в ат15 мосфере азота. После охлаждения добавляли 50 мл воды и устанавливали РН системы равным 7,0 с помощью 1N раствора где R имеет указанные значения; NaOH. Затем смесь концентрировали при

Rl — СН(ОСНз)2-группа, подвергают ок- пониженном давлении до 1/3 первоначальсимированию действием 1 — 10-молярного ного объема и зкстрагировали хлороформом избытка гидрохлорида гидроксиламина в 20 (2 х150мл). Хлороформные экстракты обьеприсутствии избытка пиридина, или диняли и сушили над KzCOg. Фильтровали и

Ма2(СОз), в случае необходимости, в среде выпаривали досуха с получением 3,95 г такого растворителя, как спирт, в токе азота (84,9 / } продукта в виде смеси изомера, копр, юп мпературе от комнатной до темпера- торую можно разделить на колонке с силиА: туры кипения реакционной среды а течение 25 ка гелем (система времени от 15 мин до 10 ч, и полученное метиленхлорид:метанол:гидроокись аммосоединение формулы 1, где Rl — СН(ОСНз)- ния 90:9;1,5). MK (СНС!3) 1585, 1670, 1705, группа, подвеогают гидролизу в водном исчезновение полосы при2720см растворе ацетонитрила в присутствии ката- УФ (Ет ОН} il <, 283 нм, loge 4,3. литического коли.ества трифторуксусной 30 Н-ЯМР (ДМСО- d6/ д ч/млн.: 10,07) = кислоты или хлористоводородной кислоты N--ОН, С-20, исчезает после перемешивания при комнатной температуре. с В>О, 7,19 (Н, дублет, Н-11), 6,47 (Н, дублет, 7,>

Н-101 5,87 (Н, дублет, Н-13).

Выделение пРодУкта осУществлЯют, ía- C-ЯМР gMCO-dg/Д ч/млн; 202,72 (Cпример, осаждением или экстракцией гало- 35 9} 172 46 (С 1) 149,83 (С-20), 147,12 (С-11}, генированными растворителями из водных 142 14 (C 13) 134 86 (<- 12) 118 90 (10)

РаствоРов Wello"ей и ablnaP aaH a"l halo сУ 103,89 (С-1 ), 100,73 (С-1 ), 96,05 (С-1"), хого остатка. M 930.

Перед спектральным анализом продукты очищали на колонке с силикагелем. 40 Пример 2, Диметилацеталь-тилозинВ " С-ЯМР спектре тилозин-оксимов ис- оксим (lG). чезает характеристический сигнал карбо- Диметилацеталь тилозина (lie) 4,40 г (4,6 нильной группы в области 200 q/Mëí. и ммоля) растворяли в 20 мл пиридина, до-, появляется новый химический сдвиг в обла- бавляли гидрохлорид гидроксиламина (2,76 сти 150 — 165 ч/млн., характеристичный для 45 г„39,7 ммоля) и полученную смесь перемегруппы C=N, шивали в токе азота при комнатной темпеВ спектре Н-ЯМР полученных альдок- ратуре в течение 9 ч, К реакционной смеси симов исчезает характеристический сдвиг добавляли 200мл воды и 1 л ее подщелачиваальдегидоввобласти9,6ч/млн. и появляют- ли 1N раствором NaOH до значения РН 9, ся новые сдвиги в области 10,0-10.7 /млн., 50 после чего смесь концентрировали при посоответствующие-NOH группе, которые ис- ниженном давлении и экстрагировали хлочезают после перемешивания с DzO. Роформом (1 х 200 мл). Хлороформный слой

Изобретение обеспечивает получение сушили над К2СОз и фильтровали, фильтрат

TvllloaMH-оксимов, некоторые из которых выпаривали досуха с образованием 3,9 r проявляют значительную биологическую 55 (86,97,) сырого продукта. 2,0 r такого проактивность, дукта очищали методом хроматографии на

Антимикробную активность некоторых 200 r силикагеля (система А). соединений формулы l испытывали на лабоRu -,,-7" где R — микарозил или этом водорода, Rz — СНО группа, согласно которому соединение формулы ll

0 ю а г- СН1

}}Л C}}l H,0 7 0l, Н0 }1(0Hl)t

Ho l 0 — Н70 М 0 4 0Н1 "lf OR

НС вЂ” }1,0 5 Д . . 0}1

0 0}ц

1731063

В результате получали 1,50 r чистого целевого продукта, имеющего следующие физико-химические константы:

Rf (А) 0 443; Rf ( — хлороформ-метанолгидроксид аммония б:1:0,1) 0,786;

ИК (КВЧ) 1710, 1610 см

Y©/Et OH/ Лмакс,, 272 пм, log е 4,18;

1Н-ЯМР (ДМСО-Нв), д ч/млн, 10,51 (=N—

ОН), исчезае после перемешивания с 020, 7,07 (1Н, дублет, Н-11); 6,17 (1Н, дублет; Н10), 5,56(1Н, дублет, Н-13), 3,46(ÇH, синглет, 3 ОСНз); 3,37 (ÇH, синглет, 2 ОСНз); 3,20 (6Н, синглет, 2 х 20-)ОСНз, 2,41 (6Н, синглет, N(CHa)z).

М 976.

Пример 3, Тилозин-оксим (IC).

Диметилацеталь тилозин-оксима (Ib)

1,91 г, (1,95 ммоля) растворяли в 50 мл ацетонитрила, после чего добавляли 50 мл воды и 0,2 мл трифторуксусной кислоты, После перемешивания в течение 3 ч при комнатной температуре реакционный раствор подщелачивали до значения рН 8 — 8,5 путем добавления насыщенного раствора бикарбоната натрия и полученную смесь экстрагировали хлороформом. Объединенные экстракты промывали насыщенным раствором хлористого натрия и сушили над KzCOg, выделяли I,15 r сырого продукта, который подвергали хроматографической очистке на колонке с силикагелем.

Выход: 0,65 (35,8 /) продукта со следующими характеристиками;

Rf (А) 0,314;

Н-ЯМР (ДМСО-dg) д ч/млн. 10,65 (=NOH), исчезает после перемешивания с 020, 9,65 (1H, синглет, — СНО).

Пример 4. 4-Демикарозил-тилозиноксим диметилацеталь (Ы) 2,0 г (2,45 ммоля) диметилацетал 4 -демикарозилтилозина (lId) 20 мл пиридина и 1,38 г (19,86 ммоля) гидрохлорида гидроксиламина перемешивали в токе азота при комнатной температуре в течение 4 ч, после чего продукт выделяли в соответствии с методикой примера 2, Выход: 1,7 г (83,4%) продукта со следующими характеристиками:

Rf(A) 0,253; Rf(D) 0,599, УФ(Ет ОН) Л с, 272 нм, log е 4,26.

ИК (KBr) 1705, 1615 см

"Н-ЯМР (ДМСО-дв) д ч/млн,: 10,65 (=N—

СН), исчезает после перемешивания с Dz0, 3,20 (6Н, синглет, 20 — ) ОСНз (2).

Пример 5. 4 -Демикарозил-тилозиноксим (Ie).

Целевой продукт (id) примера 4 1,34 r (1,72 ммоля) растворяли в 40 мл смеси

0,1NHCI и СНзСИ (2,5:1) и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, после чего продукт выделяли в соответствии с методикой примера 3.

Сырой продукт (1,25 г) очищали на колонке с силикагелем.

5 Выход: 0,95 г (70,3 ) продукта со следующими характеристиками:

Rf(A) 0.,146; Rf(B) 0,468.

Y©(Et ОН) Q, с. 272 нм, log е 4,26.

Н-ЯМР (ДМСО-бв)д ч/млн: 10,65 (=N10 ОН}, исчезает после перемешивания с DzO, 9,65 (Н, синглет, — СНО).

Пример 6. Диоксим тилозина (If).

Сырой целевой продукт (la) примера 1

2,93 г (3,15 ммоля) растворяли в 20 мл мета15 нола, после чего добавляли 1,6 мл пиридина и 0,22 г (3,16 ммоля) гидрохлорида гидроксиламина и полученную смесь нагревали с обратным холодильником в токе азота в течение 10 ч. После охлаждения к реакцион20 ной смеси добавляли 40 мл воды и смесь подщела ивали 1N раствором Na0H до значения рН 9,0 и далее концентрировали до

1/3 первоначального объема. Суспензию перемешивали в течение 1 ч и фильтровали.

25 Полученный осадок повторно суспендировали в 10 мл воды, перемешивали в течение

10 мин, фильтровали и промывали водой с получением 1,4 г продукта.

Исходный фильтрат и отфильтрованные

30 промывные жидкости объединяли и экстрагировали хлороформом, Объединенные экстракты промывали водой и сушили над

К2СОз с образованием 0,7 г продукта, Общий выход: 2,1 r (70,6 ) продукта со

35 следующими характеристиками:

ИК (КВг) 1705, 1630 см

УФ (Et ОН) Лиакс., 272 нм, log Е 4,2.

Н-ЯМР (ДМСО-бв) д ч /млн, 10,66 и

10,11 (2х = N-OH) исчезает после перемеши40 вания с 020.

Пример 7. Реломицин оксим (Ig).

Реломицин (lie) 15 г, (16,6ммоля) растворяли в 75 мл пиридина, после чего добавляли гидрохлорид,гидроксиламина 5,64 r (81,2

45 ммоля), полученную смесь перемешивали в токе азота в течение 7 ч при комнатной ТеМ пературе. Сырой продукт (13,8 г) выделяли согласно методике, описанной в примере б.

Сырой продукт (2,9 г) очищали на колон50 ке с силикагелем. Получали 1,2 г чистого продукта со следующими характеристикаRf(A) 0,302, Rf(C) (CHzClz: СНЗОН = 85:15)

0,462, УФ (Et ОН) Лм с., 272 нм, log e 4,21.

ИК (KBr) 1700, 1630 см.

"Н-ЯМР (ДМСО-dg) д ч/млн.; 10,66 (=NOH), исчезает после перемешивания с 020.

1731063

С-ЯМР {СОС!3) д ч/млн; 173,99 (С-1), 160,45 (С-9, C=N), 137,03 {С-11), 135,58 (С-13), 134,78 (С-12), 117,07 (С 10), 105,21 (С-1), 100,83 (С-1"), 95,99 (С-1 ).

788 (М -микароз).

Пример 8. 10,11,12,13-Тетрагидро-тилозин-альдоксим (Ih) и 10,11,12,13-тетрагидро-тилозин-диоксим (! !), 10,11,12,13-Тетра гидро-тилозин (! If)

3,68 г (4,0 ммоля) растворяли в 20 мл метанола, после чего добавляли гидрохлорид гидроксиламина 1,39 r, (20,0 ммоля) и

Ма2СОз 1,06 r, (10,0 ммоля) и полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. К охлажденной реакционной смеси добавляли 40 мл воды, значение . рН устанавливали равным 7,0 с помощью 1N

Na0H и смесь экстрагировали хлороформом. Сырой продукт {3,2 г) представлял собой смесь двух соединений, которые можно разделить на колонке с силикагелем (система А).

Выход: 0,95 г (25,47) более полярного продукта (Ih) со следующими характеристиками: йf{B) 0,429.

Н-ЯМР (ДМСО-дв) дч/млн: 10,17 (=N—

0Н, С-20), исчезает после перемешивания с

020.

С-ЯМР (ДМСО-дб) д ч/млн 213,40 (С-9), 171,22 (С-1) 150 9 {С-20), 104,91 (С-1 ), 100,57 (С-1 ), 96,17 (С-1 ), М 934, Выход: 0,90 г (23,.7;ь) менее полярного продукта со следующими характеристиками:

Rf(8) 0,366, Н-ЯМР (ДМСО-dg) д ч/млн: 10,62 и

10,17 (2х = N — OH), исчезает после перемешивания с 020. зС-ЯМР (ДМСО-dg) д ч/млн;. 171,17 (С1), 150,79 (С-20), 150,18 (С-9), 104,74 (С-1 ), 100,51 (С-1 ), 96,11 (С-1 ).

M 949.

Пример 9. Диметилацеталь

10,11,12,13-тетрагидро-тилозин-оксима (lj), Из 4,25 г (4,4 ммоля) 10,11,12,13-тетрагидро-тилозин-диметилацеталь (!!д), растворенного в 20 мл пиридина, и 2,76 г (39,7 ммоля) идрохлорида гидроксиламина получали 3,5 г сырого продукта в соответствии сметодикой,,описанной в примере 2.

1,5 г сырого продукта очищали на колонке с силикагелем (система А) с получением

1,0 r чистого продукта со следующими характеристиками;

ИК(КВг) 1700, 1620 см

Н-ЯМР (ДМСО-dr) д ч/млн.: 10.65 (=N—

ОН, С-9), исчезает после перемешивания с

02О 3,23 (6Н, синглет, 20-) ОСНз (2).

С-ЯМР (ДМСО-d6) д q/Mëí: 171,17 (С5 1), 150,23 (С-9).

П "р и м е р 10. 10,11,12,13-Тетрагидротилозин-оксим (lk).

Из сырого продукта (!!) примера 9 (2,0 г

2,1 ммоля) 50 мл ацетонитрила, 50 мл воды

10 и 0,2 мл трифторуксусной кислоты согласно методике, описанной в примере 3, выделяли

1,6 r сырого целевого продукта. После очистки на колонке с силикагелем получали 1,2

r (61,2 ф,) продукта со следующими характе15 ристиками:

Н-ЯМР (ДМСО-с!6) д ч/млн: 10,65 (=N—

ОН, С-9), исчезает после перемещения с

020 9,65 (Н, синглет, — СНО).

С-ЯМР (ДМСО-бб) д ч/млн; 202,72 (С20 20), 171,17 {С-1), 150,18 (С-9).

Пример 11. 10,11,12,13-Тетрагидрореломицин-оксим (I I).

Из 3,68 г (4 моля) 10,11,12,13-тетрагидро-реломицина (llh), 20 мл пиридина и 1,38 г

25 (19,86 ммоля) гидрохлорида гидроксиламина в соответствии с методикой примера 2 получали 2,86 г (76,4,,) сырого продукта.

Сырой продукт (1,5 r) очищали на колонке с силикагелем (СНС!з:С2Н50Н:КН4 ОАо, 30 15 j, 85:15:1) (система 0), с образованием

1,06 г чистого продукта со следующими характеристиками:

ИК(КВг) 1700, 1640 см, Н-ЯМР (ДМСО-б6) д ч/млн: 9,95 (=Ив

35 ОН), исчезает после перемешивания с ОгО.

С-ЯМР (СОС!з) д ч/млн.: 172,30 (С-1), 165,06 (С-9, C=N).

M 936.

Формула изобретения

40 Способ получения производных тилозина общей формулы I

С!Н Но g!. I4 сн2

П 3 tl oR! сн

ЩО аСН g, н i — н с !! Нф-Н ь сн) н>сс аан сн Ho N(GH)iz

Н -н с О OR1 с 4

Щ

ЪИ сн, 50 где Я1 — . !!! группа (микарозил) или

64 . водород, К вЂ” СНО-группа,отл и ч а ю щи и с я тем, что соединение формулы II

1731063

Таблица1

Антибактериальная активность in vitro тилозина (11а) и соединений Формулы 1

Йтамм

Staphylococcus aureus

АТСС 6538-P

6, 25 О, 78 3, 125

6,25 0,4 0,4 о,4 о,78

6,25 о,7Е

50 100

50 100

6,25 12>5

1 6 о,4

1,56

Bacillus subtilis 3074

Pasteure1la multocida L-315

Pasteurella mult.6147

0,78 3,125 1,56 1,56 3,125

1>56 50 1 56 1>56 50

Pasteurella haemolytica

Ь"314

6,25 50

0,78

0,78 0,4

0,78 0,4

Streptococcus pyogenes

В-hameolyticus

1,56

0,7Е

1 ».6

0,78

0,4

3,125 3,125 50

3,125 6,25

3,125 6,25 25

type В

Езс&erichia coli 6086

Escherichia coli 10596

50

Таблица2

HIC, мкг/мл

IIa IIe Ia Ic If Ie Ig 2Ь Ii 1ь я испытуемых штамЫтамм мов

2-.4 64

1 "2

0,5

О, 5-1 1-2

Strep.pneumonial

Strep. faecalis

Strep.agalact.

О, 5-1

3 0,5

17 1-4

0,5-1

4-16 32 16

64

1 0,5

4-8 2-8

2 0,5

13 1-2

6 1

4 0,5

0,5

0,5

&-16 16-32 R

4-16 1-4

Staph.aureus

Staph.saproph.

16 R

4-16 &

1-2

1-2

1-16 0,5-2 1

05 1 05

0,5

Sar cine l u t is

l 0>5

0,5

0,5

П р и м е ч а н и е. 11а — тилозин; 11е — реломицин; Ia — альдоксим-тилозина; Ic - оксим тилозина; If — диоксим тилоэина; Ie — оксим 4 -демикароэил-тилоэина;

Ig - оксим реломицина; IL - альдоксим 10, 11, 12, 13-тетрагидро-тилоэина1

Ii - диоксим 10,11,12,13-тетрагидро-тилоэина; ТС вЂ” оксим 10,11,12>13 тетрагидро-тилозина; Е - устойчив> а полученные аначенил Ийх относятсл к 90ь испытанных штаммов

Составитель И.Дьяченко

Редактор Н.Швыдкая Техред М.Моргентал Корректор Т.Палий

Заказ 1520 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4(5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 где R имеет указанное значение;

R 12 — СН(ОСНОВ-группа, подвергают реакции оксиминирования действием 1-10 М гидроксиламингидрохлорида в присутствии избытка пиридина или карбоната натрия и, при необходимости, в среде растворителя, такого как спирт. в токе азота в течение от

15 мин до 10 ч при температуре от комнатной до температуры кипения реакционной смеси, и полученное соединение общей формулы l, где R2 — СН(ОСНОВ"группа, деацетализируют в среде водного раствора

5 ацетонитрила в присутствии каталитического количества трифторуксусной кислоты или хлористоводородной кислоты при комнатной температуре,