Способ изготовления вакцины для профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных

Способ изготовления вакцины для профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к профилактике дерматофитозов животных. Цель изобретения - повышение иммуногенности вакцины и создание иммунитета одновременно к трихофтии и микроспории. Это достигается тем, что в качестве вакцины используют инактивированные микроконидии вирулентных грибов Т. mentagrophytes, M. canis, M. gypseum при следующем соотношении: Т. mentagrophytes с содержанием микроконидий 1 млрд 200 мм - 2 млрд в 1 мл, M. canis и M. gypseum с содержанием каждой культуры по 600 мм - 1 млрд микроконидий в 1 мл, взятых в соотношении 1:1:1 - 25-26%, 0,5-0,6%-ный раствор формалина - 25- 26%, 0,8-0,9%-ный раствор нуклеината натрия - 48-50%. Вакцину вводят внутримышечно двухкратно с интервалом 10-14 дней в зоне 0,9-1,2 мл. 3 табл. (Л С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ ц 5

М

V (л

0 (21) 4643209/13 (22) 26.01.89 (46) 23.05.92. Бюл. № 19 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им, Я.P. Коваленко (72) С,В. Петрович, И.Д. Поляков, А,Ю. Ханис, Г.В, Афанасьев, X. Мукаева, Д.А, Банникова, А.B. Горбатов и А.Д, Лялин (53) 615.372/373:616:594(088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1632031, кл. А 61 К 39/00, 1986. (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ

ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ДЕРМАТОФИТО30В ДОМАШНИХ И ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к профилактике деИзобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к профилактике дерматофитозов животных.

Цель изобретения — повышение иммуногенности вакцины и создание иммунитета одновременно к трихофитии и микроспории, Поставленная цель достигается тем, что в качестве вакцинных штаммов используют вирулентные культуры грибов Microsporum

canis, Microsporum gypseum, Trichophyton

mentagrophytes, после их гомогенизации концентрацию микроконидий взвеси Т.

mentagrophytes доводят до 1 млрд 200 млн — 2 млрд в 1 мл, M, canis 600 млн — 1 млрд в

1 мл, М. gypseum — 600 млн — 1 млрд в 1 мл, после чего их смешивают в равных объемах (1:1;1), инактивируют добавлением 0,5—

0,6%-ного раствора формалина из расчета

1:1 по объему в течение 3 — 4 сут в термостате

„„. Ж „„1734762 А1 рматофитозо в жи вот н ых. Цел ь изобретения — повышение иммуногенности вакцины и создание иммунитета одновременно к трихофтии и микроспории, Это достигается тем, что в качестве вакцины используют инактивированные микроконидии вирулентных грибов Т, mentagrophytes, М. canis, М.

gypseum при следующем соотношении; Т, mentagrophytes с содержанием микроконидий 1 млрд 200 мм — 2 млрд в 1 мл, М. canis и М. gypseum с содержанием каждой культуры по 600 мм — 1 млрд микроконидий в 1 мл, взятых в соотношении 1:1:1 — 25 — 26%, 0,5 — 0,6%-ный раствор формалина — 25—

26%, 0,8 — 0,9%-ный раствор нуклеината натрия — 48 — 50%, Вакцину вводят внутримышечно двухкратно с интервалом

10-14 дней в зоне 0,9 — 1,2 мл. 3 табл. при Т+ 37- 38 С, затем добавляют иммуномодулятор — 0,8 — 0,9%-ный раствор нуклеината натрия в количестве 1:1 по объему, после чего взвесь расфасовывают и лиофилизируют.

Для изготовления вакцины используют вирулентные штаммы грибов Т.

mentagrophytes, M. canis и М. gypseum, которые обладают следующими свойствами.

Штамм гриба Т, mentagrophytes.

Морфологические свойства. Штамм культивируется на сусло-агаре. При высеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24-28 С образует белую, бархатистую, с резко очерченными краями колонию, которая к 20 — 25 дню занимает всю поверхность среды, С обратной стороны колонии возможно образование коричневого пигмента. При высеве споровой взвеси культуры в матрасы с питательной

1734762

55 средой к 10 — 15 дню развивается сплошная ровная бархатисто-пушистая, слегка порошистая пленка белого цвета.

Вирулентные свойства, При нанесении на скарифицированную кожу кролика элементов гриба на 10 — 15 день образуются корочки, плотно сросшиеся с кожным покровом, на 20 — 25 день часто образуются толстые астбестовидные корки, некротические поражения кожной ткани, изъязвления. Самовыздоровление наступает на

45 — 50 день.

Реактогенные свойства. Подкожное и внутримышечное введение инактивированного корпускулярного антигена из культуры

Т, mentagrophytes не приводит к изменению клинического состояния животных, Антигенные свойства, Титры антител в

РНГА на 20 — 25 день после иммунизации составляют 1:320, 1:640.

Иммуногенная активность. Иммунизация морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культур гриба Т. mentagrophytes создает у них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 12 мес.

Была испытана иммуногенная активность трех штаммов гриба Т.

mentagrophytes, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл. 1.

Таким образом, иммунологическая активность инактивированных антигенов из вышеуказанных штаммов не отличается, поэтому для изготовления вакцины можно использовать штаммы, обладающие вышеуказанными свойствами.

Штамм гриба М. canis.

Морфологические свойства, 18-дневная культура представлена множеством палочковидных микроконидий с утолщением на одном из концов размером 3,0 — 6,0х0,7 — 2,1 мкм ровными, прямыми, извилистыми и обильноветвящимися гифами толщиной

0,7 — 2,6 мкм. Часто встречаются 3-8 камерные макроконидии.

Культуральные свойства, Штамм культивируется на сусло-агаре. При посеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24 — 28 С образует белую бархатисто-пушистую колонию, которая к 20 — 25 дню занимает всю поверхность среды, Возможно образование желтого пигмента с обратной стороны колонии.

Вирулентные свойства. При помещении на скарифицированную кожу кроликов элементов гриба на 7 — 10 день наблюдается гиперемия и легкое шелушение на месте заражения. На 15 — 17 день образуются крошащиеся астбестовидные корки, плотно

50 сросшиеся с кожной поверхностью, На 20—

25 день наблюдения образуются корки,.некротические поражения кожной ткани, изаязвления, Самовыздоровление наступает на 35 — 60 день.

Реактогенные свойства, При подкожном и внутримышечном введении инактивированного корпускулярного антигена из культуры М. сапа клиническое состояние животных не изменяется, Антигенные свойства, Титры антител в

РНГА на 20 — 25 день после иммунизации с оста вля ют 1:160 — 1: 640.

Иммуногенная активность, Иммунизация морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культуры гриба M, canis создаету них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 10 мес.

Была испытана иммуногенная активность инактивированных антигенов из трех штаммов гриба M. canis, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл, 2, Таким образом, иммуногенная активность инактивированных антигенов из вышеуказанных штаммов не отличается, поэтому для изготовления вакцины можно использовать штаммы, обладающие вышеуказанными свойствами, Штамм M, gypseum.

Морфологические признаки. Зрелая 18дневная культура представлена множеством палочковидных, овальных и круглых микроконидий размером 2,9 — 7,0х0,8 — 2,9 мкм, прямыми, извилистыми и обильноветвящимися гифами толщиной 0,7 — 2,6 мкм.

Встречаются 3 — 7-камерные сигаровидные макроконидии, Культуральные свойства, Штамм культивируется на сусло-агаре, При посеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24 — 28 С образует белесоватую и белую бархатисто-пушистую колонию, которая к 15 — 20 дню занимает всю поверхность среды. Возможно образование коричневого пигмента с обратной стороны колонии. При весеве споровой взвеси культуры в матрасы с питательной средой к 10—

12 дню развивается сплошная розовая бархатисто-пушистая пленка, Вирулентные свойства. При нанесении на скарифицированную кожу кролика элементов гриба на 7-10 день наблюдается гиперемия и образование корок, На 20 — 22 день наблюдается образование астбестовидных корок, при отделении которых образуются эрозии кожи, Самовыздоровление наступает на 35 — 55 сут.

1734762

Реактогенные свойства. Подкожное и внутримышечное введение инактивированного корпускулярного антигена из культуры гриба М. gypseum не приводит к изменению клинического состояния животных, Антигенные свойства, Титры антител в

РНГА на 20 — 25 день после иммунизации составляет 1:160 — 1:640.

Иммуногенная активность. Иммунизация морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культуры гриба М,gypseum создает у них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 12 мес.

Была испытана иммуногенная активность инактивированных антигенов из трех штаммов гриба М, gypseum, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл. 3, Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Культуру штаммов Т, mentagropytes, М. canis и М. gypseum выращивают в течение 15 — 20 дней на сусло-агаре при 26 — 28 С. Затем грибную массу каждой культуры снимают с поверхности питательной среды, помещают в отдельный гомогенизатор, добавляют 200 — 250 мл стерильной дистиллированной воды на грибную массу с 8-10 матрасов .и гомогенизируют, Затем гомогенаты культур

Т. me ntag rophytes, содержащей 1 мл рд 200 млн микроконидий в 1 мл, M. canis M.

gypseum, содержащих по 600 млн микроконидий в 1 мл смешивают по 83,3 мл, После смешивания гомогенатов добавляют 250 мл

0,5 -ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термостат п ри 37 C на 3 сут, Затем к гомогенату добавляют 500 мл 0,8 О/ - ного раствора нуклеината натрия, расфасовывают по 2,1 мл. замораживают в течение 50 ч при -40"С и высушивают в сублимационной установке в течение 30 ч, При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МПБ, агар Сабуро, среду КиттТароцци она не содержит живых клеток грибов и микробной контаминации, остаточная влажность была 2,0, концентрация в 1 мл — 200 млн микроконидий, при введении кроликам, морским свинкам, кошкам и собакам не вызывала местных и общих побочных реакций и обеспечивала создание иммунитета длительностью не менее 12 мес.

Пример 2. Для изготовления 1 л вакцины берут антигены Т, mentagrophytes, М. canis и М. gypseum из живой культуры, приготовленные гомогенизацией грибницы в миксере с добавлением дистиллированной воды, Затем гомогенаты культуры Т.

10

20 иммунитета длительностью не менее 12

55

mentagrophytes, содержащей 1 млрд 600 млн микроконидий в 1 мл, смешивают по 83 мл, После перемешивания гомогенатов культур добавляют 251 мл 0,5 -ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термастат при 37 С на 4 сут. Затем к гомогенату добавляют 500 мл 0,8%-ного раствора нуклеината натрия, расфасовывают по 2,0 мл, замораживают в течение 10 ч при -45 С и высушивают в сублимационной установке в течение 32 ч. При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МПБ, агар Сабуро и среду Китт-Тароцци она не содержит живых клеток гриба и микробной контаминации, остаточная влажность

2,2, концентрация в 1 мл 220 млн микроконидий и при введении в организм животных не вызывает местных и общих побочных реакций и обеспечивает создание мес, Пример 3. Для изготовления 1 л вакцины берут антиген М, canis, Т.

mentagrophytes, М. gypseum из живой культуры, приготовленной гомогейизацией грибницы в миксере с добавлением дистиллированной воды, Затем гомогенаты культуры T. mentagrophytes, содержащей 1 млрд

600 мл микроконидий в 1 мл, культуры М.

canis и.М. gypseum, содержащие по 1 млрд микроконидий в 1 мл, смешиваются по 83 мл,. После перемешивания гомогенатов культур добавляют 250 мл 0,5 -ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термостат при 37 С сроком на 4 сут.

Затем к гомогенату добавляют 500 мл 0,80 ного раствора нуклеината натрия, расфасовывают по 1,9 мл, замораживают в течение

15 ч при -50 С и высушивают в сублимационной установке в течение 36 ч. При контроле вакцины установлено, что при высеве на

МПА, МП Б, агар Сабуро и среду Китт-Тароцци она не содержит живых клеток грибов и микробной контаминации, при введении кроликам не вызывает местных и общих побочных реакций, остаточная влажность составляет 2,5, концентрация в 1 мл 240 млн микроконидий и при введении в организм животных обеспечивает создание иммунитета длительностью не менее 12 мес.

Для профилактической цели используют вакцину против дерматофитозов. ресуспензированную в 1,9 — 2,1 мл физиологического раствора, которую вводят в область бедренной группы мышц двукратно с интервалом

10 — 14 дней в дозах — лабораторным животным, собакам и кошкам независимо от возраста 0.9 — 1.2 мл (200 — 250 млн ми кроконидий).

1734762

Пример 4. Пять морских свинок, четыре кролика, пять собак, три кошки иммунизированы против дерматофитозов внутримышечно в область ягодичной группы мышц, двукратно s дозе 1 мл с содержанием 250 млн микроконидий.

При исследовании сыворотки крови в

РНГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител не выявлены, При накожном заражении культурами Т.

mentagrophytes, М. canis u M. gypseum через 30 дней после второй иммунизации иммунизированные животные заболели.

Две морские свинки, два кролика, две собаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и одномоментно зараженные вирулентными культурами Т, mentagrophytes, M. canis и М. gypseum в различные участки кожи так же, как и иммунизированные, заболели дерматофитозами.

Пример 5. Четыре морские свинки, три кролика, три собаки и три кошки иммунизированы внутримышечно в область бедренной группы мышц двукратно в дозе 0,9 мл с содержанием микроконидий 75 млн.

При исследовании сыворотки крови в РНГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител не превышали 1:80. При заражении.культурами М. gypseum, M. canis и Т. mentagrophytes через 30 дней после второй иммунизации накожно не заболели дерматофитозом 2 иммунизированные морские свинки, две собаки, одна кошка, Две морские свинки, два кролика, две собаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и зараженные вирулентными культурами Т.

mentagrophytes, М. canis и М. gypseum в те же сроки и в тех же дозах, что и иммунизированные животные, заболели дерматофитозом с характерными клиническими признаками, Длительность переболевания составила 35 — 65 дней (срок наблюдения), Пример 6. Восемь морских свинок, пять кроликов, четыре собаки и три кошки были проиммунизированы вакциной против дерматофитозов внутримышечно двукратно в область бедренной группы мышц в дозе

1,1 мл с содержанием 200 млн микроконидий. При исследовании сыворотки крови в

РНГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител составили 1;160 — 1;320, При накожном заражении культурами М, gypseum, Т, mentagrophytes, М. canis через

30 дней после второй вакцинации лабораторные животные, собаки и кошки не заболели.

Три морские свинки, два кролика, три собаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и зараженные вирулентными культурами грибов Т,.

mentagrophytes, М. canis и М. gypseum в те же сроки в тех же дозах, что и иммунизиро5 ванные животные, заболели дерматофитозами с характерными клиническими признаками, Длительность переболевания составила 37 — 45 дней (срок наблюдения), Пример 7. Пять морских свинок, 10 четыре кролика, пять собак и три кошки были иммунизированы вакциной против дерматофитозов внутримышечно, двукратно в область бедренной группы мышц в дозе 1,1 мл с содержанием микроконидий 250 млн, 15 При исследовании сыворотки крови в РНГА через 20 дней после второй вакцинации титры антител составили 1:320 — 1:640, При накожном заражении культурами Т.

mentagrophytes, М. canis и М, gypseum через

20 30 дней после второй иммунизации лабораторные животные, собаки и кошки не заболели.

Две морские свинки, два кролика, две собаки и две кошки, не иммунизированные

25 против дерматофитозов и однократно зараженные вирулентными культурами М. canis, М, gypseumu T. mentagrophytes в различные участки кожи так же, как и иммунизированные животные, заболели дерматофитозом с

30 характерными клиническими признаками заболевания, Длительность переболевания составила 35-49 дней (срок наблюдения), Таким образом, изготовленная предлагаемым способом вакцина позволяет со35 здать напряженный иммунитет у собак, кошек, кроликов и морских свинок без каких-либо побочных эффектов.

Формула изобретения

40 Способ изготовления вакцины для профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных, преимущественно собак, кошек, кроликов, морских свинок, включающий подбор штаммов, выращива45 ние культуры грибов, приготовление гомогената, лиофилизацию препарата, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения иммуногенности вакцины и создания иммунитета одновременно к трихофитии и мик50 роскории, в качестве штаммов используют вирулентные культуры грибов вида

Microsporum canis, Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes, выращивание культур осуществляют раздельно, гомогена55 ты смешивают в равных объемах, полученную смесь дополнительно инактивируют

0,5 — 0,6 -ным раствором формалина в течение 3 — 4 дней при 37 — 38 С и добавляют 0,8—

0,9 -ный раствор нуклеината натрия в количестве 1:1.

1734762

Таблица1

Таблица2

ТаблицаЗ