Штамм бактерий мyсовастеriuм fортuiтuм, используемый для изготовления преципитирующей сыворотки

Штамм бактерий мyсовастеriuм fортuiтuм, используемый для изготовления преципитирующей сыворотки

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: микробиология, серологическая диагностика туберкулеза - получение сыворотки для идентификации микобактерий. Сущность изобретения: штамм Mycobacterium fortultum ГИСК № 34 выращивают на среде Линниковой - Могилевского при 37°С в течение 3-4 недель. Бакмассу отделяют, промывают дистиллированной водой. Инактивируют фенолом, замораживают и разрушают на бактериальном прессе при давлении 25 атм и температуре (-40) - (45)°С. Разрушенную бактериальную массу промывают дистиллированной водой, фильтруют и оставшуюся массу используют в качестве антигена для иммунизации продуцентов. Выделяют сыворотку общепринятым способом. Обработка клеток микобактерий (разрушение на бактериальном прессе, удаление водорастворимых компонентов протоплазмы) позволяет получить отмытые клеточные стенки и, тем самым, повысить содержание видовых антигенов в препарате для иммунизации лабораторных животных. Сравнительно короткий цикл иммунизации большим количеством антигенного материала обусловливает первичный ответ животного именно на видовые антигены и обеспечивает получение сыворотки, содержащей антитела к М. fortultum. Незначительное количество родовых антител к родовым антигенам микобактерий в реакции диффузионной преципитации в агаре не обнаруживается из-за ограниченной чувствительности этой реакции. Особенности штамма, методы получения антигенного материала для иммунизации животных, приемов , самой иммунизации и применение РДП в агаре исключают необходимость адсорбции сывороток. Ё VI СО 00 00 ел о

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4816468/13 (22) 17.04.90 (46) 07.06,92. Бюл. М 21 (71) Научно-исследовательский ветеринарный институт (72) А. Л. Лазовская, M. Л. Тихомирова, О, Ф. Рачкова, А. А. Бондаренко и Д. Т. Леви (53) 615.371/373(088.8) (56) Kublca G. Р. Ваезв R. Е., Gordon

Р. А. Lenklns J. В. S., Kwaplnskl С., . Mcdurmont S.Ð, Journal of General

Microbiology. — 1972, 73, р. 55 — 70. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ MYCOBACTERIUM

FORTUITUM. ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПРЕЦИПИТИРУОЩЕЙ СЫВОРОТКИ (57) Использование: микробиология, серологическая диагностика туберкулеза — получение сыворотки для идентификации микобактерий. Сущность изобретения: штамм Mycobacterium fortultum ГИСК 1Ф 34 выращивают на среде Линниковой — Могилевского при 37 С в течение 3 — 4 недель.

Бакмассу отделяют, промывают дистиллированной водой. Инактивируют фенолом, замораживают и разрушают на бактериальном прессе при давлении 25 атм и температуре (-40) — (45) С. Разрушенную

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии, представляет собой новый штамм Mycobacterium

fortultum, отличающийся антигенными свойствами, и может быть использовано для изготовления преципитирующей сыворотки.

Известны штаммы микобактерий

Mycobacterium fortultum, обладающие культурально-морфологическими и биохимиче„, Ж,, 1738850 А1 (и)э С 12 N 1/20, А 61 К 39/04 бактериальную массу промывают дистиллированной водой, фильтруют и оставшуюся массу используют в качестве антигена для иммунизации продуцентов. Выделяют сыворотку общепринятым способом. Обработка клеток микобактерий (разрушение на бактериальном прессе, удаление водорастворимых компонентов протоплазмы) позволяет получить отмытые клеточные стенки и, тем самым, повысить содержание видовых антигенов в препарате для иммунизации лабораторных животных. Сравнительно короткий цикл иммунизации большим количеством антигенного материала обусловливает первичный ответ животного именно на видовые антигены и обеспечивает получение сыворотки, содержащей антитела к M. fortultum, Незначительное количество родовых антител к родовым антигенам микобактерий в реакции диффузионной преципитации в агаре не обнаруживается иэ-за ограниченной чувствительности этой реакции. Особенности штамма, методы получения антигенного материала для .иммунизации животных, при емов.самой иммунизации и применение

РДП в агаре исключают необходимость адсорбции сывороток. скими свойствами, характерными для микобактерии данного вида, выделенные в Сйгд )юв и Франции и хранящиеся в коллекциях этих а стран.

Однако ни один из известных штаммов не используется для изготовления преципитирующей сыворо;ки.

Цель изобре гения — штамм

Mycobacterlum fortuitum ЬЬ 293, используе1738850 мый для изготовления преципитирующей Антигенные свойства. При введении сы воротки. кроликам вызывает образование преципиШтамм Mycobacterlum fortuitum выде- тирующихантителвтитре1;16-1:64(в РИД). лен из лимфоузла коровы, положительно ре- Пример 1. Получение антигенного агирующей на туберкулин, в 1988 г. Штамм 5 материала.

Mycobacterlum fortultum М 293 депониро- Штамм Mycobacterlum fortultum N. 293 ван в коллекции Государственного научно- засевали на жидкую синтетическую. среду исследовательского института Линниковой-Могилевско о и выращивали стандартизации и контроля медицинских и при 37 С в течение 3-4 нед. Бактерийную биологических препаратов имени Л, А. Та- 10 массу отделяли на стерильном бумажном расевича под N. 34. фильтре, промывали дистиллированной воМорфология. Клетки имеют вид палочек дой, заливали на 18-24 ч 2 -ным фенолом, длиной 1,0 мкм. Окрашиваются по.Граму, по повторно. отмывали дистиллированной воцилю-Нильсену окрашиваются в красный 15 дой, помещали в коллодиевые пистоны на цвет. 480 — 520 мг с последующим замораживаниКультуральные характеристики. На. ем при — 40-45 С и разрушением на бактеплотной яичной среде Левенштейна-Йенсена риальном прессе при давлении 25 атм и при 37 C вырастает за 3 — 5 дней, на карто- температуре -40-45 С. Разрушенную бакфельно-глицериновой среде Павловского 20 терийную массу заливали десятикратным вырастает за 5-8 дней. Размножается при объемом стерильной дистиллированной во22 — 42 С, не растет при 45ОС Оптимум роста ды и выдерживали в холодильнике при тем36 — 37 С. пературе 3 — 5 С в течение 40-48 ч.

На жидких питательных средах растет Суспенэию фильтровали через стерильный на поверхности в виде сухой. плотной плен- 25 бумажный фильтр. Оставшуюся массу иски кремового цвета, среда остается про- пользовали в качестве антигенного материэрачной, Через 4-8 нед, роста среда аладля иммунизации животных. окрашивается в светло-коричневый цвет Пример 2. Получение преципитирупри сохранении прозрачности. ющей сы.ворот ки.

Физиологические свойства.. Растет на 30 Кроликов весом 2,0 — 3,0 кг иммунизироплотной питательной среде Левенштейна- вали антигенным материалом штамма

Йенсена с добавлением 5 g, хлористого íà- Mycobacterium fortultum М 293, получентрия или салицилата натрия. Расщепляет с ным, как в примере 1, Антигенный материал образованием кислоты инозит, не фермен- вводили в количестве 50-100 мг в 0,8-1,0 мл тирует рамнозу, абариноэу, сорбит, маннит, 35 неполного адъюванта Фрейнда внутрикождульцит. Утилиэирует цитрат и малонат на- но в три разных места еженедельно в течетрия. Имеет активные ферменты: уреазу, Р ние 3 — 5 нед. Полученная сыворотка

-галактозидазу, нитратредуттаэу. бесцветная, слегка опалесцирует. В РИД в

Изучение нуклеотидного.состава ДНК агаре образовывала линии .преципитации проводили методом тепловой денатурации 40 при разведениях 1:16-1:64 с экстрактами в SSC с применением формальдегида. штаммов МусоЬастег!ив Топи11от, полученГЦмол, Я, у штамма Mycobacterium fortuitum ных из ГИСК им. Л. А. Тарасевича(2 штамма)

N. 293 составил 65,1. и свежевыделенных от крупного рогатого

Учитывая, что нуклеотидный состав скота (2 штамма), а также с экстрактами

ДНК примерно одинаков не только у видов 45 штамма Mycobacterlum fortultum %293 и we рода Mycobacterium, но иу близкородствен- образовывала линий преципитации с эксных родов (Nocardia, Rhodococcus и др. ро- трактами штаммов других видов микобактедов актиномицетной линии) и составляет рий (М. tuberculosis, М, bovls, М. avium, M.

G2-73 g ГЦ, проведено изучение жирных smegmatls, M. phlei, M. капэаэН). кислот методом сопиролитической газовой 50 Экстракты микобактерий для реакции хроматографии, Определенный таким обра- диффузионной преципитации в агаре готоэом состав соответствует видовому составу вили растиранием 20-30 мг бактерийной

Mycobacterlum fortultum. массы со стерильным стеклянным песком в

После заражения морских свинок бак- 0,2-0,3 мл дистиллированной воды, подщетерийной массой в количестве 1,0-1,5 мг 55 лоченной 0,1 í. NaOH до рН 9; 5-10,0. внутримышечно животные в течение 3 мес Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я остаютсяздоровыми.на вскрытии патолого- Штамм бактерий Mycobacterlum анатомическая картина микобактериоза от- fortuitum ГИСК М 34, используемый для изсутствует. готовления преципитирующей сыворотки.