Способ отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений

Способ отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: биология и биотехнология , в частности клеточная инженерия. Сущность изобретения: клетки или протопласты растений суспендируют в 0.4-0,6 М растворе сорбита, содержащем 6 мм хлорида кальция , суспензию выдерживают до полной неионогенности и помещают в проточную камеру в электрическое поле напряженностью 2000-20000 В/м т частотой 1-2 мГц, при этом жизнеспособные клетки или протопласты отбирают из камеры, а мертвые удаляют с током суспензии.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (н)з С 12 N 13/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ удаляют с током суспензии.

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4807322/13 (22) 27.03.90 (46) 07.06.92. Бюл, М 21 (71) Институт молекулярной биологии и биохимии им. М. А. Айтхожина . (72) М. К. Карабаев и В, А. Забелин (53) 57.086.83(088.8) (56) Galbralth О. W. and Gaibraith J.Å.Ñ. Z.

Pflanzenphyslol, 1979, 93, 149. .Биотехнология растений: культура клеток. ВО Агропромиздат, 1989, (54) СПОСОБ ОТБОЮ жиЗНЕСПОСОБHblX КЛЕТОК ИЛИ ПРОТОПЛАСТОВ РАСТЕНИЙ

Изобретение относится к биологии, а именно к клеточной инженерии, и может быть использовано в других областях, связанных с исследованиями на клеточном и тканевом уровнях.

Известен способ определения жизнеспособности клеток или протопластов, включающий обработку культуры каким-ли. бо флуоресцирующим красителем (например, флуоресцеиндиацетатом ФДА) и индивидуальный механический отбор живых клеток или протопластов растений под микроскопом.

Однако известный способ трудоемок (требует поштучного отбора каждой визуально различимой клетки) и малопродуктивен (позволяет отобрать всего около 50 действительно жизнеспособных клеток или протопластов).

Целью изобретения является повышение эффективности отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений..

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу отбора жизнеспособных клеток или протопластов растений культуру Ы,, 1738855 А1 (57) Использование: биология и биотехнология, в частности клеточная инженерия. Сущность изобретения: клетки или протопласты растений суспендируют в 0,4-0,6 M растворе сорбита, содержащем 6 мм хлорида кальция, суспенэию выдерживают до полной неионогенности и помещают в проточную камеру в электрическое поле напряженностью 2000-20000 В/м т частотой 1-2 мГц, при этом жизнеспособные клетки или протопласты отбирают из камеры, а мертвые суспендируют в 0,4-0,6 М растворе сорбита, содержащем 6 Мм хлорида кальция, полученную суспензию выдерживают до полной неионогенноети; и затем жизнеспособные клетки или протопласты отделяют от мертвых в.проточной камере в электрическом поле напряженностью 200020000 В/м и частотой 1-2 мГц, при этом жизнеспособные клетки или протопласты (или целевой продукт) отбирают из камеры, а мертвые удаляют с током суспензии. Эффективность отбора составляет порядка

90%.

П р и.м е р 1. Клетки или протопласты пшеницы суспендируют в 0,5 M растворе сорбита, содержащем 6 мМ CaClz, с плотностью (1,2 — 1,6)х10 /мл, добиваясь неионогенности суспензионной среды; При концентрациях сорбита менее 0,4 M и более

0,6 М происходит разрушение протопластов. Затем берут 0.2-2,0 мл суспенэионной культуры и помещают в проточную камеру, между электродами которой, подключая высокочастотный генератор. создают электрическое поле напряженностью 2000-20000

1738855

Формула изобретения

Способ отбора жизнеспособных клето.. или протопластов растений, о т л и ч а о шийся тем, что, с целью повышения е;г эффективности, клетки или протопласты растений суспендируют в 0,4-0,6 М растворе сорбита, содержащем 6 мМ хлорида кальция, полученную суспензию выдерживают до полной неионогенности и затем жизнеспособные клетки или протоплэсты отделяют от мертвых в проточной камере в электрическом поле нагряженность с 200020000 В/и и частотой 1 —.2 мГц, при этом жизнеспособные клегки или протопласты отбирают из камеры, а мертвые удаляют с током суспензии.

Составитель В. Демкин

Редактор В..Петраш., Техред М.Моргентал Корректор О. Кравцова

Заказ 1978 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

В/м, частотой 1 мГц. В поле генератора живые протопласты, поляризуясь, ориентированно прилипают к электродам,.мертвые остаются в суспензии во взвешенном состоянии. Через 1 — 2 мин, не снимая напряжения 5 . с электродов, включают ток суспензии, который выносит мертвые клетки или протопласты из камеры. Затем отключают генератор и извлекают суспензию с живым материалом из камеры. 10

Пример 2. Клетки или протопласты табака суспендируют в 0,5 M растворе сорбита, содержащем 6 мМ СаС!г, с плотностью (1,2-1,6)х10 /мл, добиваясь неионогенно- 15 сти суспензионной среды. При концентрации сорбита менее 0,4 М и более 0,6 M происходит разрушение протопластов. Затем берут 0,2-2,0 мл суспензион ной культуры и помещают в проточную камеру, между 20 электродами которой, подключая высокочастотный генератор, создают электрическое поле напряженностью 2000 — 20000 В/м, частотой 1 мГц. В поле генератора живые протопласты, поляриэуясь, ориентированно 25 прилипают к электродам, мертвые остаются в суспензии во взвешенном состоянии, Через 1 — 2 мин, не снимая напряжения с электродов, включают ток суспензии, который вы:".осит мертвые клетки или протопласты 30 из камеры. Затем отключают генератор и извлекают суспензию с живым материалом из камеры.

Пример 3. Клетки или протопласты кукурузы суспендируют в 0,5 M растворе 35 сорбита, содержа цем 6 мМ CBCI2, с плотностью (1,2-1,6)х10"/мл, добиваясь неионогенности суспензионной среды., затем берут

0,2-2,0 мл суспензионной культуры и поме40 щают в проточную камеру, между электродами которой, подключая высокочастотный генератор, создают электрическое поле напряженностью 2000-20000 В/м, частотой 1 м Гц. В поле генератора живые протопласты, поляризуясь, ориентированно прилипают к электродам, мертвые остаются в суспензии во взвешенном состоянии. Через 1-2 мин, не снимая напряжения с электродов, включают ток суспензии, который выносит мертвые клетки или протопласты из камеры.

Затем отключают генератор и извлекают суспензию с живым материалом из камеры.

Использование предлагаемого способа отбора жизнеспособных клеток или протопластов обеспечивает по сравнению с известными ускорение процесса отбора живых клеток или протопластов и оценку их жизнеспособности, а также значительное повышение эффективности -сгбофа и точности оценки живых клеток илй протопластов.