Способ получения пептидов или их фармацевтически приемлемых солей

Патент 1739852

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к дипептидам, в частности к получению пептидов ф-лы R,CO-NH-CH(Ra)-CONH-CH(Rp- -X, где R{ - группа ф-лы

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАМИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) (51)5 С 07 К 5/06//A 61 K 37/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТУ H= H-CH=C(CH2CH(NH-COg(:Hg P,h)-С=С-СК=СН-CH=CH;

1 (21) 3860201/04 (22) 01. 02. 85 (31) 59-19100 (32) 03.02.84 . (33) 1Р (46) 07.06.92. Бюл. Р 21 (71) Санкио Компани Лимитед (JP) (72) Рей Иатсуеда, !Оигиро Ябе, Иитцо

Ямазаки, Татсуо Кокубу и Кунио Хивада (ЛР) (53) 547.964.4.о7(о88.8) (56) Иредер Э., Любке К. Пептиды.

Ч. 1. М.: Мир, 1967, с. 116. 2 (C < . С4)-алкил, тиазолил (С -С 1)-алкил, имидазолилметил; .изобутил, циклогексилметил; Х - груп" па СН(А-Е))ОН; А вЂ” метиленовая группа; Е,1 - группа

-СОИНСН2СН2-Й" СН1-СН2-О-СН2- СН2, -С0-NH-CH2CH- CH2CH, -. сн, сн, I

-CQ-N H-CH-CH-CH2СН, (:Н>0Н

Изобретение относится к способу получения пептидов - новых биологически ..активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ИЛИ

ИХ фАРИАЦЕВ)ИЧЕСКИ ПРИЕИЛЕИЫХ СОЛЕЙ (57) Изобретение относится к дипептидам, в частности к получению пептидов ф-лы RICO-ИН-CH(R<)-CONH-CH(RJ-Х, где Й1 вЂ” группа ф-лы или их Фармацевтически приемлемых солей, которые обладают ренинингибирующей активностью. Цель разработка способа получения более активных соединений указанного клас- са. Получение ведут реакцией карбоновой кислоты ф-лы R -CO-NH-CH(Rg)1

-СООН, где R и R вЂ” указаны выше, (О или ее реакционноспособного производ- ф ного с аминосоединением ф"лы Н М- Я.")

-CH(R )-Х, где Х и В.з указаны выше.: д

1 табл. Ю

Цель изобретения - способ получения новых производных пептидов малотоксичных соединений, обладают 3 173 л По е» высокой ренинингибирующей г1 >-; ив нг.)CT ью, Пример 1. N-$4(S) вЂ” (cN вЂ” Бензилоксикарбонил) -3- ($-нафтил) -I.â€” àëàмил-1и-лейцил) амино-3(Я)-окси-6-метилпентаноип1-1,-изопейцинол (соеликение 1).

О !!

©-сн2ОС-НН

Н CONHOH

CONH

0Н а) N-Ьензилоксикарбонил-3-(1-нафтил)-1.-аланил-Ь-лейцин.

3,49 г (10 ммоль) N-бензилоксикарбонил-3-(1-нафтил)-аланина и 1,21 г (12 ммоль) N-метилморфолина растворяют в 30 мл безводного тетрагидрофурана, а затем. при одновременном охлаждении раствора до -5 С по каплям

О при перемешивании добавляют 1,30 г (12 ммоль) этилхлоркарбоната в течение 15 мин. Затем добавляют 2,35 r (12 ммоль) хлоргидрата L-лейцин этилового сложного эфира, который предварительно суспендируют в 10 мл метилен хлорида и подвергают нейтрализации при помощи 1,21 г {12 ммоль)

N-метилморфолина. Смесь перемешивают в течение 2 ч при охлаждении льдом, а затем выдерживают в течение ночи при комнатной температуре.. Затем подвергают конденсации при помощи выпаривания при пониженном давлении. В остаток добавляют воду, а осажденный маслянистый материал экстрагируют этилацетатом. Органический экстракт промывают 1 н. раствором хлористоводо. родной кислоты, водой, 54-ным водным раствором бикарбоната натрия и.насыщенным водным раствором хлорида натрия в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом натрия.

Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Полученный таким образом

N-бензилоксикарбонил-3-{1-нафтил)-Lаланил-L-лейцин этиловый сложный эфир в виде сиропа растворяют в 30 мл диметилформамида и в полученный раствор добавляют 5,06 г (100 ммоль) гидрата гидразина. Смесь, полученную в ре зультате этих процедур, перемешивают в течение 36 ч при комнатной тем о 52 4 пературе. Затем реакциь, ный продук1 подвергают конденсации при комнатной температуре. Затем реакционный продукт подвергают конденсации при помощи выпаривания при пониженном давлении, а в образовавшийся остаток добавляют воду. Полученные бесцветные кристаллы соЬирают при помощи фильтрации, тщательно промывают водой, а затем сушат в эксикаторе, в результате чего получают 4,23 r coe динения из заголовка приме1 а, который плавится при 200-204 С.

Элементный анализ.

Вычислено, 1: С 68,04; Н 6,77;

N 11,76

12ТН Ы1 40Ф

Найдено, ". С 68,32; Н 6,73;

20 N 11,ЭО

l5) 11(4(Б)-jS-Бензипоксикароонип3- (1-нафтил) -L-аланил-L-лейцил|амино-3(S)-oêñè-G-метилгептаноил1-t,â€” изолейцинол.

477 мг (1 ммоль) гидразида, полученного в соответствии с описанием, приведенным на стадии а, растворяют в 8 мл диметилформамида, затем раствор охлаждают до -60ОС. Далее, в раствор добавляют 0,84 мл 4,0 н. раствора хлористого водорода в диоксане и 0,18 мл изоамил нитрита. Затем реакционную температуру поднимао ют до -20 С при перемешивании в течение 10 мин. НаЬлюдают исчезновение гидразида, а затем температуру продукта понижают снова до -60 С, Для того, чтоЬы нейтрализовать раствор и получить раствор И-бензилокси-

46 карбонил-3- (1-нафтил) -L-аланил-Lлейцин гидразида в смесь добавляют

0,.45 г N-метилморфолина.

В то же самое время, трет-бутоксикарбонильную группу удаляют из

412 мг (1,1 ммоль) 4(S)-трет-бутоксикарбониламино-3(S)-окси-6-метилгептаноил-L-изолейцинола при помощи

6 н. раствора хлористого водорода в диоксане. Получают хлоргидрат 4(S)амино-3(S)-окси-6-метилгептаноил-Еизолейцинола. Далее этот продукт растворяют в 5 мл диметилформамида и полученный .в результате раствор добавляют в раствор гидразида, затем

55 смесь перемешивают при 4 С в течение 7 дней. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, В образовавшийся остаток доЬавляют воду и маслянистый материал, полученный в ре17398 зупьтате, экстрагируют этилацетатом.

Органический экстракт промывают 1 н. раствором хлористоводородной кислоты, водой, 5д -ным водным раствором би" карЬоната натрия и насыщенным водным, раствором хлорида натрия в указанномпорядке, затем сушат над безводным сульфатом натрия. Далее продукт подвергают конденсации при помощи выпаривания при пониженном давлении.

Остаток в виде сиропа подвергают очистке с использованием тонкослойной препаративной хроматографии на силикагеле, используя смесь в обьемном отношении 5 1 хлороформа и метанола

15 в качестве проявляющегося растворителя. Активные фракции экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, а затем сушат и подвергают конденсации, при помощи выпаривания при пониженном давлении. После добавления диэтилового простого эфира к остатку конденсат отверждают, а затем его тонко измельчают и собирают фильтрацией, в результате чего получают 402 мг соединения из заголовка примера в виде бесцветного порошка, который плавится при 206212 С, ю() -95,0 (С=0,3, метанол)

Элементный анализ.

Вычислено, 4: С 68,49; Н 8,13;

N 7,29

С4 11щл407 е

Найдено, о: С 68,46; .Н 7,94; 35 м 7,87, (oO-сн,ос-ын

S 40

Пример 2.

>- f4 (S)-fN-Бензилоксикарбонил-3(1-нафтил)-1.-аланил-3-(4- иазолил)DL-аланил1амино-3(S)-окси-6-метил5О гептеноил1-L-иеолейцинол (соединение

2). а) N-Бензилоксикарбонил-3- (1-нафтил) -L-аланил-3- (4-тиазолил) -DL-аланин гидразил.

55 2,90 г (U,30 ммоль) L-бензилоксикарбонил-3-(1-нафтил)- .-аланина и.

2,15 г (8,30 ммоль) хлордигидрата вора хлористого водорода -в диоксане.

Температуру реакционной смеси поднимают дс -20 С, а затем доЬавляют

0,13 мл (0,97 ммоль) изоамил нитрита, и затем смесь перемешивают в =.ечение

10 мин. НаЬлюдают исчезновение гидСОМН -СОИН

CON H

52 б (4-тиазолил) -DL-аланин метилового сложного эфира суспендируют в 30 мл безводного тетрагидрофурана. Одновременно при охлаждении льдом по каплям в атмосфере потока азота в суспензию добавляют 1,51 мл (9,95 ммоль) диэтил фосфорцианидата и 3,82 мл (27,4 ммоль) триэтиламина, и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционный продукт подвергают конденсации при помощи выпаривания при пониженном давлении. В полученный остаток добавляют этилацетат и смесь промывают водой, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Раствор упаривают при пониженном давлении, полученный остаток чистят на .хроматографической колонне из силикагеля, продукт элюируют смесью в объемной пропорции

10:1 хлороформа и метанола, в результате чего получают 2,62 г (выход

61:;) N-бензилоксикарбонил-3-(I-нафтил)-L-аланил-3-(4-тиазолил)-DL-аланин метилового сложного эфира.

2,10 г (4,06 ммоль) этого сложного эфира растворяют 20 мл диметилформамида, а затем добавляют 2,00 г (40,0 ммоль) гидрата гидразина, смесь перемешивают в течение ночи при ком«. натной температуре. Полученный. реакционный продукт подвергают конденсации при помощи выпаривания при пониженном давлении, а затем воду добавляют в полученный. остаток. Кристаллы, выпавшие в осадок, отделяют фильтрацией, промывают гексаном и диэтиловым простым эфиром, а затем сушат, в результате чего получают

1,90 г (выход 90,5е) соединения из заголовка примера. о) N-(й($)-(И-Бенэилоксикеобонил3-(1-нафтил)-L-аланил-3-(4-тиазолил)DL-aaa iiigawavo-3 (S) "окси-6-метилгептанолил L-изолейцинол.

400 мг (0,77 ммоль) Ы-бензилоксикарЬонил-3-(1-нафтил)-L-aaasvv-3-(4тиазолил)-DL-аланин гидразида суспендируют в 10 мл диметилформамида, и полученную в результате суспензию охлаждают до -60 С,причем при этой температуре добавляют 0,66 мл 4 н. раст30

©-сн1ос н

NHCON H N Q

ОН

® Пример 4.

w $ (H CONH50

17 разида, а затем смесь снова охлажда" ют до -60 С, после чего с целью нейтрализации добавляют 0,33 мл (3,00 ммоль) N-метилморфолина, далее в смесь доЬавляют 328 мг (1,02 ммоль) хлоргидрата 4(S)-амино-3(S)-окси-6метилгептаноил-L-изолеуцинола и

0,12,мл (1,09 ммоль) Б-метилморфолина. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, а образовавшийся остаток подвергают очистке с использова нием препаративной тонкослойной"хро" матографии на силикагеле, используя смесь хлороформа и метанола в объемном отношении 5: 1 в качестве проявляющего растворителя, в результате чего получают 310 мг (выход 523) моногидрата соединения из заголовка примера в виде Ьелых кристаллов, когорые плавятся при 167-169 С, fog

-31,3 {C=0,3 метанол).

Элементный анализ.

Вычислено, 3: С 63,29; Н 7,13;

N 9,00; S 4,12 41}i NgOTS Н О.

Найдено,: С 63,38; Н 6,04;

N 9,14; S 4,12

Пример3.

4 (S) -(N-Бензилоксикарбонил-3- (t мафтил) -L-аланил-3- (4-тиазолил) -DLаланил)амино-3(S)-окси-6-метил"N-(2морфолиноэтил)гептанамид (соединение 3).

400 мг (0,77 ммоль) N-бензилоксикарбонил-3-(1-нафтил)-L-аланил-3-(4, тиазолил)-DL-аланин гидразида суспендируют в 10 мл диметилформамида, затем суспензию охлаждают до -60 С и при этой температуре в суспенэию добавляют 0,66 мл 4-н. раствора хлористого водорода в диоксане. Затем температуру реакции поднимают до -20 С о и при этой температуре в суспензию добавляют 0,13 мл (0,97 ммоль) изоамил нитрита, затем смесь перемешивают в течение 10 мин. Наблюдают ис" чезновение гидразида и затем cycneH" эию снова охлаждают до -60 С и при о

39852 8 этой температуре в суспензию с целью нейтрализации добавляют 0,33 мл (3,00 ммоль) И-метилморфолина .

l3 то же самое время 4(S) -трет-бутоксикарЬониламино-3(S)-окси"6-метилгентановую кислоту и (2-морфолиноэтил)амин превращают в амид при помощи диэтилфосфорцианидата и триэтилами10 на. Затем трет-бутоксикарбонильную группу удаляют с использованием 6 н. раствора хлористого водорода в диоксане. Получают хлордигидрат 4(В)амино-3(s)-окси-6"метил-П-(2-морфолиноэтил)гептанамида.

350 мг (0,97 ммоль) этого соеди" йения и 0,22 мл (2,00 ммоль) N-метилморфолина добавляют в полученную выше реакционную смесь, а затем ре20 акционную смесь перемешивают в течеwe ночи при 4 С. Растворитель отгоО няют при пониженном давлении, а полученный остаток подвергают очистке с .использованием препаративной тонко25 слойной хроматографии на силикагеле и используя смесь хлороформа и метанола в объемном соотношении 5: 1 в качестве проявляющего растворителя, в результате чего получают 290 мг (473) 1,5-гидрата соединения из заголовка примера в виде белых кристаллов, которые., плавятся при 132-136 С, Я .-34,3 (C=0,3, метанол).

Элементный анализ.

Вычислено, Ф: С 61,55; H 6,93;

N E0 50; S 4,00, С,Б gzNgDgS" 1, 5Н О

Найдено, С 61,10; Н 6,30; N10,,4.7;

s 4,14

8-.(4($)-fN-Бенэилоксикарбонил-3(1-, нафтил)-L-аланил-3-(4-тиазолил)DL-аланил,(амина-3(S)"окси-6-метил-NfS-(-)-2-метилбутил) гептанамид (соединение 4).

400 мг (0,77 ммоль) N-бензилоксикарбонил"3-(1-нафтил)-N-аланил-3(4-тиазолил)-DL-аланин гидразина сус пендируют в 10 мл диметилформамида

©-сп,ОС-NH

ЯЯ 35

CONH40

CONH

0Н

17398 и эту суспензию охлаждают до -60 С и при этой температуре добавляют

0,66 мл 4 н. хлористого водорода в диоксане. Реакционную температуру до водят до -20 С и затем добавляют

6 5

0,13 мл (0,97 ммоль) изоамилнитрита, и смесь перемешивают в течение

10 мин.

При подтверждении исчезновения 1О гидразида смесь снова охлаждают до

-60 С и добавляют 0,33 мл (3,00 ммоль)

Я-метилморфолина для нейтрализации с последующим добавлением 280 r (1,00 ммоль) 4(S)-амино-3(S)-гидрок15 си-6-метил-11- $(S)-(-)-Z-метилбутил гептанамид гидрохлорида и 0,12 мл (1,09 ммоль) N-метилморфолина.

Растворитель отгоняют при пониженном давлении и остаток очищают тон- 20 кослойной хроматографией на силикагеле, используя как разделяющий растворитель смесь хлороформ:метанол в отношении 5:1, получая 294 мг (513) моногидрата названного соединения в виде белых кристаллов, т.пл. 134137ОС.

Элементный анализ. вычислено, : С 64,23; H 7,14;

936; s 4,29

С,1рНУ1Ид0 5 Н О, Найдено, . С 64,00; Н 7,06;

1! 9,01; S 4,39.

Пример5.

N-$4 (S) -(N-Бензилокси кар бонил-345 (1-нафтил)-L-аланил-L-r c p ci$ -мино-3(S)-гидрокси-5- циклогексилпентеноид! -L-иеодейцинод (соединение 5).

Используя 315 г (1 ммоль) 4(Б)трет-бутоксикарбониламино-3(Б)-гидрокси-5-циклогексилпентановой кислоты и 129 мг (1,1 ммоль) L-изолейцинола, получ «ют N I4(S)-трет-Ьутоксикарбониламино-3(S)-окси-5-циклогексилпен.таноил)-L-изолейцинол в виде Ьелого порошкообразного вещества, 207 мг

55 (0,5 ммоль) которого превращают в

N-(ч (S)-j N-бензилоксика рбонил-3- (1- нафтил) -L-аланил-L-гистидил)аиино52

Э (Б)-окси-5-циклогексилпентаноил jL-изолейцинол. 400,5 мг (0,5. ммоль) последнего растворяют в смеси !0 мл метанола и 0,5 мл соляной кислоты в диоксане (4 н.), растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток промывают этилацетатом и названный продукт выделяют в виде хлоргидрата.

Проведены Ьиологические испытания полученных соединений.

Способность соединений ингибировать активность ренина определяют в соответствии с методом Кокубу.

Предлагаемое соединение растворяется в 60 об.4/объем водного раствора этанола. Активность -человеческого ренина в присутствии или в отсут-, ствии каждого из соединений измеряется с использованием ангиотензиногена овцы. Общий объем в 1 мл смеси для проведения анализа содержал 0,1 моль/ле

Фосфатного буфера (рН 7,8), человеческий ренин (эквивалент 0,5 кг антиотензина 1 на мл/мин), ангиотензиноген овцы (эквивалент 200 нг ангиотензина 1), указанную концентрацию испытываемого соединения, 63 этанола и ингибиторы ангиотензиназы (10 ммоль/л этилендиаминтетраацетата натрия и 3,4 ммоль/л О-оксихинолина).

Смеси давали возможность взаимодействовать в течение 10 мин при 37 С, вЂ” о а затем реакцию прекращали при помощи помещения пробирки в ванну с кипящей водой на 5 мин. Далее смесь подвергали центрифугированию, а верхний слой (объемом от 0,05 до О,! мл) использовали для анализа оставшегося ангиотензина 1.

Идентичный эксперимент проводили в качестве контрольного эксперимента за тем исключением, что предлагаемое соединение не применяли. Исходя из полученных значений вычисляли ингибирование в процентах активности ренина, которое было достигнуто для каждого испытываемого соединения. Полученные результаты приведены в таблице. Ука.занные значения являются средними по результатам трех-четырех экспериментов.

Из таблицы видно, что предлагаемые соединения обладают существенным ингибиторным действием относительно активности человеческого ренина и превосходят известное соединениеCody-пептид, При этом соединения, по l2! 739852

-СОИНСН,СН,-N O

Формула изобретения

Способ получения пептидов формулы или их фармацевтически приемлемых

10 солей,отличающийся тем, что карбоновую кислоту общей формулы

R1CP ИН-СН(К )-CONH-CH(R )-Х, где R вЂ” группа формулы

CH2CH(NH C02CHRRh)

1 /

Ингибиторная константа КИ, М

Процент ингибирования человеческого ренина (концентрация испытуемого соединения) Соединение

99,1 (I ° 10 ) 6,0 10

7,6 ° !О

98,2 (1 ° 10 )

И,7 (110) Cody-пептид (с введенным остатком лизина) 2,0 10

Составитель В.Волкова

Редактор H. Рогулич Техред Л,олийнык КоррЕктор М. Самборская

Заказ 2012 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР !

13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина;101! I

l лученные в условиях предлагаемого способа, в испытуемых дозах, не проявляли никаких призйаков токсичности, К вЂ” (С1-С, )-алкил, (С1-С )-тиазолилалкил, имидазолилметил;.

R вЂ” изобутил, циклогексилметил;

Х - группа СН(А-Rg)0H;

А вЂ” метиленовая rpynna;

R< вЂ” группа

-со-нн-сн1сн-сн2снз, сн сиз .-со-нк-сн-сн-сн,сн,, 1 сн,он

iR вЂ” CO-NH-СН(Р,) -СООН, где Е и К имеют указанные зна ели;, или ее реакционноспособное производное, подвергают взаимодействию с аминосоединением общей формулы а

H n-С!1(К,)-Х, где Х и Кз имеют указанные значения.