1744647 - Способ количественного определения суммы антоцианинов

Способ количественного определения суммы антоцианинов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к пищевой промышленности , сельскому хозяйству и может быть использовано для определения количества антоцианинов в различных частях растений, пищевых продуктах, пищевых красителях, в сельскохозяйственном сырье, а также для оценки Р-витаминной активности некоторых плодово-ягодных культур и их селекции по этому признаку. Экстракцию антоцианинов из растительного материала проводят двухфазной системой растворителей пентанол-1 - концентрированная соляная кислота - вода в соотношении 10-12:10-12:2-4 при температуре 100-110°С в течение 10-25 мин. Суммарное количество антоцианинов вычисляют по разности оптических плотностей при длинах волн 530 и 655 нм до и после обработки органической фазы экстрагента смесью 30%-ного пероксида водорода и метанола. 1 ил., 11 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 31/22

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4640525/13 (22) 24,01.89 (46) 30,06.92. Бюл. ¹ 24 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) А,Д,Рошаль, В.И.Циновый и В.Д.Орлов (53) 577.154.25(088.8) (56) Муравьева Д,А., Бубенчикова В.Н., Беликов Н.В. Спектрофотометрическое определение суммы антоцианинов в цветах василька синего. вЂ” Фармакология, 1987, т.

36, ¹5, с. 28-29, (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ АНТОЦИАНИНОВ (57) Изобретение относится к пищевой промышленности, сельскому хозяйству и может быть использовано для определения колиИзобретение относится к пищевой промышленности, сельскому хозяйству и может быть использовано для определения количества антоцианинов в различных частях растений, пищевых продуктах, пищевых красителях, в сельскохозяйственном сырье, а также для оценки P-витаминной активности некоторых плодово-ягодных культур и их селекции по этому признаку.

Цель изобретения вЂ” повышение точности.

При осуществлении данного способа экстракцию антоцианинов из растительного материала проводят двухфазной системой растворителей петанол-1 вЂ” концентрированная соляная кислота вЂ” вода в соотношении 10-12:10-12:2-4 в течение 10-25 мин при

100-110 С, охлаждают экстракт, отделяют органическую фазу. Затем отбирают аликвоту органической фазы и измеряют оптичеSU „„1744647 А1 чества антоцианинов в различных частях растений, пищевых продуктах, пищевых красителях, в сельскохозяйственном сырье, а также для оценки P-витаминной активности некоторых плодово-ягодных культур и их селекции по этому признаку. Экстракцию антоцианинов из растительного материала проводят двухфазной системой растворителей пентанол-1 вЂ” концентрированная соляная кислота вЂ” вода в соотношении

10-12:10-12:2-4 при температуре 100-110 С в течение 10-25 мин. Суммарное количество антоцианинов вычисляют по разности оптических плотностей при длинах волн 530 и

655 нм до и после обработки органической фазы экстрагента смесью 30%-ного пероксида водорода и метанола. 1 ил., 11 табл. скую плотность при длинах волн 530 и 655 нм относительно пентанола-1. После этого к аликвоте добавляют смесь метанола и 30%- 4 ного пероксида водорода в соотношении ф, 2,5-2,0:1,5-2,0 так, чтобы на 1 объемную ф часть аликвоты приходилось 1,5-4,0 объем- 0 ных частей смеси, и через 20-25 мин вновь измеряют оптическую плотность на тех же длинах волн, Суммарную концентрацию антоцианинов рассчитывают по разности оптических плотностей, Для увеличения экстракционной способности экстрагента используется равновесная двухфазная система растворителей пентанол-1 вЂ” концентрированная соляная кислота в смеси с водой. В "водном" слое, представляющем собой раствор соляной кислоты в воде, экстрагируемые из расти, тельного материала антоцианины при нагревании гидролизуются до единой

1744647 агликонной формы, Наличие в слое небольших количеств пентанола-1 понижает полярность водной фазы, что улучшает экстракцию антоцианинов. Образующиеся агликоны, хорошо растворимые в пентаноле, накапливаются в спиртовой фазе, Таким образом, спиртовый слой играет роль фазыколлектора, который, поглощая антоцианины в агликонной форме. постоянно поддерживает водный слой в ненасыщенном состоянии, способствуя более глубокой экстракции и гидролизу антоцианинов.

Высокая температура (100-110 С) и высокая концентрация соляной кислоты обеспечивают полный гидролиз антоцианинов до единой агликонной формы.

Для предотвращения мешающего влияния компонентов (флавоны, флавонолы и халконы) проводят измерение оптической плотности при длине волны 530 нм до и после обработки смесью 30% -ного пероксида водорода и метанола (1,5-2,0:2,5-2,0) в течение 20-25 мин. При действии этой окислительной системы из всего разнообразия флавоноидных соединений разрушаются лишь антоцианины, поэтому при вычитании оптической плотности раствора до и после окисления величины, соответствующие поглощению мешающих флавонолов, становятся равными нулю.

Влияние хлорофиллов, также мешающих определению антоцианинов, учитывается допол н ител ьн ым измерением оптической плотности при длине волны 655 нм, На чертеже показана треугольная диаграмма Гиббса-Розебома зависимости выхода суммы антоцианинов от соотношения компонентов экстрагирующей смеси.

Пример 1. Плод, очищенный от косточек, гомогенизируют, отбирают 0,100,25 r гомогената, помещают его в колбу емкостью 50-70 мл, заливают смесью 11 мл концентрированной соляной кислоты и 11 мл пентанола-1. Затем добавляют 3 мл воды и нагревают смесь с обратным холодильником на глицериновой или масляной бане при 100-110 С, изредка встряхивая содержимое колбы.

Спустя 20 мин нагревание прекращают, колбу охлаждают, ее содержимое переносят в делительную воронку. Стенки колбы омывают 1-2 порциями пентанола-1 (по 5 мл), который затем также переносят в делительную воронку. Органический (верхний) слой сливают в мерную колбу емкостью 50 мл.

Водную фазу после разделения взбалтывают с 5-10 мл пентанола-1, отделяют его в воронке и объединяют с остальной органической фазой. Объем последней доводят пентанолом до 50 мл, отбирают аликвоту 3 мл и определяют ее оптическую плотность на длинах волн 530 и 655 нм. Если плоды

5 особенно богаты антоцианинами и одной экстракции недостаточно для полного их извлечения, операцию экстрагирования проводят дважды, используя мерную колбу на

100 мл. Для проб, содержащих малые коли10 чества антоцианинов, отбор аликвоты следует проводить прямо из органического слоя экстрагента. Аналогичного эффекта можно достигнуть, используя для анализа соответственно меньшие или большие ис15 ходные навески гомогената, К взятой аликвоте добавляют 6 мл метанола, 6 MR 30 -ного пероксида водорода, раствор перемешивают и через 25 мин снова спектрофотометрируют. Расчет суммар20 ной концентрации антоцианинов проводят по формуле

О + / ант

g Е»т

25 А 530 г А 530 вЂ” х А 655 вЂ” г А 655

1 вЂ” ха где Q вЂ” содержание суммы антоцианинов в пробе, мг/г или мг/MR;

V вЂ” общий объем органической фазы (мерной колбы), мл;

M»T вЂ” молекулярная масса стандартного антоцианина, на который ведут пересчет всех остальных веществ этой группы, г/моль;

Е нт вЂ” молярный коэффициент погашения стандартного антоцианина, л/моль см;

r вЂ” разведение аликвоты (в примере к аликвоте добавляют 6 мл метанола и 6 мл

Н202, Объем аликвоты до разбавления вЂ” 3

40 мл, после разбавления вЂ” 15 мл. Таким образом, г=15/3=5);

g вЂ” масса или объем пробы, r или мл;

А530 и A655 вЂ” оптические плотности аликвоты на длинах волн 530 и 655 нм до добав45 ления метанола и Н202; ь,ь

A53o и А655 вЂ” оптические плотности раствора спустя 20-25 мин после добавления метанола и Н202; х и а вЂ” соотношения коэффициентов

50 погашения хлорофиллов (смеси хлорофиллов или стандартного хлорофилла и стандартного антоцианина на длинах волн 655 и

530 нм).

Результаты анализа количества суммы

55 антоцианинов в плодах Legustrum vulgare приведены в табл.1, В качестве стандартного .антоцианина и внутреннего стандарта для проверки способа использован пелларгонидин. Выход внутреннего стандартавЂ”

1744647

97,8, среднеквадратическая ошибкавЂ”

0,06-0,08, ошибка среднего вЂ” 1,6-2,7 .

Внутренний стандарт вЂ” 0,89 мг/г.

Выход внутреннего стандарта вЂ” 0,87 мг/г (97,8 ).

Пример 2. 0,25 г травяной муки, полученной из люцерны, скошенной в фазе цветения (используют для кормления сельскохозяйственных животных) или 0,2 г измельченных лушпаек подсолнечника (используют как сырье для получения красного пищевого красителя) тщательно перемешивают с раствором HCI и пентанолом-1, затем добавляют 3 мл воды и анализируют, как в примере 1. Полученный гидролизат имеет интенсивный желто-коричневый цвет из-за большого количества сопутствующих фенольных соединений. Если аликвота слишком сильно поглощает на длине волны

530 нм, ее разбавляют пентанолом в 2-3 раза, а полученную оптическую плотность умножают на величину разведения. Результаты определения приведены в табл.2.

Пример 3, 5,5 мг (5,5х10 г) неочищенного (до сбраживания и диализа) пищевого красителя заливают 11 мл пентанола-1, слегка нагревают и перемешивают до полного растворения, затем добавляют остальные компоненты смеси и проводят анализ, как в примере 1. Во время нагревания экстрагент каждые 2-3 мин тщательно перемешивают или встряхивают. Это необходимо для более полного контакта антоцианинов с раствором HCI (более полного гидролиза).

При слишком сильном поглощении антоцианинов либо разводят аликвоту, как в примере 2, либо повторяют весь анализ с меньшей навеской пигмента. Результаты измерения см. в табл.3.

Пример 4. К 22 мл смеси пентанола-1 и концентрированного раствора HCI (11:11) приливают 3 мл виноградного напитка. Далее анализ проводят, как в примере 1. По мере гидролиза антоцианины переходят из водного слоя в органический. Время гидролиза вЂ” 10 мин, Количество антоцианинов в виноградном напитке приведено в табл.4..

Пример 5. 0,2 г лепестков астры красноцветковой однолетней (Aster

amellus) экстрагируют системами растворителей, содержащих различные соотношения пентанола-1, концентрированной соляной кислоты и воды, в течение 10 мин, Далее анализ проводят, как в примере 1.

Количество пентанола и соляной кислоты варьируют от 36 до 52, воды вЂ” от 4,5 до

25 . Максимальная концентрация антоцианинов (1,26 мг/г) получена при соотношении спирта, кислоты и воды 10-12;10-12:2-4, 55 личество антоцианинов извлекается при температуре среды 100-110 С. При 60-90 С скорость гидролиза и извлечение антоцианинов уменьшаются, при 120 С начинается полимеризация антоцианинов, поэтому

Результаты подбора соотношения компонентов экстрагирующей системы растворителей приведены на треугольной диаграмме состава Гиббса-Розебома (см

5 чертеж). Изолинией "а" ограничена област состава смеси, при которой достигается из. влечение более 85 антоцианинов (точки 1 вЂ” 86,0 ; 2,3 вЂ” 88,4 ; 4 вЂ” 100 Oo ; 5 вЂ” 88 6

6 вЂ” 85,3 7 вЂ” 89,1 ; 8 вЂ” 95,3 Д; 9 вЂ” 90,7 )

10 Линия "б" отделяет область составов, прь которых двухфазная система неустойчив; или не существует. Из диаграммы, изобра женной на чертеже следует, что при увеличении количества спирта, соляной кислоты

15 и при уменьшении количества воды разделение фаз ухудшается. Уменьшение в системе доли соляной кислоты или увеличение объема воды приводит к понижению общего содержания HCI, что замедляет экстракцию

20 и ухудшает условия гидролиза. При уменьшении количества спирта соответственно уменьшается объем органической фазы, что вызывает снижение эффективной емкости экстрагента. Таким образом, оптимальным

25 является соотношение компонентов пентанол-1 вЂ” конц. соляная кислота вЂ” вода вЂ” 1012:10-12:2-4. Отклонения от данного соотношения либо ухудшают условия экстракции, либо понижают устойчивость двух30 фазной системы.

Пример 6. 0,2 г лепестков астры экстрагируют системой растворителей пентанол-1 вЂ” конц. соляная кислота вЂ” вода (11;11;3) в течение 5-35 мин. Результаты on35 ределения суммарного количества антоцианинов приведены в табл.5..Максимальное извлечение наблюдается при продолжительности экстракции 10-25 мин, Большее время экстракции приводит к уменьшению

40 количества антоцианинов, Ilo-видимому, изза реакции окислительной полимеризации, характерной для антоцианинов и протекающей в жестких условиях.

Пример 7. 0,2 г лепестков астры

45 однолетней заливают экстрагентом состава пентанол-1 вЂ” конц.соляная кислота вЂ” вода (11:11;3) и нагревают на термостатируемой бане в течение 15 мин при температурах

60-120 С. Отсчет времени начинают, когда

50 показания термометра, помещенного в экстрагент, достигают заданной температуры (60-100 С) или когда экстрагент начинает кипеть (110-120 С). Результаты, приведенные в табл.6, показывают, что максимальное ко1744647 концентрация анализируемых веществ в экстракте понижается.

Пример 8. К 1 мл раствора пелларгонидина в пентаноле-1 (С=2,6х10-5 M) приливают 4 мл смеси спирта и 30 -ного пероксида водорода, Количество раствора

Н О в смеси варьируют от 6,25 до 50 объемных процентов, Добавление больших объемов Н202 приводит к помутнению пробы за счет разделения фаз и образования эмульсии. Измерение оптической плотности проводят на автоматическом спектрофотометре каждые 100 с, Константу скорости реакции определяют методом наименьших квадратов по формуле ! пА т=! пАо-К т, где А вЂ” начальная оптическая плотность раствора (530 нм);

К вЂ” константа скорости реакции, с-1; т- время протекания реакции, с;

А у вЂ” оптическая плотность в данный момент времени, Зависимость скорости реакции от соотношения 30 -ного пероксида водорода и спирта, а также от химического строения последнего приведены в табл.7. Наибольшая скорость окисления наблюдается при добавлении к раствору антоцианинов смеси

30 -ной НгО и метанола в соотношении

1,5-2,0:2,5-2,0.

Пример 9. Аликвоты 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;

2,5; 3,0 мл раствора пелларгонидина (С=2,2 х 10 M) в пентаноле-1 смешивают с окисляющей смесью 30 -ная Нг02 вЂ” метанол (2:2) так, чтобы общий объем полученного раствора был равен 5 мл, Константы скорости реакции определяют, как в примере 2, Полученные результаты (табл.8) показывают, что наибольшая скорость окисления (распада) наблюдается при соотношении объемов аликвоты и окисляющей смеси 1:4-1:1,5.

Пример 10. К растворам пелларгонидина объемом 1 мл добавляют по 4 мл смеси

30 -ной Н О и метанола в соотношении

1,50:2,50; 1,75:1,25; 2,00:2,00, Измерения оптической плотности проводят каждые 3-5 мин, затем рассчитывают процент распада антоцианина. Результаты, приведенные в табл.9, показывают что распад более чем

99,0 антоцианинов достигается при продолжительности реакции более 20 мин. В целях сокращения времени аналитического определения верхний предел. продолжительности реакции взят равным 25 мин, За

5 мин пробу подготавливают к спектрофотометрированию и определяют ее оптическую плотность при 530 и 655 нм.

Пример 11. Навески смеси фенольных соединений, выделенной из лепестков хризантемы корейской и содержащей флавонолы и антоцианины, растворяют в равных объемах 1 -ного водного раствора HCI и пентанола-1. Определение оптической плотности проводят согласно предлагаемому способу и способу-прототипу. Затем к аналогичным растворам добавляют хроматографически очищенный спиртовый экстракт хлорофилла А в количестве 0,1 мл на 3 мл раствора антоцианинов и снова проводят анализ. Из полученных сравнительных данных, приведенных в табл.10, следует, что как флавоноиды, так и хлорофиллы значительно ухудшают точность и селективность способа-прототипа. В предлагаемом способе мешающее влияние этих примесей практически полностью компенсируется.

Следовательно, предлагаемый способ более селективен и позволяет получить большую точность анализа.

Пример 12 (сравнительное испытание прототипа и предлагаемого способа). Навески 0,29-0,33 г лепестков хризантемы корейской "Бекон" анализируют на содержание суммы антоцианинов предлагаемым способом и способом-прототипом в трех повторностях. Параллельно проводят аналогичные аналитические определения в присутствии внутреннего стандарта вЂ” 1,15-1,26 мг пел-, ларгонидина.

Сравнительным испытанием установлено, что предлагаемый способ имеет большие чувствительность, точность, лучший выход внутреннего стандарта. Резкое отличие между полученными результатами в предлагаемом способе и способе-прототипе объясняется низкими экстрагирующими свойствами системы растворителей прототипа. Результаты сравнительных испытаний приведены в табл,11, Формула изобретения

Способ количественного определения суммы антоцианинов, предусматривающий их экстракцию из растительного материала в присутствии соляной кислоты и измерение значения оптической плотности полученного экстракта, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, экстракцию антоцианинов проводят двухфазной системой растворителей пентанол-1:концентрированная соляная кислота;вода в соотношении 10-12:10-12:2-4 в течение 1025 мин при 100-110 С, из полученного экстракта осуществляют отбор аликвоты органической фазы и обработку аликвоты в течение 20-25 мин смесью 30 пероксида водорода и метанола, взятых в соотношении

1,5-2,0:2,5;2,0, причем смесь последних к

1744647

10 пероксида водорода и метанола с последующим установлением величины разности измеренных значений, а количественное определение суммы антоцианинов осуществ5 ляют по установленной величине разности. аликвоте органической фазы берут в соотношении 1,5-4,0:1, измерение значения оптической плотности осуществляют на длинах волн 530 и 655 нм до и после обработки .аликвоты органической фазы смесью 30о

Таблица 1 Определение количества антоцианинов в плодах

Legustrum vulgare г А530

Г А655

Q, мг/г Среднее содержание мг/г

А530

А655

Масса навески, г

Ср, кв, ошибка

3,00 +0,08

0,053

3,87 0,06

0,035

Таблица 2

Определение антоцианинов в растительных материалах и продуктах их переработки

Таблица 3

Определение антоцианинов в пищевом красителе

* Объем органической фазы разбавлен до 250 мл.

0,248

0,247

0,248

0,251

0,247

0,241

0,243

0,246

0,247

1,555

1,590

1,580

1,600

1,595

2,100

2,105

2,085

2,120

2,105

0,120

0,100

0,105

0,100

0,200

0,195

0,205

0,190

0,185

0,175

0,180

0,270

0,275

0,270

0,005

0,015

0,005

0,001

0,040

0,055

0,035

0,040

2,91

3,00

3,01

3,04

3,86

3,88

3,84

3,93

3,90

1744647

Таблица 4

Определение антоцианинов в виноградном напитке

Таблица 5

Таблица 6

Влияние температуры на экстракцию антоцианинов

Таблица 7

Зависимость константы скорости окисления антоцианинов (х 10, с ) от количества перекиси водорода и природы спирта в окисляющей смеси

Зависимость выхода антоцианинов от длительности экстракции

1744647

Таблица 8

Зависимость констант скорости окисления антоцианинов (х 10, с ) от соотношения объемов аликвоты анализируемого раствора и окисляющей смеси..Таблица 9

Процент распада антоцианинов при разном составе окисляющей смеси

Таблица 10

Влияние примесей на селективность и точность аналиэа антоцианинов предлагаемым способом и способом-прототипом

Завышение

А,„Г, результатов к

А р

А,-1Р

r Ас ° ., - 5 .

Способ

АаУтА(у

ОгГг

Антоцианины

0,028

О, 135

О, 134

О, 022

О, 020

0,132

0,136

Антоцианины+

+хлорофилл

0,102

0,100

0,101

0,137 2,2ь

0,139

0,135

0,137

Прототип

0, 154 .. 14,93

Антоцианины

Антоцианины+

+хлорофилл

О, 173

27,2Ж

А „ .. вЂ” для предлагаемого способа, А:;-,-- для прототипа

О, 162

О, 153

0,155

0,181

0,172

0,175

0, 154

0,151

0,157

0,172

0,170

0,178

О, 012

О, 011

О, 021

О, 004

0,004

0,005 о,033

0,032

0,030

1744647 л

01! fg

Z Iэ а

a. (Q ц

: > Z

Z 6

Э Iо о о

Б Э (O .Е

1 L

I О м л м

OO о

° /

О «(\

«Г\ О

QO л лО о л

° О 0

Ф оо (Ч °

-о

«ф

01 о л

O (Fl (Ч

-о

0> л

-о е!

» ° (Q m

>у I- Y

S л ° хса цо о

Э m

CL Э

«.> CLl> СУ (Ч о

° о QO о ао (е> л

° О

О г

Б о

lg о

v о о оо0

QO (Fl СО л а л ооо

L л »

QO «» >»

N (Ч

° ° л ! е -е

Ю о о о с о с ц

Э а. с о

L о

5 с ц

Эа с асмо о

«Г\ О Ч:> ооо о л

m м сп

О С Со

-о

М С1СЧ е

I!е е.

1 л»

l сч л (Ч - О>

--о а ° ° с> о о м -4 -

-1 е ооо л л л ооо

I .->

1 С

1 L>

I 1 I

I 1 1

X (Q

X Z

lg bo

S - 1

=Т QO о

I- o

«Q I

« ,«>

«Г\ «Г\ -

О> Ч .> -- .

=1. Мм

° ° о о о м=г м о о сч

\ О е

° л о о о с

S о

Iо

l0 о

v о

C о

1 !

1С<

t и

1 о00о а mOO о о о е л ° о о о О МСО

СО 00 О

° ° ° о о о ою о л с о о с о ц

Я Э а с

С л

m o»»o

О m («Г\ о

>> Ч".>

1 С> еГ; ! >«с >

I с ;

1 !

1С

I»

Д с о

Cn o мам О О Л а л л о о о вм о в л а о о о м D

Ф - (Ч

LA М1 LA л ооо м «Г\ ° (Ч МСО мм о а л ° ммм

1а

tQ ц

«Q

I I

1 Э

I У 1 и

I Э.вЂ”

1 CL

Э (g

1 C Z

° >

«Q

m « ф N

a. (Ю X о

S а

Ы (Ч Ф О

00 О 00

° а ° ммм (»I N LA

<палм л «а м м-4 а (Q S а 1о о

m I1- О о а (Q c (l

I I 1

l X

I Z

1 Э

1 (l е! (0

1 М о

1 Э

t (0

I»

Z л

I- S о =Г

О (0

Z S

1- а

О m

«» m

IК Z (О Э у о =Г

Э X у е

z e

l- A с о

° °

1 1 I

I 1 I

I О

OO 00 О л о- (Ч Л-Ф (Ч» ° ммм е ° °

ooo л

S tg э о «7

u e (g

v «О а

2С Z 8 амит О о а О Л м ммм л в а ооо ола

О Ct>O (Ч О R (t1 СЧ счмм

° л ° ооо о що QO 0

МСО LA (Ч - 0 м м сч

° ° ° о о о с

Ю 1о о

o to о с а и с

Э >Х

З ц

Э Э

a. (Q

Ю о

v о с

1 I

1 1

I oM 1 ! 1

I 1

1 1

I I I 1 I I

1 I I 1 1 1

I . .) 1 !

««> О «е> О> LA О> (У1 01 0 1 OO OO 01 а л ° > л ос с> =г-а

1 !

I !

° 1

I !

I е

Э с

1о

Д с

L0 о о о

««>

> :С

8 о о с о

X о

«Q

fQ с ц

L (О

>с>

<Г

CL о

««1

Iо (Q

° Д о о с> о а Э

Ю Iо

1 Z о

Ю о 1о о о с м оо

° О

«» >в

09 «Z

О Э

> â€” a, C сЧ IO

-о

I Оo v л О

Ю «:

0 о о . ° о с ц

O l e

° CL

«- r ц

Э 1 л а 0о»о

C fО

- ал

L е» м в" л >»

m(Qc о s (t! 1X 0

C X Iz а.о с а. о с

I- I» оэ" ат л

cuIо

° - (Q 0 (б Z

1О

Е«00

X 1- О а.e0

Э I- L л и о с

L О» «С (tt я (О

Z Э Б ц а с>

Э - >>

a.e а

uzz

Х «(О Э Ф

Д Д „О л

zmu

atQ Y о м(>

1744647

237 н,ю(%3

Составитель И.Пинуев

Редактор А,Маковская Техред М.Моргентал Корректор 3.Салко

Заказ 2196 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Способ количественного определения суммы антоцианинов

Патент 1744647