Штамм гриба теiтirаснiuм rоsеuм v.веyма как тест-культура для оценки микологической стойкости алюминиевых медь- марганец содержащих сплавов в условиях тропического климата

Штамм гриба теiтirаснiuм rоsеuм v.веyма как тест-культура для оценки микологической стойкости алюминиевых медь- марганец содержащих сплавов в условиях тропического климата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСVi/iX

РЕСПУБЛИК (я)в С 12 0 1/02, 1/18

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

Я

Нцд i н/ ф

Дь.

Дъ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4896839/13 (22) 26,12.90 (46) 15.07.92,Бюл, N . 26 (72) Г.А,Матюша, Т.А.Карташева, А,А,Ге расименко. А.А.Самунийа и Т.П.Сизова (56) Авторское свидетельство СССР N.

1606530, кл. С 12 0.1/02, 1991, (54) ILJTAMM ГРИБА TRlTlRACHIUM ROSEUM

V,BEYMA КАКТЕСТ-КУЛЬТУРАДЛЯ ОЦЕНКИ

МИКОЛОГИЧЕСКОЙ СТОЙКОСТИ АЛЮМИНИЕВЫХ МЕДЬ-МАРГАНЕЦСОДЕРЖАЩИХ

СПЛАВОВ В УСЛОВИЯХ ТРОПИЧЕСКОГО

КЛИМАТА

Изобретение относится к биокоррозии металлических сплавов и представляет собой использование нового штамма мицелиального гриба в лабораторных условиях для оценки грибостойкости алюминиевых медьмарганецсодержащих сплавов, применяемых в тропическом климате.

Известна смесь мицелиальных грибов, применяемая для испытания на биостойкость образцов, не имеющих деталей из дерева, бумаги и картона. В эту смесь входят грибы: Aspergillus niger van Tieghem, Aspergilius terreus Thorn, Aureobasidium

pullulans Arnaud, Paeciiomyces varioti

Bainier, Реп!сй!ов ochro-chioron Biourge, Penicil fiurn funlculosum Tham, Scopularlopsis

Brevicaulis Balnier, Trichoderma viride Pers ех Fr. Недостатком этого набора грибов является незначительная активность к металлам из алюминиевых сплавов, используемых в тропических условиях. Кроме того, некоторые культуры, входящие в указанный набор (Азрещйоз, niger нап Tieghem, Paecilomyces

varioti Bainier), относятся к lV группе гри,„,!Ы,„, 1747474 А1

2 (57) Использование: биотехнология, машиностроение, Сущность изобретения: предлагается испольэовать .в качестве тест :культуры для оценки микологической стойкости алюминиевых медь-марганец содержащих сплав штамм гриба

Tritirachium roseum. н,Beyma ВКМ-3187Д, выделенный иэ продуктов коррозии алюминиевого сплава. Штамм гриба

Tritlrachium roseum v,Beyma BKM-3187Д де- понирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ.АН СССР, 3 табл, бов-возбудителей болезней и их применение в лабораторных условиях представляет опасность для здоровья людей. . Известен также штамм гриба

Penicillium chrysogenum BKMF-245, предназначенный для исследования биологической коррозии металлов.

Недостатком этого штамма является его недостаточно высокая активность по отношению к алюминиевйм медь-марганец содержащим сплавам.

В качестве прототипа, наиболее близкого к предлагаемому штамму по назначению, является штамм Penicilllum chrysogenum

BKMF-3068Д, используемый в качестве тест-культуры для испытаний на грибостойкость алюминиевых сплавов.

Недостатком этого штамма является незначительно высокая его активность по отношению к алюминиевым сплавам, предназначенным для применения в странах с тропическим клйматоМ;

Цель изобретения — получение агрессивного изолята мицелиального гриба-деструктора алюминиевых медь-марганец

1747474

20

25 ной питательной средой Чапека или суслоагар, Штамм xopolIlo,>:ðaíèòcÿ в пробирках с минеральной средой (состав, г/л: КН2РО

1;0; MgS04 0,5; NaNOg 3,0; KCI 2,0; вода

30 водопроводная остальное) с минеральным маслом МК-8 в соотношении минеральная среда. масло 3:2, Предлагаемый штамм не патогенен, Пример 1. Выделение штамма.

35 . С пораженных коррозией металлических образцов сплава Д16, экспонировавшегося в натурных условиях Республики .. . Куба, соскабливали стерильным шпателем

0,1 г рыхлых продуктов коррозии сплава, 40 переносили с соблюдением стерильности в ступку, затем измельчали и переносили в чашку Петри с застывшей средой суслоагар, Помещенные на поверхность питательной среды продукты коррозии

5 алюминиевого сплава тщательно растирали стерильным шпателем по всей поверхности среды сначала в первой чашке, а затем этим же шпателем йротирали поверхность среды последовательно во второй-пятой чашках.

О Чашки закрывали крышками и инкубировали в термостате при 300С в течение 10-14 сут, По истечении инкубирования в первой чашке наблюдался рост смеси различных микроорганизмов, а в последней преимуще5 ственно уже изолированные колонии, из которых небольшое количество спор переливочной иглой переносили в чашки

Петри с застывшей средой сусло-агар или

Чапека и также инкубировали при 30 в

Штамм гриба на среде сусло-агар через неделю роста при 20-25 С образует колонии .,розового цвета диаметром 3 мм, à при 3035 С вЂ” колонии диаметром 5-10 мм, т.е, рост замедленный, Обратная сторона колоний темно-коричневого цвета. Конидиеносцы прямостоящие, желтоватые, 300-350х3 мкм, несут 6-7 "этажей" по 2-3 спораносящие ве-, точки. Спороносящие веточки. имеют шиловидную форму с гладким округленным основанием, длиной 20-28.мкм, оканчивают- 4 ся характерной удлиненной тонкой частью. достигающей 40 мкм длины, и имеющей многочисленные мелкие изгибы, Конидии возникают по одной на мягких изгибах по всей длине (от основания до верхушки) уд- 5 линеннай тонкой части спароносной ветки, иногда числом до 30. сидячие, бесцветные, овальные, 2х2,3-2,6 мкм.

Физиолого-биохимические свойства.

Температурный оптимум роста — 30 С, 5 минимум — 15 С, максимум — 40 С: Штамм хорошо растет на сусле-агаре, среде Чапека, среде БСА (сусло-агар и мясопептонный бульон в соотношении 1:1) при широком диапазоне рН (от 3 до 10). Хорошо способен содержащих сплавов, применяемых в условиях тропиков, Для получения штамма Tritirachium rt>scum

v. Beyma ВМКГ=3187Д была исследована микрофлора продуктов коррозии металлических образцов из алюминиевых сплавов, как не защищенных, так и защищенных консервационными смазочными материалами, проходящими натурные испытания в течение 16 мес. в тропических условиях Республики Куба, Кроме того, были исследованы продукты коррозии деталей из алюминиевых сплавов, Ь входящих в состав технических изделий; эксплуатирующихся в тропиках.

Из различных образцов алюминиевых сплавов, прокорродировавших в результате натурных испытаний в Республике Куба, были выделены различные микромицеты. Наиболее часто на пораженном коррозией сплаве Д16 встречался гриб Tritirachium

roseum v. Beyma. Из 60 образцов сплава Д16 указанный гриб был обнаружен в продуктах коррозии 45 образцов, Наиболее жизнеспособным и агрессивным по отношению к сплаву Д16 оказался предлагаемый штамм

Tritirachium roseum v. Beyma N YI!.

Штамм Tritirachium roseum v.Beyma выделен,из продуктов коррозии сплава Д16, находящегося в условиях Республики Куба, в июне 1989 г, Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ

ПН СССР пад номером ВКМР=3187Д.

Культурально-морфологические свайстрасти на консервационных смазочных материалах, на которых чаще всего развивается с бактериями рода ВасШоз.

Отношение к источникам углерода: из источников углерода этот штамм лучше всеro усваивает консервационные смазочные материалы, наносимые на металлические сплавы, хуже - глюкозу. сахарозу, глицерин, маннит, сорбит, совсем незначительно— крахмал и совсем не усваивает целлюлозу

Отношение к источнику азота: из источников азота Tritirachium roseum v,Beyma лучше всего усваивает азотнокислый аммоний, хуже — L — аспарагин, DL-аспарагиновую кислоту, DL- rx -лейцин, L-глутамин, мочевину и совсем незначительно -DL- Qаланин, L-глутаминовую кислоту, азотнокислый аммоний и сернокислый аммоний, Антагонистические свойства по отношению к другим культурам, выделенным в тех же условиях, отсутствуют.

Хранить штамм можно в лиофильно высушенном состоянии в стерильных ампулах..

Непродолжительное время можно хранить в холодильнике в пробирках с агаризован1747474

30

45

S.- " + 2 . 100 о

8оценк.

55 течение 10-14 сут, После окончательного пересева, в результате которого была получена чистая культура изолята, проверяли ее чистоту микроскопированием, высевом на питательные среды Чапека, сусло-агар, МПА, 5СА (сусло-агар+мясопептонный бульон в соотношении 1:1). Чистую культуру гриба переносили в пробирки с питательной средой Чапека, инкубировали, затем хранили в холодильнике с целью дальнейших испытаний алюминиевых сплавов, в частности сплава Д16 на грибостойкость, Пример 2, Испытание алюминиевого сплава Д16 на грибостойкость.

Для испытания алюминиевого сплава на грибостойкость нарезали иэ листового проката алюминиевого сплава Д16 образцы размером 25х15х2 мм. Торцы зачищали наждачной бумагой от заусенцев. Образцы обезжиривали венской известью с помощью щеточки, промывали водопроводной водой, промокали фильтровальной бумагой и высушивали в сушильном шкафу при 80 С в течение 15 мин. Высушенные образцы взвешивали на весах SaI(orius с точностью до +0,0002r, заворачивали в

Крафт-бумагу и стерилизовали в сушильном шкафу HS61F при 165 С в течение 2 ч, Подготовленные к испытаниям образцы подвергали исследованию на грибостойкость контактным методом, сущность которого заключаешься в выдержлвании образцов из алюминиевого сплава Д16 на поверхности агаризованной питательной среды, инокулироьанной тест-культурой.

На loeepxHocTb питательной среды сусло-агар в чашках Петри помещают одну бактериологическую петлю спор гриба

Tritirachium roseum v.Beyma BKMF-3187Д и растирают равномерно шпателем по всей поверхности питательной среды, Затем чашки Петри на 7 сут ставят в термостат при верхности среды наблюдается сплошной рост мицелия, íà его поверхность стерильным пинцетом кладут простерилизованные образцы из алюминиевого сплава Д16. Количество испытанных образцов должно быть не менее 5 шт. Контролем служат те же образцы, но помещенные на поверхность стерильной питательной среды, не засеянной тест-культурой.

Подготовленные к испытаниям чашки

Петри с металлическими образцами помещают в эксикатор, на дно которого наливают стерильную дистиллированную воду, эа счет чего в зксикаторе поддерживается влажность 96-98%. Зксикаторы располагают в термостатной комнате при 30 +2 С, Продолжительность экспозиции опытных и контрольных образцов 9 мес, Аналогичные испытания проводили со штаммом Penicillium chrysogenum BKMF3068Д, который использовали в качестве прототипа.

После окончания испытаний чашки Петри с металлическими образцами подвергали стерилизации в автоклаве BK-75 при давлении 2 атм и температуре 120 С в течение 2 ч.

После убивки (стерилизации) металлические образцы очищали от. мицелия, питательной среды".и продуктов коррозии с помощью скальпеля. Окончательно продукты коррозии алюминиевого сплава Д16 удалялись в растворе состава: окись хрома (Ч1) 20 г/дм, ортофосфорная кислота (пл,1,59) 50 см /дм, температура 80-95 С.

Образцы пинцетом опускали в стакан с горячим раствором в вертикальном положении. выдерживали 1 мин, затем вынимали из раствора, промывали в воде, просушивали и взвешивали.

Потерю массы образцов определяли по формуле

К вЂ” — 100, mo

1 где A m — потеря массы испытуемого образца, r, п=®0 п . где mo — масса образца до испытаний, г;

m — масса образца после испытаний и удаления продуктов коррозии, r.

Площадь коррозионных поражений определялась наложением на оцениваемую поверхность металлического образца пластины из прозрачного материала с нанесенной на нее сеткой. По результатам измерения корроэионных очагов вычисляли процент коррозионного поражения металлических образцов по формуле где Sl — площадь корроэионного очага на лицевой стороне образца, клетки;

Sz — площадь коррозионного очага на оборотной стороне образца, клетки;

Яоцен — площадь оцениваемой поверхности клетки, Грибостойкость материала обратно пропорциональна площади пораженной поверхности образцов, 1747474

Формула изобретения

Штамм гриба Tritirachium roseum u.

Beyma BKM F-3187Д кэк тест-культура для оценки микологической стойкости алюминиевых медь-марганецсодержащих сплавов в условиях тропического климата, Таблица1

Влияние штаммов мицелиальных грибов на коррозию алюминиевого сплава Д16 после 9 мес испытаний

Измерение глубины коррозионных по. ражений определяли на металлографическом микроскопе.

Результаты сравниваемых испытаний на грибостойкость образцов из алюминие- 5 вого сплава Д16 с использованием в качестве тест-культур штаммов Tritirachium roseum

v, B eyma B KMF-3187Д и Penicillium

chrysogenum BKMF-3068Д представлены в табл. 1-3, 10

Из табл.1 видно, что предлагаемый штамм Tritirachium roseum ч,Beyma BKMF3187Д в 2 раза увеличивает площадь пораженной поверхности алюминиевых образцов из сплава Д16 при использовании 15 его в качестве тест-культуры для оценки микологической стойкости сплава Д16 по сравнению с известным штаммом Penicillium

chrysogenumB KlVlF-3068Д, что говорит о его более высокой коррозионной активности. 20

Из представленных результатов исследования видно, что предлагаемый штамм гриба в 4 раза увеличивает потерю массы металла по сравнению со штаммом-прото- 25 типом BKM-3068Д (табл.2) и способствует увеличению глубины коррозионных язв в 3 раза (табл.3), Контрольные образцы коррозии не подвергались.

Таким образом, депонировэнный штамм гриба Tritirachium roseum к Beyma

t BKMF-3187Д способен вызвать коррозию алюминиевого сплава Д16, выражающуюся в значительной потере массы металла и в увеличении грубины коррозионных язв по сравнению с известным штаммом гриба

Penicillium chrysogenum BKMF-3068Д, Использование предлагаемого штамма гриба в качестве тест-культуры повышает достоверность испытаний на грибостойкость алюминиевых медь-марганец содержащих сплавов, применяемых в условиях тропиков, 10

1747474

Таблица2

Влияние штаммов мицелиальных грибов на убыль массы образцов из сплава Д16 после 9 мес испытаний.

Таблица3

Влияние штаммов грибов на глубину коррозионных язв образцов из сплава Д16 после

9 мес испытаний.

Составитель Н.Родова

Редактор М.Кобылянская Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор H.Ñëoáîäÿíèê

Заказ 202 Тираж . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб,. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", r, Ужгород, ул.Гагарина. 101