Штамм бактерий мyсовастеriuм fоrтuiтuм, используемый для изготовления аллергена

Штамм бактерий мyсовастеriuм fоrтuiтuм, используемый для изготовления аллергена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: ветеринарная микробиология , серологическая диагностика туберкулеза , получение аллергена. Сущность изобретения: штамм Mycobacterlum fortuitym ГИСК М 35 засевают на жидкую синтетическую среду Линниковой-Могилевского. Выращивают в термостате при 37°С в течение 5-6 недель. Колбы с культуры стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 30 мин, фильтруют. Туберкулин осаждают трихлоруксусной кислоты, очищают ацетоном , этиловым спиртом и эфиром. Химический состав полученного аллергена, следующий , мае %: 75.0-80,0, полисахариды 9,0-11,0. 1 табл,

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАР СТВЕ ННЫ И КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ а -.,. .т("!! т! а

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4814470/13 (22) 16.04.90 (46) 15.07.92, Бюл. № 26 (71) Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РСФСР (72) А.Л,Лазовская, М.Л.Тихомирова, О.Ф.Рачкова, А.Л.Бондаренко и Д,Т,Леви (53) 576.8.097.2 (088.8) (56) J. General Microbiology, 1972, 73, р,55-70

Probl. Infec. and Parasit. Diseases, 1986, р.67-71.. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ MYCOBACTERIUM

FORTUITUM, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии, представляет собой новый штамм Mycobacterium

fortultum, характеризующийся активным ро стом на синтетической среде и туберкулиногенностью, и может быть использовано для изготовления аллергена, Целью изобретения является штамм

Mycobacterium fortuitum ГИСК ¹ 35, используемый для изготовления аллергена.

Штамм выделен из мокроты человека с микобактериозом легких и обладает всеми свойствами, характерными для рода

Mycobacterium.

Морфологические признаки. Палочки длиной 2,0-3,0 мкм, грамположительные, по

Цилю-Нильсену окрашиваются в красный цвет.

Культуральные признаки, На платной яичной среде образуют мелкие сухие, шероховатые колоний кремового цвета. В жидких питательных средах не вызывает помутне„„5Q„„1747482 А1 (я)ю С 12 N 1/20, А 61 К39/04 ал - рла а Ф )! ) $ 0 .т, (57) Использование. ветеринарная микробиология, серологическал диагностика туберкулеза, получение аллергена. Сущность изобретения; штамм Mycobacterium

fortultym ГИСК N 35 засевают на жидкую синтетическую среду Линниковой-Могилев-. ского. Выращивают в термостате при 37 С в течение 5-6 недель. Колбы с культуры стерилизуют в автоклаве при 120 С в течение

30 мин, фильтруют, Туберкулин осаждают трихлоруксусной кислоты, очищают ацетоном, этиловым спиртом и эфиром. Химический состав полученного аллергена, следующий, мас,ь. 75.0-80,0, полисахари-ды 9,0-11,0. 1 табл, ние, на поверхности образует толстую, морщинистую пленку кремового цвета, через

4-5 нед. роста окрашивает среду в коричневый цвет, На плотной яичной среде Левен- д штейна-Йенсена при 37 С вырастает за 3-5 дней; на картофельно-глицериновой среде

Павловского — за 5-6 дней, Размножается + при 22-40 С, не растет при 45 С. Оптимум 4 роста 36-37 С.; 4-ь

Ферментативные свойства. Расщепля- ОО ет с образованием кислоты инозит; не фер- 1 Я ментирует рамнозу, арабинозу, сорбит, ианнит, дулацит, утилиаируат нитрат и ),и малонат натрия. Обладает активными ферментами: уреазой, Р галактозидозой, нитратредуктозой. Растет на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена с добавлением 5g,-ного хлористого натрия или салицилата натрия.

Туберкулиногенные свойства. В процессе роста штамма на синтетической среде

Линниковой-Могилевского, начиная с трех1747482.3

:четырехнедельного возраста, происходит накопление в среде туберкулина (инситина).

Максимальное количество сенситина в ñðåде образуется через 5-6 нед. роста.

После заражения морских свинок бак- 5 териальной массой в количестве 1,0-1,5 мг внутримышечно животные остаются здоровыми в течение 3 мес., на вскрытии патолого-анатомическая картина микобактериоза отсутствует. " 10

Пример 1, Получение туберкулина.

Штаммы Mycobacterium fortuitum ГИСК М

35 засевают на жидкую синтетическую среду Линниковой-Могилевского (3 серии из 20 колб с 0,5 л среды), выращивают в термоста- 15 те при 37 С в течение 5-6 нед. Затем колбы с культурой стерилизуют в автоклаве при

120 С в течение 30 мин, фильтруют, высуши. вают и взвешивают. Выход сухой бактериальйой массы 0,720-0,980 r на i л среды. 20

Туберкулин (сенситин) осаждают трйхлоруксусной кислотой с последующей очисткой ацетоном, зтиловым- спиртом и эфиром.

Полученный туберкулин (сенситин) представляет собой порошок светло-серого цве- 25 та. Химический состав характеризуется содержанием, 7, белка 75,0-80,0 и полисахаридов 9,0-11,0.

Каждая из 3-х серий посевов имеет.продуктивность 0,890; 0,930 и 1,150 г на 1 л 30 среды соответственно.

Биологическая активность сенситина из штамма М fortuitum ГИСК М 35

Раэме кожных еак ий, мм, и и озе сенситина, мг

Примечание

0,000075

0,00015

0.0003

Некроз при дозе

0,0003 мг

Некроз при дозе

0,0003 мг

Некроз при дозе

0,0003 мг

Некроз при дозе

0,0003 мг

5 6

5 6

5«7 бх5 бнб

7хб

7х4

7х6 бхб

6«5

5кб

7«8

8х5 бкб

5«5

5«5

5«7

4" 5

5«б

5к7

6«7

ЗкЗ

5к5

8 х10

8«9

9«9

10 Ю

11 «12.

15«10

10«10

11х11

13 «12

10>9

10 9

11 х12

8к7

9«9

9«6

7«7

11«8

9«10

9 9

12 "11

11к12

5«5 бк6

4«4

Пример 2, Определение биологической активности, 24 светлокожих беспородных морских свинок весом 300-350 г сенсибилизируют внутрикожным введением 5,0 мг бактерийной массы M,fortuitum

ГИСК hb 35 в неполном адьюванте Фрейнда.

Через месяц после сенсибилизации морским свинкам внутрикожно вводят сенситин в дозе, мг: 0,000075; 0,00015; 0,0003 в

0,1 мл растворителя для туберкулина млекопита ющих.

Результаты представлены в таблице.

Одновременно 16 морских свинок сенсибилиэируют полным адьювантом Фрейнда с 5,0 мг БЦЖ. Через месяц на них ставят кожные пробы со стандартным туберкулином из ГИСК им.Л,А.Тарасевича в дозах 2

ТЕ,5ТЕ и10ТЕ.

Биологическую активность выявляют методом гетерологичных аналогий при сравнении известного стандартного с новым гетерологичным. Биологическая активность составляет 0,00003 мг в одной туберкулиновой единице.

Формула изобретения

Штамм бактерий Mycobacterium

fortuitum ГИСК М 35, используемый для изготовления аллергена.

14 «15

16 >17

18 «18

16<16 . 12т12

15«15

16 «12

12 «16

12 «16

15 «16

16 «14

14 «16

12 к12

12«13

13 «12

12 «12

12 «15

15к15

14 15

14>13

16<16

10«6

12 «10 б«7