Способ определения иммуноглобулина j @ е при аллергических заболеваниях

Способ определения иммуноглобулина j @ е при аллергических заболеваниях

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: изобретение относится к области медицины и может использоваться во всех учреждениях Здравоохранения Цель - ускорение способа Сущность иммуноферментный анализ, используемый при диагностике аллергических заболеваний, включает в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, нанесение на него сыворотки крови больного и антител, меченных перок: сидэзой хрена против иммуноглобулина Е. Новизна анапиза заключается в обработке планшета перед сенсибилизацией аллергеном 1%-ным раствором глютарового альдегида . Это ускоряет анализ с 4 ч до 40 мин. 2 табл.

СО!ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

s 6 01 К 33/535 (21) 4082490/14 (22) 12.11,90

Ál М" 2

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ l

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ll ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР .

К АВтОГСКОМЧ ТВИД!=тГ,г)ЬСтц 7 (46) 07.08,92. ол, 9 (71) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И,Мечникова (72) M.Â,Ãnèêìaí, Т,А.Прилепина и Н.Б.Сорочинская (56) !у!агЫ М! et. a!, Апп. Д!!его!, 1979, v, 42, К" 2, р. 231-236, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ И!У!МУНОГЛОБуЛИ!-И !9Е ПРИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Изобретение относится к медицине, а именно диагностике аллергических заболеваний методом иммуноферментного анализа, Известен способ диагностики аллергических заболеваний иммуноферментным анализом, включающий в себя сенсибилизацию полистирольного планшета аллергеном с последу ощим нанесением сыворотки крови больного и антител, меченных пероксидазой хрена против иммуноглобулина Е.

Недостатком этого способа является продолжительность анализа (4 ч без учета времени сенсибилизации планшета аллергеном), Цель изобретения — усксрение анализа.

Цель достигается тем, что в известном способе диагностики аллергических заболеваний иммуноферментным анализом, включающем в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, с последующим нанесением на него сыворотки крови больного, бычьего сыSU 1753421 А1 (57) Использование: изобретение относится к области медицины и может использоваться во всех учреждениях Здравоохранения, Цель — ускорение способа. Сущность: иммуноферментный анализ, используемый при диагностике аллергических заболеваний, включает в себя сенсибилизацию планшета аллергеном, нанесение на него сыворотки крови больного и антител, меченных пероксидазой хрена против иммуноглобулина Е. !

-!овизна анализа заключается в обрабогке планшета перед сенсибилизацией аллергеном 17, -ным раствором глютарового альдегида, Это ускоряет анализ с 4 ч до 40 мин.

2 табл. вороточного альбумина анти Е антител, меченных пероксидазой хрена. Согласно изобретению перед сенсибилизацией аплер?еном планшет обрабатывают 1%-ным раствором глютарового альдегида.

Влияние концентрации альдегида глютаровой кислоты на сни>кение времени ана- Л лиза представлено в табл, 1. (Й

Обработка планшета глютаральдегидом позволяет сократить время анализа с 4 ч до

40 мин (без учета сенсибилизации планшета д аллергеном), Способ осуществляется следующим образом.

Планшеты обрабатываются 1%-ным раствором глютарового альдегида в течение

18 ч при 4ОС. Затем в ячейки обработанных планшетов заливают 200 мкл раствора аплергена в концентрации 10-50 мкг/мл в 0,1

М карбонатном буфере, рН 9,6, Сенсибилизация планшета аллергеном проводится в течении 1 ч при 37ОC. После вытряхивания

175342.1!

1 редста ален ные р6эул ь тяты В табл, 2 свидетельству!От о том, что предлагаемый метод сни>кает Время анализа с 4 ч до 40 мин и повышает чувствительность метода по сравнени!о и известным способом в два и более раз, Таблица 1

Влил н!16 кО! 1центряции ЯльдеГида I г!ЕотарОе!ОЙ кислоты на ччвствительЕ!Ость метода ИФА, %, при Д в ллерген, Выделен II ыL1

ИЗ IhàTÅPII3ft3

2,0

0,2

0 4!

0,1

1,0

0.62.

ОЯ2

0,34

0,37

0,48

0,48

ЯЙЦО

Еда сбооная

0,0„2

ОЯ2

0,7

0,52

Таблица 2!! Аллерген, вь|деленный из мат613иал3

Извест! !!!е1 метое1 fl еД г38мt>ILh I8T0Q

Результаты ИФА, иоказат ли оптической плотност! в:ее!5! анализа 10 мин

Результать! ИФА, показатее!и Опти !Вской г!ло гt IOcTlh, в!38Е 1я 3 1 3л и за 4 ч

Д 0 Ь1 3 Е!.! Н Я Я П Ы Л Ь

МOflOKO

Шерсть кошек

Шерсть собаки

Перхоть лошади

Перо ПОДЕуш к!л

Х 5к

0,7

0,55

0,5

0,45

0,25

0,55

0,32

2 0

1,8

1,9

1,9 l,8

2,0

Составитель Г,Кр!окова

Техред У,Моргентял

Редактор Н,Химчук

Корректор Т,Палий

Заказ 27бб Тираж Подписное

ВНИИПИ Государстве!tHÎIo комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, МосК83, Е-35, РауЩская наб„4/5

Производственно-издательский комбин,.г "Патент",, Ужгород, ул.Гагарина, 101 раствора аллергена в планшет ряскапыва!От

200 мкл %-нь!м раствора бычьего сывороточного альбумина на 10 мин при 37 С, Посл8 ОднОкратнОГО Отм ы Ва н ил пля не! !8 га

0002 М ФСБ р! 74 с 005%- HI It t Тв 20 (ФСБ 5 ! В) li кажду!О лунку план встя Вносят в разВедение 1:100 илл 1;2 и инкубируют прЕл

37 С в течеещ 1g мй!1, а затем отмыва!От 5 а4 раз (ФСБ Тв) и добавлгпот соответственно анти или 3HT«k AT, меченные пероксидазой 10 хрена (по 200 мкл), инкубируют 10 мин при

37 С и отмывают 7 раз(ФСБ Тв) и Вносят 200 мкл с бстрат!!ой смеси, состоящей из 20 мкг ортофенилендиамин, растворенных в 20 мл 0,02!Л !1Итратно-фосфатном буфе- 15 ре, р1-! 4,6, Реакц!л!О останавлива!От чер83 5 10 мин, Учет р03К! Еии провод!!тся Н3 спектрофЕзтометре при Длине волнbl 492 il!4, Формула изобретения

Сг!Особ определения иммуноглобулина

1gE пдЕ1аллергических заболеваниях, вкл!o I3l0UIIh сенсибилизацию полистирольного план OJ ете! Ялл 6 ре 8ном с посл еду lо щи м Hа не с8н ием сыворотки к!30 В!л оол ьи ОГО и антител ме:ен н ых перо ксидазои хрена про! ив !9 Г, 0 т л и ч а >О щ и Й с я тем, ч! О, с цое!ь!О jcK0pctIvIJt способа; пео8Д сенсибилизЯЦией аллергеном планшет обрабатыва!от 1%ным раствором гл!огарового альдегида.