Смесь для электрофоретического разделения нуклеиновых кислот растений

Смесь для электрофоретического разделения нуклеиновых кислот растений

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: физиология, биохимия, молекулярно-биологические исследования и генно-инженерное конструирование принципиально новых организмов. Сущность изобретения: смесь для электрофореза включает трис-борат, борную кислоту, этилендиаминтетрацетат,- а также гиберелловую кислоту при следующем соотношении компонентов, мол.%: трис-борат 46,84-49,30: борная кислота 46,84-49,30; этилеидиаминтетрацетат 1,06-1,12; гибберелловая кислота 0,02-5,62. 1 табл.

союз сове1ских сОциАлистических

РЕСГГУБЛИК (5!)з С 12 N 15/01

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4761080/13 (22) 23.11,89 (46) 15.08.92. Бюл. ¹ 30 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт риса (72) Э, P. Авакян, Н. Е. Алешин, Н. Г. Туманьян и Е. П. Алешин (56) Маниатис Т.,Фрич Э. Сэмбрух,Дж, Молекулярное клонирование. M.: Мир, 1984, с.

480.

Изобретение относится к физиологйи, биохимии и может быть использовано в молекулярно-биохимических исследованиях и генноинженерном конструировании принципиально новых организмов.

Известна смесь для проведения электрофореза биологических полимеров на основе трис-ацетатного буфера.

Известна смесь для проведения электрофореза биологических полимеров,. содер. жащая сульфид, Указанные смеси мало пригодны для электрофореэа нуклеиновых кислот, что обусловлено их малой буферной емкостью, необходимостью присутствия в электрофо= ретических препаратах железа, которое в нуклеиновых, кислотах практически отсутствует.

Наиболее близкой к предлагаемой является смесь для проведения электрофореза, в качестве инкубационной смеси для элект„„5Ц„„1754778 А1 (54) СМЕСЬ ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ

КИСЛОТ РАСТЕНИЙ (57) Использование: физиология, биохимия, молекулярно-биологические исследования и генно-инженерное конструирование принципиально новых организмов. Сущность изобретения: смесь для электрофореза включает трис-борат, борную.кислоту, этилендиаминтетрацетат, а также гиберелловую кислоту при следующем соотношении компонентов, мол. : трис-борат

46,84-49,30: барная кислота 46,84-49,30; этилендиаминтетрацетат 1,06-1,12; гибберелловая кислота 0,02-5,62, 1 табл. рофореза используют.трис-боратный буфер (ТБ Б), рН 8,0 содержащий 0,089 М трис-6ората, 0,089 Мборной кислоты 0,,002 M этиле ндиа минтетра цетата (Э ДТА).

Недостатками данной среды являются малая разрешающая способность, не позволяющая разделить близкие по молекулярной массе фрагменты нуклеиновых кислот (НК) и неполная характеристика электрофоретических спектров НК, показывающая меньшее количество фрагментов, нежели есть объективно.

Целью изобретения является повышение разрешающей способности смеси.

Поставленная цель достигается тем, что смесь для электрофореза нуклеиновых кислот, включающая трис-борат, борную кислоту и этилендиаминтетрацетат, дополнительно содержит гибберелловую кислоту при следующем соотношении компонентов (в мольных $):

1754778 лить близкие по массе фрагменты, что в свою очередь, приводит к повышению полноты электрофоретического спектра, вместо двух фрагментов мы наблюдаем пять, 5 Пример 4. Операции выполняли, как описано в примере 1, В качестве инкубационной смеси для проведения электрофореэа использовали заявленную смесь, которая содержала компоненты (в мол,%); трис-бо10 рата 49,17, борной кислоты 49,176, ЗДТА

1,10, ГК 0,56.

Из приведенных в таблице данных видно, что при использовании заявленной смеси, содержащей ГК (в мол. ) 0,56, удается

15 существенно повысить разрешающую способность электрофореза и разделить близкие по массе фрагменты, что, в свою очередь, приводит к повышению полноты электрофоретического спектра, вместо двух

20 фрагментов мы наблюдаем шесть, Пример 5; Операции выполняли, как описано в примере 1. В качестве инкубационной смеси для проведения электрофореэа испольэовали заявленную смесь, которая

25 содержала компоненты (в мол. ): трис-бората 46,84, борной кислоты 46,84, ЭДТА

1,06, ГК 5,62, Результаты электрофореза приведены s таблице. Из приведенныхданных видно, что

30 при использовании заявленной смеси, содержащей ГК (в мол.%) 5,62, удается повысить разрешающую способность электрофореэа по сравнению с прототипом, однако она снижается в сравнении с концентрациями

35 ГК в средах (в мол. ) 0,02, 0,56.

Пример 6, Операции выполняли; как описано в примере 1. S качестве инкубационной смеси для проведения электрофореза использовали заявленную смесь, которая

40 содержала компоненты (в мольных ): трисбората 31,79, борной кислоты 31,79, ЭДТА 2

0,71, ГК 35,71, Из приведенных в таблице данных видно, что при использовании вышеуказанной

45 среды разрешающая способность остается на уровне варианта с концентрацией ГК (в . мол.%) 5,62.

Таким образом. предлагаемая смесь по50 ность электрофореза НК; следствием чего является увеличение полноты характеристики электрофоретического спектра НК, поТрис-борат 46,84-49,30

Борная кислота 46,84-49,30

Этилендиаминтетрацетат . 1,06-1,12

Гибберелловая кислота 0,02-5,62

Пример 1. Препарат дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из 12 дневных проростков риса вносили в лунку горизонтального агаризованного геля (концентрация агарозы 0,9%) и подвергали электрофорезу при параметрах электромагнитного поля (сила тока 192 МА, напряжение 84 мВ). Длительность процесса 5 ч.

В качестве инкубационной смеси во время электрофореза использовали смесьпрототип: водный трис-боратный буфер, рН 8,0, содержащий 0,089 M трис-бората, 0,089 М борной кислоты и 0,002 М этилдиаминтетрацетата (ЗДТА), что в молярных процентах составляет соответствие: 49,44%, 49,44%, 1,12%. . По окончании электрофореза гель, заключающий в себе разделенные фрагменты

ДНК прокращивали в растворе бромистого этидия, а затем просматривали на трансиллюминаторе. Результаты электрофореза; степень разделения фрагментов, их количество и качественные характеристики приведены в таблице, Как следует иэ пред-. ставленных в таблице данных при использовании смеси-прототипа удалось разделить низкомолекуля рные и высокомолекулярные фрагменты ДН К.

Пример 2. Операции выполняли, как описано в примере 1. В качестве инкубационной смеси для проведения электрофореза использовали заявленную смесь, которая содержала компоненты (в мол.%): трис-бората 49,44, борной кислоты 49,44, ЗДТА

1,11, гибберелловой кислоты (ГК) 0,01.

Как видно, из приведенных в таблице данных, при использовании заявленной смеси, содержащей гиббереловую кислоту

{ГК) (мол.%) 0,01, отличия от показателей смеси-прототипа отсутствуют.

Пример 3, Операции выполняли, как описано в примере 1. В качестве инкубационной смеси для проведения электрофореза использовали заявленную смесь, которая содержала компоненты (в мольных %): трисбората 49,44, борной кислоты 49,44, ЭДТА

1,12, ГК вЂ” 0,02.

Как видно из приведенных в таблице данных, при использовании заявленной 5

:смеси, содержащей указанное количество

ГК, удается существенно (на высшем уровне статистической достоверности) повысйть разрешающую способность злектрофореза по сравнению с средой-прототипом и раздезволяет повысить разрешающую способзволяет точно различать близкие по электрофоретическим характеристикам фрагменты, причем это разделение не требует дополнительных манипуляций с НК, Использование заявленной смеси позволяет повысить эффективность генно-инженерного процесса, направленного на трансформацию клеток живых организмов.

1754778 компонентов, 46,84 — 49,30

46,84 — 49,30

1,06-1,12

0,02 — 5,62

Составитель О. Лодатко

Редактор M. Бокарева Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Л. Лукач

Заказ 2869 Тираж, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиями при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Формула изобретения

Смесь для электрофоретического разделения нуклеиновык кислот растений, включающая трис-борат, борную кислоту и зтилендиаминтетрацетат, о т л и ч а ю щ а яс я тем, что, с целью повышения разрешающей способности смеси, она дополнительно содержит гибберелловую кислоту при следующем соотношении мол, $, Трис-борат

Борная кислота

5 Зтилендиамин° тетрацетат

Гибберелловая кислота