Способ определения кожно-резорбтивного действия химических веществ

Способ определения кожно-резорбтивного действия химических веществ

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к токсикологии и может быть использовано для определения резорбтивного действия химических веществ . Цель - повышение чувствительности способа. Сущность включается в том, что 0,2 мл сыворотки крови или мочи лабораторных животных, которым предварительно наносились на кожу растворы изучаемых веществ , вносят в кювету и помещают торцом над ФЭУ-4130 в светонепроницаемую камеру медицинского хемйлюминометра, термостатируют при 37° С. Затем включают установку, измеряют спонтанное свечение в течение 1-2 мин и добавляют к сыворотке крови 0,5%-ный раствор перекиси водорода . Вспышку сверхслабого свечения регистрируют автоматическим потенциометром в течение 3-5 мин. По интенсивности вспышки и изменению формы кривой свечения сыворотки крови и мочи опытных и контрольных животных определяют эффективность проникания, степень и характер токсического действия химического вещества . Предлагаемый способ является высокочувствительным и по интенсивности свечения дает возможность определить степень проникания и характер токсического действия химических веществ. о Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

6 I .

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4881478/14 (22) 20.11.90 (46) 15.08.92. Бюл. N. 30 (71) Харьковский медицинский институт (72) В.И.Жуков, В,М, Кривоносов, Л.А.Бондаренко, В.И.Мацкивский и О.В,Зайцева (56) Лазарев Н.В, и др. К методике сравнительного изучения проникновения органических веществ через кожу; —: Русский физиол. журн„1931, т. 14, кл. 2, с. 284-289. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЖНО-РЕЗОРБТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ . (57) Изобретение относится к токсикологии и может быть использовано для определения резорбтивного действия химических веществ. Цель — повышение чувствительности способа. Сущность заключается в том, что

0,2 мл сыворотки крови или мочи лабораторных животных, которым предварительно наИзобретение относится к медицине, в частности к токсикологии, и может быть ис пользовано для определения кожно-резорбтивного действия химических веществ.

Кожно-резорбтивное действие можно оценить не только по гибели животных, но и по изменению суммационно-порогового показателя и весу животных, При изучении всасывания через кожу различных амико- и натросоединений бензольного ряда можно регистрировал на кимографе дыхание и рефлекторное атдергивание конечности в ответ на раздражение индукционным током, Учет времени появления изменений дыхания и двигательных рв",, Я2,, 1755199 А1 носились на кожу растворы изучаемых веществ, вносят в кювету и помещают торцом над ФЭУ-4130 в светонепроницаемую камеру медицинского хемилвминометра, термостати руют и ри 37 С. Затем в кл юча ют установку, измеряют спонтанное свечение в течение 1-2 мин и добавляют к сыворотке крови 0,5 -ный раствор перекиси водорода. Вспышку сверхслабого свечения регистрируют автоматическим потенциометром в течение 3-5 мин. По интенсивности вспышки и изменению формы кривой свечения сыворотки крови и мочи опытных и контрольных животных определяют эффективность проникания, степень и характер токсического действия химического вещества. Предлагаемый способ является высокочувствительным и по интенсивности свечения дает возможность определить степень проникания и характер токсического действия химических веществ. акций, а также степень их выраженности позволяют сделать выводы о силе токсического действия различйых веществ при аппликации их на кожу.

Однако данный метод не является высокочувствительным, обнаруженные изменения проявляются при поступлении s организм большого количества вещества, что сказывается на точности определения пороговых и подпороговых доз.

При изучении всасывания через кожу ряда фосфорорганических веществ определяют угнетение активности холинэстераэы в крови и других тканях, 1755199

10

20 кожно-резорбтивное действие можно только тех веществ, которые обладают большой летучестью, Чувствительность данного метода зависит от степени резорбции веществ через кожу.

Известен также способ определения кожно-резорбтивного действия по клинической картине, вызываемой исследуемым веществом: смертельный исход, время . появления и степень выраженности призна: ков интоксикации, изменение процента прироста массы тела, коэффициейтов массы 5 внутренйих органов, физиологических, биохимических, морфологических тестов и др.

К недостаткам такого способа относятся трудремкость, большие материальные затраты и длительность постановкй" эксперимента; токсический эффект часто проявляется только при поступлейии больших количеств вещества через кожу, хотя известно, что микроколичества способны вызывать аллергизацию организма и отдаленные

Определение активности холинэстеразы не является интегральным тестом, он специфичен при воздействии фосфорорганических соединений, и это ограничивает его применение при изучении кожно-резорбтивного действия других веществ.

О кожно-резорбтивном действии вещества можно судить по нарастанию титра антител, реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) в модификации Л.А,Дуевой и Р.В.Беру. реакции Уанье с лизатом цельной крови(ЛЦК) в модификации Н.В,Русакова, методу Ерне в модификации

Н,Н.Êëåìnàðñêî6 и Н.В .Русакова, Несмотря на то, что указанные тесты позволяют определять проникновение микроколичества веществ в организм, они имеют и существенные недостатки; длительность проведения эксперимента составляет не. менее 3 недель (период наступления сенсибилизации и образование достаточного количества антител); трудоемкость и значительные материальные затраты, Метод можно использовать только в том случае, если вещества, проникая через кожу, способны вызывать сенсибилизацию организма, что исключает егб универсальность и ограничивает использование.

Известен метод определения кожно-резорбтивного эффекта химических соединений с помощью изучения газообмена через кожу.

Недостатком этого метода является то, что мелкие лабораторные животные не пригодны для этого эксперимента. Метод требует наличия камеры, которая предусматривает помещение в нее всего животного, кроме головы. Определять

45 последствия их влияния; отсутствует точность в определении порога кожно-резорбтивного действия.

О кожно-резорбтивном действии судят и по обнаружению веществ или продуктов их распада в выдыхаемом воздухе.

Существенные изменения или задержка веществ в организме делают этот метод мало пригодным для изучения кожно-резорбтивного действия, Наиболее близок к предлагаемому метод определения кожно-резорбтивного действия по количеству веществ или продуктов их распада, обнаруживаемых в биологической жидкости. Метод дает возможность onределить вещество или продукты его распада в крови и является достаточно точным и эффективным.

Основнйм недостатком известного метода является его низкая чувствительность

Метод не учитывает скорость выведения химических веществ из организма, их кумуляцию в отдельных органах и тканях, а также превращение этих веществ, Цель изобретения — повышение чувствительности определения эффекта проникания токсических веществ через кожу. B этих условиях определяется степень и характер токсического действия, состояние свободнорадиального перекисного окисления липидов, биомембран, антиоксидантной системы, процессов биоэнергетики, адаптации и дезадаптации, пороговые и подпороговые дозы, Поставленная цель достигается тем, что согласно известному способу определения эффекта проникания химических соединений через кожу, степень и характер токсического действия устанавливают путем определения максимума интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови и мочи, обработанных перекисью водорода (0,57-ный раствор), опытных и контрольных животных. По изменению интенсивности свечения крови опытных животных судят об эффекте проникания веществ через кожу.

Пример 1, Изучен эффект проникания через кожу группы веществ органического синтеза (простые полиэфиры марок Л-402, 503, 1502; 2502, 703); полиэтиленоксида Мм

400; полиоксипропилентриола М.м. 500; полиоксиэтиленоксипропилендиола М,м, 1500 и 2500; триглицидилового эфира полиоксипропилентриола М.м. 700 на 150 морских свинках методом регистрации сверхслабого свечения сыворотки крови после нанесения накожных аппликаций, Использовали 20,4ные растворы веществ, На протяжении эксперимента регистрировали как развитие

1755199

Составитель И.Мелемука

Техред М.Моргентал . Корректор H.Òóïèöà

Редактор А,Orap

Заказ 2890 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 местного, так и признаки общерезорбтив- сутки опыта. тогда как с помощью других ного эффектов, тестов эффект проникания удалось устаноОпытные животные по внешнему виду и вить только на 30-е сутки, поведению не отличались от контрольной Опыт подтверждает высокую чувствигруппы. На 10-е и 20-е сутки исследовали 5 тельность предлагаемого способа при изусодержание гемоглобина, эритроцитов, Н- чении кожно-резорбтивного действия групп, активность каталаэы, пероксидазы, химическихвеществ.Поинтенсивностисвецерулоплазмина, холинэстеразы; щелочной чения можно судить о степени проникания . фосфатазы, аланиновой и аспарагиновой и характере токсического действия вещесттрансаминаз в крови (наиболее чувстви- 10 ва. тельные тесты при воздействии простых полиэфиров). Изменения поэтимтестам были Ф о р мул а изобретения обнаружены только на 30-е сутки опыта в сравнении с контролем.: . -: . -. Способ определения кожно-резорбтивВ ходе опыта исследовали интенсив- 15 ного действия химических веществ на органость сверхслабого свечения сыворотки. - низм животного путем нанесения крови опытных животных, которая была по- исследуемых веществ на кожу с последуювышена по сравнению с контролем уже на щим исследованием биологической жидко10-е, 20-е. 30-е сутки опыта (555 +10 опыт, сти, о т л и ч à ю шийся тем, что. с целью

490+20 контроль -10-е сутки; 989+16 кон- 20 повышения чувствительности способа, сытроль —. 20-е сутки; 1720 5 опыт, 485 23 воротку крови и мочу животного обрабатыконтроль — 30-е сутки). Отмечено увеличе- вают 0.5 -ным раствором перекиси ьие интенсивности сверхслабого свечения водорода, измеряют интенсивность сверхсыворотки крови в зависимости от дозы и . слабого свечения сыворотки крови и мочи времени эффекта. Кожно-резорбтивное 25 до и после обработки и по изменению индействие простых полиэфиров с помощью тенсивности сверхслабого свечения опреспособа регистрации интенсивности сверх - деляют кожно-резорбтивное действие слабого свечения было обнаружено на 10-е химических веществ.