Способ получения ( @ i)-кислой фосфатазы предстательной железы человека

Способ получения ( @ i)-кислой фосфатазы предстательной железы человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области биохимии и медицины и может быть использовано для получения меченной 1251-кислой фосфатазы предстательной железы человека . Цель изобретения - увеличение выхода целевого продукта и повышение его специфичности . Кислую фосфатазу предстательной железы человека рарионодируют с меченным 1251- в присутствии хлорамина Т и в 0,05-0,25 м боротном буфере рН 7,4-9,0 с последующей очисткой гель-фильтрацией. Выход увеличивается по сравнению с прототипом в 2-3,5 раза с одновременным увеличением специфичности связывания с субстратом.

СОКЗЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С: (21) 4858355/14 (22) 08.08.90 (46) 07.10.92, Бюл, N 37 (71) Институт биоорганической химии АН

БССР и Институт фотобиологии АН БССР (72) М.В.Макаренко, A.È.Ùåðáaíü, Л.И.Власенок и В,Н.Лапко (56) В.Choe, МЯ,Roge Methods incancer research. 1982, ч, 19, р. 199-232. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ (1251)-КИСЛОЙ

ФОСФАТАЗЫ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА

Изобретение относится к области биохимии и медицины, а именно к усовершенствованному способу получения 1-кислой фосфатазы предстательной железы человека (I-КФП), которая может быть использована в качестве компонента радиодиагностического набора для определения уровня кислой фосфатазы предстательной железы человека при диагностике рака предстательной железы, для оценки эффективности противоопухолевой терапии, Известен способ получения меченного (1-КФР (1). Субстрат при этом радиоиодируют в присутствии хлорамина Т, используя а Iв0,,05 M ацетате натрия рН 6,0. Маркер получают с низким радиохимическим выходом (около 28%). Известен способ получения (1)-КФП методом конъюгации (2) с использованием I-реактива Болтона-Хан125 тера, II-сукцинимидил- -(4-окси-, 5- Iд 125 йодофенил)-пропионата, получают маркер

<»> . Ж,»> 1 767434 А 1 (5 )5 G 01 и 33/534//А 61 К 35/48 (57) Изобретение относится к области биохимии и медицины и может быть использовано для получения меченной 1-кислой фосфатазы предстательной железы человека. Цель изобретения — увеличение выхода целевого продукта и повышение его специфичности, Кислую фосфатазу предстательной железы человека рарионодируют с меченным I- в присутствии хлорамина Т

125 и в 0,05 — 0,25 м боротном буфере рН 7,4-9,0 с последующей очисткой гель-фильтрацией, Выход увеличивается по сравнению с прототипом в 2 — 3,5 раза с одновременным увеличением специфичности связывания с субстратом. с низкой удельной активностью порядка

6 мкКИ/мкг, Наиболее близким к заявляемому является способ (прототип), который заключается в том, что кислую фосфатазу предстательной железы человека радиоиодируют 11а 1 в присутствии хлорамина

Т. Радиоиодирование проводят в 0,5 M фосфатном буфере рН 7,4. Реакцию останавливают прибавлением метабисульфата натрия, растворенного также в фосфатном буфере. Реакционную смесь наносят на колонку с сефадексом и элюиочют с фосфатным буфером, Полученная (1)-КФП имела специфичность около 85%, Радиохимический выход составлял 10 — 22%, Хотя авторы используют оптимальный для хлораминового метода буфер и рН (фосфатный буфер, рН 7,4) и большие количества окислителя (хлорамин Т, 20 мкг), существенным недостатком способа является низкий

1767434

Формула изобретения

Способ получения (I)-кислой фосфа1 5 тазы предстательной железы человека путем радиоиодирования в присутствии хлорамина Т в буферном растворе, хроматографии с последующей элюцией целевого продукта буферным раствором, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и повышения его специфичности, радиоиодирование проводят в 0,05-0,25 М боратном буферном растворе рН 7,4-9,0, Составитель М. Макаренко

Техред М,Моргентал Корректор Н, Милюкова

Редактор С. Кулакова

Заказ 3546 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 радиохимический выход и невысокая специфичность маркера на дату получения.

Целью изобретения является увеличение радиохимического выхода и специфичность целевого продукта. 5

Способ осуществляют следующим образом, Радиоиадирование КФП с 11а проводят в присутствии хлорамина Т в 0050,25 М Гзратном буфере при рН 7,4-9,0. 10

Реакцию останавливают прибавлением ме-, табисульфита натрий растворенного в фосфатном буфере. Реакционную смесь наносят на колонку с сефадексом и элюируют фосфатным буфером. 15

Пример 1. Б ампулу с 10 мкл 0,2 М боратного буфера, рН 8, вносят 3 мкл (1 мКи)

11а 1, 10 мкл (10 мкг) хлорамина Т в 0,2 М боратном буфере, рН 8, и 20 мкл (40 мкг)

КФП. Реакционную смесь перемешивают 20

30 сек., реакцию останавливают прибавлением 10. мкл (10 мкг) метабисульфита натрия. В ампулу вносят 10 мкл (2 мг) иодистого калия, 200 мкг 0,1 M фосфатного буфера, содержащего 0,15 M хлористого 25 натрия, 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) и 0,02 азида натрия. Реакционную смесь наносят на колонку (1 х 40 см) с сф сефадексом С вЂ” 100 и элюируют 0,1 М фосфатным буфером, содержащим 0,15 M 30 хлористого натрия, 0,1% БСА и 0,02 азида натрия. Скорость элюции 6 мл/ч, фракции по 1 мл, Радиохимический выход составил

77,8 . Специфичность (" I)-КФП в пределах 89,1 — 96,3 . 35

Пример 2. Процесс проводят по и римеру 1, испол ьзуя 0,05 M боратн ы и буфер рН 7,4. Выход 1 елевого продукта 57,6%.

Специфичность (I)-КФП составляла 85,7—

12

92 . 40

Пример 3. Процесс проводят по примеру 1, используя 0,25 М боратный буфер рН 8. Выход целевого продукта 78,3, Специфичность маркера 88,3-95o .

Пример 4. Процесс проводят по примеру 1, используя 0,1 М боратный буфер, рН 9. Выход целевого продукта 46, Специфичность (I)-КПФ в пределах 87,5 — 93,2%.

Заявляемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта в 2 — 3,5 раза по сравнению с прототипом. Необходимо отметить, что положительный эффект достигается за счет предложенных авторами изменений в классическом хлораминовом методе, где согласно литературным данным оптимальным для радиоиодирования является фосфатный буфер, рН 7,4. Найденные нами условия для мечения КФП позволили не только увеличить радиохимический выход при уменьшении в два раза количества хлорамина Т по сравнению с прототипом, но и получить высокоиммунореактивный маркер. Связывание с антителами целевого продукта 85,7 — 96,3, что выше, чем у прототипа.

Разработанный способ увеличивает выход маркера, делает технологию получения

125 (5I)-КФП более экономной, улучшает качество маркера, используемого как компонент набора для радиоиммунологического микроанализа.