Ди(триэтиламмониевая)соль аденилил(2 @ -5 @ )-аденилил(2 @ - 5 @ )аденозин-тирозин метилового эфира в качестве промежуточного соединения в синтезе 125j-меченого 2 @ ,5 @ - олигоаденилата

Ди(триэтиламмониевая)соль аденилил(2 @ -5 @ )-аденилил(2 @ - 5 @ )аденозин-тирозин метилового эфира в качестве промежуточного соединения в синтезе 125j-меченого 2 @ ,5 @ - олигоаденилата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: в качестве полупродукта в синтезе 125 1-меченого 2|,5|-олигоаденилата. Сущность изобретения: продукт: ди(триэтиламмониевая) соль адекилил I ТI L

СО!ОЗ СОВ-to!!aV

СОЦИМИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУЬЛ!ЛК (st)s С 07 Н 21/00

ГОсУЛРРстБе Hb!ë YUMUITET

ПО ИЗОБРЕТЕН!ИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР т ! КИ0630М

;!Ц т.!; Т!=.";Il:л;. И; "

ОПИСЯМ- !ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

K АВТОРСКОМУ СВОД:TEJlbCTBV (21) 4845720/04 (22) 02.07.90 (46) 15,10,,,, .о, 38 (71) Институт Сиоорганической химли АН

БССР (72) Е. fi.Квас ок, T,KI.Кулак, С.М,Шуляковская, JI.À,Михайлопуло и М.В.Макаренко (56, Caillа I-IÄ Lr!urånce L„Le Borgne De

Каоы".I С„Роох О., Marti l. MonoclonaI апс!пес!!е:; to 2-5А oligonucieotides: their use

in I.adIoIrnnÿnoassay о, pliosphoI /lated and бе р !1озрпо гу!аа".е:! 2-5А //Вас! !о!!т! !т!о поаз зау

and Related Proc. Med. Proc. !и?, Symp.

%сппа 21-25 .Iune, 1982. VIenna,— 1982,— P.

1о

Carteг !А,С,, Ivleyerhoif M.Е, Instability of

8осс!пу! Езтег Linkages in О -Monosuccinyl

Cucl; с АМР-Protcln Соп)ща ез а< Neutral pH

// I !гп nur!ol, Мет!оодз.-1985,— V. 81, ¹ 2.—

Р, 2- .".--247.

Изобретение относится к области органической хим!1и, конкретно, к новому произ-! водному тримера 2, 5 -олигоадениловой кислоты общей формулы (I): но-(о)л "о-но о гак, о,лде ,о,„ оно о о= -о„о л е

М о о о cîoñH, сн) сн сн L хн сн сн -(/-он нн „ где Ado=, ) н N ! которое является полупродуктом в синтезе

125 !-!.1еченого лиганда, используемого пои радиоиммунологическом определении биоло„„. Ж„„1768611 А1 (54)ДИ(ТРИЭТИЛАММОНИЕВАЯ) СОЛЬ АДЕНИЛИЛ (2 -5 )-АДЕНИЛИЛ (2-5}-АДЕНОЗИН-ТИРОЗИН МЕТИЛОВОГО ЭФИРА В

КАЧЕСТВЕ ПРОМЕЖУТОЧНОГО СОЕДИНЕНИЯ В СИНТЕЗЕ 1251-МЕЧЕНОГО 2,5ОЛИГОАДЕНИЛАТА (57) Использование: в качестве полупродукта в синтезе 125 1-меченого 2,5-олигоаденила11 та. Сущность изобретения: продукт: ди(триэтиламмониевая) соль аденилил (2 -5)-аденилил (2 -5 ) аденозин-тирозин мети-! ! лового эфира БФ C43H67N18018P2. выход

35,67ь; Л !оох.260 нм. Реагент 1: аденилил (25 аден илил (2 -5 )-2,3 -0-(2-ка рбоксиэтил)этиI I I I лиденаденозина; реагент 2:метиловый эфир тирозина. Условия реакции: в среде диметилформамида s присутствии бутилхлорформиата. 1 табл.

Ъю гически активных 2,5 -олигоаденилатов в различных биологических объектах.

Соединением, близким по строению к описываемому, которое используют для 3 получения 125 I-меченого лиганда на основе 0 метилового эфира тирозина, является аде- QQ нилил(2 -5)аденозин-2, 3 -ди-0-сукцинилти- 0 розин метиловый эфир (1) формулы (II):

° вюй но но о

l о-о-о л, co 3 3h- 1, у соосн3 но" снгсн нн- -снгснгс-о о-с-сн сн с

«о,>а

Недостатком этого соединения является наличие в нем лабильной сложноэфирной

1768611

i связи. Как было показано для 2 -О-сукцината аденозин-3,5 -циклофосфата и его коньюгатов с белком, гидрог1из сложноэфирной связи в водных растворах происходит даже при

-20 C(2). 5

Целью изобретения является ди(триэтиламмониевая) соль аденилил (2 -5 )аденилил(2 -5 )аденозин-тирозин метилового эфира — полупродукт в синтезе 125 1-ме= ченого 2,5 -олигоаденилата, более стабиль- 10 ный по сравнению с описанным в литературе.

Поставленная цель достигается соединением (I), которое получают путем конденсации аденилил(2 -5 )аденилил(2 -5 )-2,3 15

-0-(2-карбоксиэтил)этилиденаденозина (lll) с метиловым эфиром тирозина (IV) в диметилформамиде в присутствии бутилхлорформиата с последующим выделением соединения (I) известными методами. 20 но о""

HG О Аде

Ч нн,нс, НО О д„

Ай, с„соос„0 P 0-,,р Ч 2!04$ с, 0 P"Оъ ОЧ л нсе, 25

ОР-Оъ Ч -5

О О

00 В"1 н,с сн, .ре. н,с сн, 1 (l!, 2, 2 Н, С11,-Я-ОН сн, !

0 = C-!4H- сн

СОО саосн, 30

Сущность изобретения поясняется сле дующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1, Ди(триэтиламмониевая)

/ р .р соль аденилил(2-5)аденилил(2-5)аденозин- 35 тироэи!4 метилового эфира.

К раствору, охлажденному до Π— +4 С, 6,3 мг(4,7 мкмоль) аденилил(2-5)аденилил(2

-5 )-2,3 -О-(2-карбоксиэтил)этилиденаденозина три (триэтиламмониевой) соли (III) ь 40 смеси 300 мкл диметилформамида и 8,3 мкл (6,06 мг, 60 мкмоль) триэтиламина добавляют 7,7 мкл (8,18 мг, 60 мкмоль) бутилхлорформиата, Смесь перемешивают при комнатной температуре 40 минут и добавля- 45 ют к ней суспензию, полученную при смешивании 6,96 мг (30 мкмоль) гидрохлорида метилового эфира тирозина, 300 мкл диметилформамида и 4,15 мкл (Ç,ОЗ мг, 30 мкмоль) триэтиламина. Смесь выдерживают 50 при комнатной температуре 15 часов, добавляют к ней 0,1 мл насыщенного при 0 С раствора аммиака в метаноле и упаривают, Остаток хроматографируют на колонке (50 смз) с ДЕАЕ-целлюлозой 23 SS в Н СОз-фор- 55 ме, Колонку элюируют раствором триэтиламмонийбикарбоната в градиенте концентрации от 0,01 до 0,3 М. Фракции, содержащие продукт, собирают и лиофилизуют. Получают 2,5 мг (1,6 мкмоль), 35,67, соединения (I), YcD-спектр в воде, г,„,-: 260 нм. 1Н-5(MP-спектр в 020, (д ), м.д. от ТНС, 8,17; 8,13; 8,11; 7,91; 7,83; 7,75 с (по 1Н, Н-2, Н-8!, 7,01 д (2Н, орта-Н, Ph0I-(. J=9,6 Гц), 6,68 д(2Н, мега-Н, PhOH, J=-9.6 Гц); б, (Од(11-(, Н-1, J l 2 =4Я Гц); 5,94д(1Н, Н-1, Ji 2 =3,0 Гц1; 5,84 д (1 Н, Н-l, J 1 -2 =-1,2 Гц); 5,05 м (1 Н, Н-2 ); 5,01 м (2(-(, 2Н-2 ); 3,38 с (ЗН, ОСНз); 3,:I1 т (1H, -NH-СН-СО-); 2,46 т (21-(, -СН2СН2-СО-NH-);

2,13 т (2Н, -СН2СН2СОМ(-(-); 1,38 с (ЗН, СНзССН2-CH2-), Соединение (I) получают с хорошим выходом в индивидуальном виде и используют

125 в качестве полупродукта в синтезе I-меченого лиганда (V) для радиоиммунологического определения 2,5 -олигоаденилатов в биологических обьектах.

НО С" 0- .е а

НÎ=P-О- рой

О

О О

Ньс CHl гн рн

Нn,,о, ". " -(HQ 0

0". е

О=(--0, У

НО 0

А4р

О о О,ОЧ

1-(О 0 .р

Н С CHе

С.— О

0Н

НО-(ррНес- Н вЂ” CCCCH, О

NH :О": 4,0- - I CGCCH, Обработкой соединения ((} раствором

NB l в натрийфосфатном буфере в присутствии хлорамина Т с последующим добавлением раствора натрия бисульфита и

125 колоночной хроматографией получают ме1еный лиганд (\/).

Использование соединения (I) в синтезе

I-меченого лиганда (V) иллюстрируется конкретным примеоом синтеза последнего. (Пример 2. "I-меченый аденилил (2

/ t

-5) аденилил(2 -5)аденозинтирозин метиловый эфир динатриевая соль (IV), В ампулу, содержащую 10 мкл 0 1 М натрий фосфатного буфера (НФБ) pk 7,5, добавляют 5 мкл раствора, содержащего 1,5 мкг (1Я нмоль) аденилил(2 -5 )аденилил(2 -5I аденозин-тирозин метилового эфира(!) в 0,1

IVI НФБ б мкл раствора, содержащего 100 (25

МБк Na I в Н Ф Б, и 10 мкл раствора, содержащего 20 мкг хлорамина Т в 0,1 M НФБ.

Смесь перемешивают при комнатной температуре 15 минут, добавляют к ней 10 мкл раствора, содержащего 20 мкг натрия метабисульфита в 0,1 M НФБ, и хроматографируют на колонке (1х25 см) с TS(c:-гелем

НИ-40. Продукты эл1оирулот раствором 0,1

М НФБ, содержащим 0,17; БСА, со скоростью 6 мл/час. Фракции, содержащие производное (V), объединяют и

17686 лога а,.г.енил(1л,? -5, =-(еiI-:.c:- i! 6 :,и (.(и алеHo3(1H, С(б 1азitto jj,10С- Г.о!1 3 j о(И вЂ”,аq,<е

:.1cноф0сфать! адеl 03 .(,- Сг,.-ii o а!(алога)

f и а((етально! о псо:1зво itl - г-,. ал н(ь;:(л(» —.51

ЛЛ ОЗИН ТИ ПОЗИ Н (1BT; I!; Ot PО го 3. :;03 (B CЛ"чае то!лмера1;(,". Bi зли" 100"=.л!;Г.ь Резg льтаTt а!! :Iij,<зл Г ., t !BBäo«ьt B 36л(л!tе !,ooT Ho !i j;"-. t;. t:tp;<0,", и<. нанте в ре, кk t,. 0 -ti0! t с(Bcl, " ti; — t";!Pc ; .х ед IHt1Liox п 0(1 260 ,-(Л гп ВР Я Р.(.=-.::u ii й",.(ИРГ Ва((ИЯ ПО. —.ЕДЕНО (-; --аол(лце ! ахи(-. 060330»1 и За;-1(, - Х ПНBt-t!13а B! Iil (О В Г(с(»Р«! ОЧРПР ; ПП<ч\, "О ОГ!UP(1 -jl tn С i

95-98% и удельной радиоактивность 3 1960

Ки/ммоль. Связываньte м"÷BHîãî ji!1IBчла с („ антителами, сг(ецифичнь ли к 2 .5-олигоаден(илату (ill), составля",о 9."; 3, CpBDíèTBëьный а! (ализ устой ilfBGcти соединения I и указанного ана ога; ".лoвиях реакции йодирова (и i был проведе;! методом препаративнои Totlêocëoé: ой хрома-ограф(ли на пласти» ках силуфола Контроль пр"вОдился путе(1 определеl(ия t

I n tz ходного соединения совместно с его - I-производным, которые в ус Iов!1ях хроматографии liP. Оазделяг(ис -, 1,0 ле пров смотра пласт!«ки .; УФ-OBете (25- 1 нм(: 3 не вырезались зоны, соог; отсTBóio!I;",е;,-, -., еленным cÎединениям, кî1îp -.,е -.. «Oëpо алиcü

0,05,4 растворо"л на грийдодец! .-Сул

Полученные растворы спектпо "o; О»;е-;.".;;овались HB спектрофото.

В реакцион((у!о с(лось,

ОПТИЧЕСКИХ О((И Н И ц ((1";.1Е n!:. r3 (:. Г) (1 2 . 0 (! аденилил(2 -5 1эден(1л(1л!2 — -, ;, е:! 3 .; —;.— розин метилоРого зфира .Или, .,. (:-Зь ного производного аналог». Сjt,:PTi! .-,0 .;

15 минут после на i ii à рва(

О!i нов смеси Отб(1p ".

-.îавнечи 0 с - i-:B (огом, (т1 г(р ., ".;-: ", = б p ". Е и И я . .! !«той: ГИ Ча, ..::Ct1 ..n —.;:Я! СОЛЬ аЛЕНИ<, jl f iI; .. —;g ь1 (; i, t!: —. ., — 5 i-j лен -.з(it IT(iпозин (л(ет!,Лоt on(3 -, jt«f »а,ЬС((Л,,;I.j

nit

1 . /

f ! 1

1 (!

25 .,и

Г! а" Е ТР О(10(И ч то НОГО СОЕДИНtBH!jß В .И: тозе I !-B IBI .Oã-.: n» .5 -о-,!. UOBäåH(1BBTB.

2- ..-,;, -0 г

+ а я в л Р " t - и o H tì 0

Контролиру- Аналог е(1ые соеди-, Бремя оВВ <ц ли в (ин.

Ht,Iß 5 1t0 1I5

Б де 1я зев к((((и в мин.

3 3

1 !

0 7 рА 20 кт реg (лсН и о <; нение 7,9

8.6

COC-!BE .:ТЕПЬ !,j а3ЕРОСЕЕВа

ГoxpPд !it. РЛОргoHTBл КÎopol

Редактор

Заказ 3620 (ира < Подписное

Б Н И И П И ГО суд а р с т B B!i H o i o o !1 и те T B ri !1 о 6 p e t B j . L I B " 1,и oT,", 3!: T t . B I.; I t p !1 Г К1-1 Т С С С Р

113035, Ii".Осква, »К-35, Рау" с;<ая (-.- б„:- -/5

Производственно-издатсльский ко;лбинат "ПBie .т, г. Ужгород. ул,Гагар(, а, ",01