Способ очистки аллергена

Способ очистки аллергена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для 2 диагностики и лечения поллинозов и касается способа очистки аллергена. Целью изобретения является повышение степени очистки целевого продукта от пигментов. Сущность изобретения заключается в отделении примесей от пыльцы, ее обезжиривании эфиром, отмывании водой, центрифугировании и стерилизующей фильтрации надосадочной жидкости. Положительный эффект заключается а практически полном исчезновении цветности целевого продукта. 3 табл.

СО!ОЗ СО8ЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/36

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4864281/14

{22) 06.09.90 (46) 30.10.92. Бюл. N. 40 (71) Научно-производственное объединение

"Аллерген" (72) Б.Н..Райкис и Н.А. Иллютович

{56)Регламент производства М 67-87 на ал. лергены пыльцевые. (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ АЛЛЕРГЕНА (57) Использование; изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для диагностики и лечения поллинозов.

Известен способ получения пыльцевых аллергенов, включающий механическую очистку пыльцы от примесей, обезжиривание в эфире с последующим экстрагированием. центрифугированием и стерилизующей фильтрацией.

Чистота препарата, получаемого при использовании этого способа, зависит от степени удаления примесей из пыльцы и ее обезжиривания.

Однако данный способ не обеспечивает очистку целевого продукта от пигментов (цветность 0,75 — 1,3 ед. экстинции). Это приводит к появлению ложноположительных реакций и снижает специфичность иммунотерапевтического действия.

Цель изобретения — повышение степени очистки целевого продукта от пигментов. диагностики и лечения поллинозов и касается способа очистки аллергена; Целью изобретения является повышение степени очистки целевого продукта от пигментов.

Сущность изобретения заключается в отделении примесей от пыльцы, ее обезжиривании эфиром, отмывании водой, центрифугировании и стерилизующей фильтрации надосадочной жидкости. Положительный эффект заключается а практически полном исчезновении цветности целевого продукта. 3 табл.

Указанная цель достигается тем, что в предлагаемом способе пыльцевые зерна после обеэжириваиия отмывают водой.

Существенным отличием предлагаемого способа получения от известного является то, что предлагаемое изобретение почти полностью исключает цветность в готовом препарате (0,02-0.05 ед. экст.) за счет отмывки пыльцевых зерен после обезжиривания водой до визуального отсутствия в ней пигментов, Пример. 10 г пыльцы (например, амбрОзии) очищенной от механических примесей, помещают в емкость, обезжиривают этиловым эфиром; высушивают при комнатной температуре, затем заливают дистиллированной водой в соотношении г/мл 1:100 и отмывают пыльцу до визуального отсутствия пигментов в промывной жидкости. Затем пыльцу вновь высушивают и из расчета на 3 r пыльцы добавляют 100 мл раствора

Эванса-Кокка, и экстрагируют в течение 72 часов на магнитной мешалке при 4-60С..1771749

Таблица 1

Требования фармакопейной статьи

Показатель, единица измерения известном и е лагаемом

Белковый азот мгlмл

Цветность ед. экст, 0,1 от светло-желтого до коричневого стерилен специфичен не токсичен

0,1

0,75 — 1,3

0,1

0,02 — 0,05

Стерильность

Специфичность

Токсичность стерилен специфичен не токсичен стерилен специфичен не токсичен

Полученную взвесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через бумажный фильтр, а затем через стерилизующие мембраны, стандартизи- 5 руют до О, t 00 0,020 мгlмл азота белка по

Кьельдалю, разливают во флаконы и укупоривают.

Контроль полученного аллергена осуществляют на стерильность, токсичность, 10 специфичность и цветцость, Токсичность препарату проверяют в опытах на белых мышах и свинках. Стерильность определяют посевом на питательную среду, Специфическую активность аллерге- 15 на проверяют в кожных тестах на больных сенсибилизированных пыльцой поллииозов. Цветность определяют визуально.

При этом получают прозрачный, бесцветный препарат (цветность — 0,03 ед. экс- 20 тинции), содержащий 0,1 мг/мл азота белка по Кьen ьдэл ю.

Сравнительная характеристика препаратов,полученных по известному и предлагаемому способам,представлена втабл, 1-3. 25 (Средние данные 10 серий).

Из табл.1 видно, что предложенный способ получения пыльцевых аллергенов позволяет почти полностью удалить пигменты, Об этом свидетельствует, низкая сте- 30 пень цветности (0,02 — 0,05 ед. экстинции) у очищенных аллергенов по сравнению с цветностыо (0,75 — 1,3 ед, экстинции) у неочищенных. 8 то же время очистка препарата не изменяет показателей специфичности, 35 токсичности, стерильности, содержания белкового азота, которые. соответствуют. требованиям фармакопеи., Как видно из табл.2, при кожном тестировании.(прик-тест) аллергенами, полученными по известному и предлагаемому способам, активность реакций це отличается.

Как видно из табл.3, уровень содержания антител у животных, иммунизированных аллергеном, приготовленным по предлагаемому способу на уровне, а в некоторых случаях и выше, чем кроликов иммунизированных коммерческим аллергенам.

Предлагаемый способ, по сравнению с известным, Обеспечивает следующие преимущества: дает возможность получить стандартный препарат очищенный от пигментов (цветность 0,0?-0,05 ед, экстинций, lro в конечном итоге повышает эффективность диагностики: достоверность анализа, уменьшается показатель ложных реакций и лечение поллинозов; более специфическая стимуляция иммунной системы).

В настоящее время в НПО "Аллерген" нарабатываются серил аллергена для оформления изменения к регламенту производ.ства на ныльцевые аллергены.

Формула изобретения

Способ очистки аллергена, включаю-. щий механическое отделение примесей от пыльцы. ее обезжиривание эфиром, центрифугирование, стерилизующую фильтрацию надосадочной жидкости, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения степени очистки целевого продукта от пигментов, пыльцу после обезжиривания отмывают водой.

Аллерген (амброзийный} полученный по способ:

1771749

Таблица 2

Сравнительная характеристика кожных реакций аллергенов

Рез льтаты кожных еак ийалле генов амб оэийных и иготовленныхпо способам: известном и е лагаемом средний диаметр волактивность (в крестах)

ы я,мм средний диаметр волактивность (в крестах)

ы я,мм

Таблица 3

Сравнительная характеристика иммуногенности аллергенов, выявленной в РНГА по титру антител у иммунизированных животных {кроликов) Составитель Б.Райкис

Техред М.Моргентал

Редактор

Корректор Л.Филь

Заказ 3794 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

7,5

7,5

8,5

6,0

7,0

10.0

7.0

7,0

9,0

4,5

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

+++

8,0

7,0

8,0

6,5

7.0

12,0

12,0

7,5

9,0

5.0

+++

+++

+++

+++

+++

++++

++++

+++

+++