Способ определения иммуногенной активности вакцины против сибирской язвы крупного рогатого скота

Способ определения иммуногенной активности вакцины против сибирской язвы крупного рогатого скота

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: ветеринария, оценка средств профилактики, сибирская язва. Сущность изобретения: до и после применения испытуемых средств специфической профилактики сибирской язвы животным перорально с кормом вводят инкапсулированную суспензию спор вирулентного штамма возбудителя сибирской язвы в дозе (0.75 ,90 Ю9) спор. Суспензию спор инкапсулируют в желатиновую капсулу и закладывают в кусок хлеба размером (5x5)-

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (з()з А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4806467/13 (22) 07.02,90 (46) 23,01,93, Бюл. М 3 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт . . (72) Н.С, Садыков, P.H. Ниэамов, Д.Ш. Ахмеров, Л.С. Саленко и Г.И. Романов (56) Гост 15991-71, Гост 15991-86, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ КРУПНОГО

РОГАТОГО СКОТА

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам оценки эффективности средств специфической профилактики сибирской язвы с.х,животных.

Известен способ определения иммуногенной активности противосибиреязвенной вакцины СТИ путем контрольного подкожного заражения споровой культурой вирулентного штамма возбудителя сибирской язвы иммунизированных морских свинок (ГОСТ 15991-86) и овец (ГОСТ 15991-71) и подсчетом количества выживших животных.

Однако известный способ, выполненный на лабораторных животных и овцах и эмпирически экстраполированный на крупный рогатый скот, не позволяет достоверно оценить эффективность средств иммунопрофилактики сибирской язвы у крупных животных, поскольку при контрольном подкожном заражении даже неиммунизиpoBBHHoI крупного рогатого скота возбуди Ы,, 1789218 А1 (57) Использование: ветеринария, оценка средств профилактики, сибирская язва, Сущность изобретения: до и после применения испытуемых средств специфической профилактики сибирской язвы животным перорально с кормом вводят инкапсулированную суспензию спор вирулентного штамма возбудителя сибирской язвы в дозе (0,75 109)-(0,90 109) спор, Суспензию спор инкапсулируют в желатиновую капсулу и закладывают в кусок хлеба размером (5х5)(1 Ox10) см. 2 табл. теля сибирской язвы, получить летательный эффект не удается.

Учитывая, что смертельное заражение животных возбудителем сибирской язвы в естественных условиях (на пастбище) происходит через корм (перорально), испытывают пероральный метод контрольного заражения крупного рогатого скота, который бы обеспечивал 100 (,-ный летальный эффект у интактных (неиммунных к сибирской язве) животных. В случае разработки метода используют его для оценки эффективности испытуемых сибиреязвенных вакцин на крупном рогатом скоте.

Целью изобретения является разработка надежного и достоверного способа определения иммуногенной активности вакцины против сибирской язвы на крупном рогатом скоте, Для этого осуществляют пероральное введение животным инкапсулированной суспензии спор вирулентного штамма воэ1789218 будителя сибирской язвы с кормом до и после применения вакцины против сибирской язвы и эффект оценивают по критерию П3 (процент защиты), Способ оценки эффективности испытуемой противосибиреязвенной вакцины на крупном рогатом скоте состоит иэ следующих этапов; .

1. Иммунизация животных испытуемыми вакцинами против сибирской язвы.

2. Пероральное заражение контрольных (неиммунизированных) и иммунизированных животных возбудителем сибирской яз. вы в дозах, обеспечивающих 1007(,-ый летальный эффект у неиммунизированных животных.

3. Оценка эффективности испытуемой вакцины по критерию ПЗ (процент защиты);

На 1-ом этапе проводят отбор животных одинакового возраста (молодняк от 3 до 6 месяцев) или взрослых животных (12 месяцев и старше). формируют из них соответствующие группы (по 6 голов в каждой).

Одну группу животных подкожно иммуниэируют испытуемой противосибиреяэвенной вакциной (инструкция по применению препарата), а другую группу жи вбтн ых не иммуниэи руют, она служит контролем. )Кивотных обеих групп содержат в одинаковых условиях.

2-ой этап. По истечении соответствующего поствакцинального периода (через 15, 21, 30 дней, 2, 3, 8, 9, 12 месяцев после иммунизации в зависимости от условий и задачи исследования) животных подвергают контрольному пероральному заражению вирулентным штаммом возбудителя сибирской язвы. Пероральный метод заражения включает следующие подэтапы: . а) приготовление инфекционного материала; б) определение концентрации и жизнеспособных спор; в) инкапсулирование инфекционного материала и введение его животным через рот (перорально),:

Для приготовления инфекционного материала споровую культуру вирулентного референс-штамма возбудителя сибирской язвы "Ч-7" высевают на обычные питательные среды (МПА и MllE), выращивают 18 — 24 ч при 36,5 — 37,5 С. Выросшие культуры идентифицируют согласно общепринятым в микробиологии сибирской язвы методам (морфология, подвижность, капсулообразование, спорообразование).

Для спорообразования культуру, выращенную в термостате при 36,5 — 37,5 С в течение 18-24 ч, в последующем инкубируют

4 до полного спорообразования в термостате при 32 — ЗЗ С.

По истечении 5 — 6 дней выдерживания в термостате при 32-33 С исходная культура обычно превращается в споровую (95-98) спор), которая является пригодной для дальнейшего использования. Стейень спорообразования и концентрацию живых спор в культуре определяют согласно ГОСТУ

15991-86, используя оптический стандарт мутности ГИСК им, Л.А, Тарасевича ¹ 10, Инкапсулирование заражающего материала проводят следующим образом.

Исходную суспензию спор разводят

15 стерильным физиологическим раствором до концентрации 0,5х10 спор/мл. Суспензию набирают в стерильные пипетки объемом

1-2см и вносятеепо0,5см в быстрорастз з воримые желатиновые капсулы, употребля20 емые в медицинской практике для внутреннего применения лекарственных препаратов, выпускаемых отечественной промышленностью. Капсулы представляют собой желатиновые цилиндры емкостью

25 0 6-0,9 см, диаметром 7 — 10 мм и высотой

22 — 30 мм.

Для предотвращения преждевременного растворения капсул в ротовой полости животного и вторичного рассеивания спор

30 возбудителя сибирской язвы капсулы заключают в куски хлеба размером (5x5)— (10х10) см.

Куски хлеба, содержащие инкапсулированные споры в дозе 0,25х10 спор каждый, 35 скармливают животным по 3 куска на голову. Суммарная доза спор при этом составляет 0,75х10 спор на одну голову, что является оптимальной, вызывающей 100 ный летальный исход неиммунизированных

40 (контрольных) животных. Скармливание животным хлеба с инкапсулированным споровым материалом производят до приема ими кормов и воды.

На 3-ем этапе проводят оценку зффек45 тивности испытуемой противосибиреязвенной вакцины по критерию ПЗ (процент защиты), Для. этой цели используют три группы крупного рогатого скота одинакового возраста и породы, Одну группу живо50 тных (6 голов) иммуниэируют стандартной . протвосибиреяэвенной вакциной СТИ,.вторую (6 голов) — испытуемой вакциной (ВГНКИ, ВНИИВВИМ и т.д.) согласно инструкциям по применению биопрепаратов, третью группу животных (3 головы) не иммунизируют и она служит контролем.

Через определенный промежуток времени (15. 21, 30 дней, 2, 3, 6, 9, 12 месяцев после иммунизации) животных всех групп (вакционированных и невакцинированных) 17892 l8 " . 6 заражают перорально референтным штаммом возбудителя сибирской язвы в абсолютно смертельной дозе (ЛД1оо=0,75х10 спор), За всеми животнйми ведут наблюдение в течение всего периода, изучая у них клинику, измеряя температуру тела, пульс, дыхание. Учитывают количество павших и выживших в каждой группе животных. .Эффективность испытуемой вакцины оценивают по критерию ПЗ (процент защиты), используя формулу

Ки-Кп х100

Ки где ПЗ вЂ” процент защиты, %;, К вЂ” количества выживших животных, гол.;

Ки — количество использованных в опытах животных, гол.;

100- коэффициент перевода в проценты.

Так, если в группе животных, иммунизираванйых противосибиреязвенной вакциной СТИ, выжили 5 голов из 6, использованных в опыте, то подставляя. соответствующие зна. чения в приведенную формулу, получаем ПЗ

= 83,4%.

Пример 1. Определяют абсолютно. смертельные дозы возбудителя сибирской язвы при пероральном введении его неиммунизированнаму против сибирской язвы крупному рогатому скоту. Для этой цели суспенэию спор возбудителя разливают в желатиновые капсулы по 0,10; 0,15; 0,20: 0,25;

0,30; 0,45; 0,50 х 10 спор в 1 смз, капсулы заключают в куски хлеба и скармливают жйватным по одному, два и три куска на голову.

За животными ведут наблюдение в течение

7 суток, при этом учитывают количество павших животных от каждой дозы, Факт гибели животных от сибирской язвы определяют путем приготовления мазков крови иэ надреза уха павших животнйх и микроскопирования их в световом и люминесцентном микроскопе.. Результаты опытов по определению оптимальной дозы перорального заражения крупного рогатого скота спорами возбудителя сибирской язвы представлены в табл. 1.

Из материалов таблицы видно, что пероральное введение спор возбудителя в адин прием даже в больших дозах (0,90-1,80 млрд спор ) не дает 100% - ro летального эффекта, в то время как введение. дозы

0,75х109 спор в три приема (в 3-х кусках) обеспечивает 100%-ый летальный эффект.

Таким образом, абсолютно смертельная доза спор возбудителя сибирской язвы для крупного рогатого скота при пероральном

: заражении составляет (0,75-0,90)х10 спор на животное.

Пример 2. Проводят оценку эффективности однократной подкожной иммуни5 эации крупного рогатого скота стандартной противосибиреязвенной вакциной СТИ путем перорального заражения животных через 15, 21, 30 дней или через 2, 3, 6, 9, 12 месяцев после иммунизации спорами воз10 будителя сибирской язвы в абсолютно смертельной дозе ЛД оо=0,75х10 спор.

Животных иммунизируют в одинаковом возрасте.(3-6 месяцев или 6-12 месяцев) в соответствии с существующими инструкциями по

15 применению биопрепарата, Группу контрольных животных не иммуниэируют, но содержат их (иммунизированных и неиммуниэираванных) в идентичнь1х условиях, обеспечивающих одинаковое кормление, 20 поение, уход и т.д, Результаты проверки эффективности однократной подкожной иммунизации 3-4месячного молодняка крупного рогатого скота противосибиреязвенной вакциной

25 СТИ, перорально зараженного через 15 дней, 7 и 13 месяцев после вакцийации, представлены в табл. 2.

Из табл; 2 видно, что стандартная"противосибиреязвенная вакцина СТИ, введен30 ная крупному рогатому скоту подкожно в возрасте 3 — 4 месяцев однократно, создает напряженный иммунитет через l5 дней, через 6 — 7 месяцев у однократно привитых вакциной СТИ молодняка иммунитет

35 ослабляется (ПЗ не более 67%), у взрослых животных, однократно иммунизированных вакциной СТИ, вырабатывается достаточно высокий противосибиреязвенный иммунитет (П 3=100%).

40 Пример 3, Проводят сравнительную оценку эффективности предлагаемой противосибиреяэвенной (штаммы ВГНКИ, ВНИИВВиМ-55 и т.д.) и стандартной вакцины СТИ. Опыты проводят также, как и в

45 примере 2, но лишь с той разницей, что в опыт берут три группы крупного рогатого скота: контрольная (невакцинированная), :иммунизированная стандартной вакциной

СТИ и вакцинированная испытуемой проти50 восибиреязвенной вакциной (ВГНКИ, ВНИИВВиМ-55). Иммунизацию животных одинакового возраста проводят в соответствии с инструкциями по применейию препаратов, кормление и уход — в идентичных

55 условиях, пероральнае заражение животных осуществляют по примеру 2.

По результатам опыта учитывают ПЗ и определяют преимущества или недостатки предлагаемой противосибиреяэвенной вакцины. Опыты показывают, чта однократное

1789218

Формула изобретения

Способ определения иммуногенной активности вакцины против сибирской язвы крупного рогатого скота, включающий иммунизацию животных исследуемой вакци ной с последующим: заражением споровой культурой возбудителя и оценкой результа. тов по количеству выживших животных, о т л ича ю щи и с ятем, что, с целью повыше30 ния достоверности способа, иммунизируют крупный рогатый скот, а заражение осуществляют перооально споровой культурой в дозе 0,75 ° 10 — 0,90 10 спор, заключен35 ной в быстрорастворимую желатиновую капсулу, заложенную в кусок хлеба размером 5x5 — 10х10 см.

Та бли ца 1

I применение вакцины СТИ обеспечивает на- 2. Предлагаемый способ позволяет раэдежный противосибиреязвенный иммуни- работать рациональную схему применения тет у взрослого крупного рогатого скота в противосибиреязвенной вакцинй СТИ на течение 13"месяцев "после вакцинации что . крупном рогатом скоте, которая в настоясвидетельствует о нецелесообразности дву- 5 щее время применяется двукратно беэ учета кратной иммуйизации взрослого поголовья" возраста; что предполагает перерасходтрууказанного вида животных против сибир- . довых и материальных средств. ской язвы. В отличие от взрослых животных 3. Применение дифференциальной схемолодняк крупного рогатого скота, йммуни-" мы иммунизации вакциной СТЙ с учетом зированный однократно. вакциной СТИ,. не 10 результатов контрольного перорального заприобретает достаточного напряженного ражения иммунизированных животных в иммунитета против сибирской язвы (ПЗ че-- раэлйчные йериоды после применения вакрез 7 месяцев после применения вакцины цины позволит сэкономить значительное, СТИ не превышает 67/,), что предполагает количество трудовых и материальных за-. проведение повторной вакцинации (ревак- 15 трат, если учесть, что в настоящее время в цинации) молодняка в этом возрасте.: стране согласно существующей схеме подТехнико-экономические преимущества вергаются двукратной вакцинации СТИ депредлагаемого способа посравнению с ripo- сятки миллионов голов крупного рогатого тотипом заключаются в следующем:; .скота, значительную часть которых состав-.

1. Применение перорального контроль- 20 ляет взрослое поголовье. Переход на одноного заражения крупного рогатого скота в кратную иммунизацию вакциной СТИ предлагаемом способе обеспечивает.100 ф- взрослого крупного рогатого скота, обосноую гибель контрольных (невакцинирован- ванный результатами испытания предлаганых) животных, что позволяет достоверно, а емого способа, позволит сэкономить 50$, . не экстраполяционно; как в известном crio- 25 выпускаемой отечественной биопромышсобе, оценить эффективность испытуемой ленностью дорогостоящей противосибирепротивосибиреяэвенной вакцины,, язвенной вакцины СТИ, 1789218

Таблица 2

Составитель Ю.Кононенко

ТехРед M.ÌîÐãåíòàë . КоРРектоР В Петраш

Редактор ь

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 312 Тираж - Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5