Способ получения сыворотки для лечения и профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно свиней, пушных зверей и кроликов

Способ получения сыворотки для лечения и профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно свиней, пушных зверей и кроликов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: сыворотка против различных форм пастереллезов сельскохозяйственных животных, способ профилактики лечения пастереллезов сельскохозяйственных животных. Сущность изобретения в качестве штаммов П.мультоцида сероварианта В берут наиболее иммуногенный штамм № 656, дополнительно вводят штаммы N 8683 сероварианта А и Т80 сероварианта D, культивируют в течение 5-6 ч при шуттелировании, проводят концентрацию путем центрифугирования, инактивацию проводят 0,02% формальдегидом при 44,5- 45,5°С в течение 4-6 ч и полученным анти-. геном животным-продуцентам проводят 8-10 внутримышечных инъекций с интервалом 2-3 дня, при этом общий объем .вводимого антигена составляет 85-95 мл. Полученную сыворотку вводят животным с целью профилактики подкожно в следующих дозах (в мл): взрослым свиньям 30-40, поросятам 10-30, кроликам 5-10, пушным зверям 5-10. С лечебной целью сыворотку вводят животным в двойной дозе внутримышечно или внутривенно в начальной стадии заболевания при остром течении. С/1 С ю кэ ч

сОюз сОВетских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

is»s А 61 К 9/102

° ° ееу

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОгугСТВО СССР (ГbCflATEMT СССР) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ ЬГТВУ (2 1) 4866683/13 (22) 19.07.90 (46) 07.02.93. Бюл, N. 5 (71) Всесоюзн ы и научно-исследо вател ьский институт экспериментальной ветеринарии

I им.Я,Р.Коваленко, Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт бйологической промышленности и Всесою ный государственный научно-контрольный институт ветпрепаратов (7 ) Э.А.Шегидевич, А.И.)Один, В.Б.Федот в, Г.А.Фоменко, Г.Ф.Коломнина, Н.И.Антонова, Н.Б.Бушуева, С.П.Рогожин, Е M.Ëóêüÿíîâà, Р.В.Душук, Е.К.Шапошникова, Т,В.Мазур и Л.И.Нецепляева

I (56) Ветеринарные препараты; Справочник, п д ред. Д.Ф.Осидзе, M. Колос, 1981, с.248—

2 1, (5 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ

ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ПАСТ РЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

М ИВОТНЫХ, ПРЕИМУЩЕСТВЕННО СВИ ЕЙ, ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ И КРОЛИКОВ

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к п лучению сыворотки против пастереллеза сельскохозяйственных животных, Цель работы — повышение активности целевого продукта, сокращение длительносТИ и упрощение способа его получения.

Поставленная цель достигается благодаря тому, что из штаммов Pasteurella

njultoclda сероварианта В используют наиб глее иммуногенныи штамм ВГНКИ ¹ ббб—

ДЕП, дополнительно вводят штаммы

„„Я3 ÄÄ 1792708 А1 (57) Использование; сыворотка против различных форм пастереллезов сельскохозяйственных животных, способ профилактики лечения пастереллезов сельскохозяйственных животных. Сущность изобретения в качестве штаммов П.мультоцида сероварианта В берут наиболее иммуногенный штамм ¹ 656, дополнительно вводят штаммы N.. 8683 сероварианта А и Т80 сероварианта 0; культивируют в течение 5 — 6 ч при шуттелировании, проводят концентрацию путем центрифугирования, инактивацию проводят 0,02% формальдегидом при 44,545,5 С в течение 4 — 6 ч и полученным антигеном животным-продуцентам проводят

8 — 10 внутримышечных иньекций с интерва;IoM 2-3 дня, при этом общий обьем,вводимого антигена составляет 85 — 95 мл, Полученную сыворотку вводят жйвотным с целью профилактики подкожно в следую щих дозах (в мл): взрослым свиньям 30 — 40, поросятам 10 — 30, кроликам 5 — 10, пушным зверям 5 — 10. С лечебной целью сыворотку вводят животным в двойной дозе внутримышечно или внутривенно в начальной стадии заболевания при остром течении.

РазтеигеИа multocida ВГНКИ N. 8683 — ДЕП сероварианта А и ВГНКИ № Т-80-ДЕП сероварианта О, культивирование проводят в течение 5 — 6 ч при шуттелировании, клетки концентрируют центрифугированием при факторе разделения 25009 s течение 3941 мин, полученный осадок ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 20 млрд. кл,/мл, инактивацию проводят

0,02% формальдегидом при 44,5 — 45,5 С в течение 4-6 ч, а гипериммунизацию осуществляют 8 — 10 кратными внутримышечными

1792708 !

Получение сыворотки. описанное в примерах 2-13 осуществляли аналогично примеру.1. Параметры и результаты опытов приведены в таблице.

Сыворотка. полученная предложенным способом опробирована с положительным результатом в производственных условиях, Предложенный способ в отличии от известного обладает следующими преимуществами: сыворотка, полученная данным способом, обладает широким спектром действия и эффективна при различных формах пастереллезов, т.к, антиген, используемый

"5 для ее получения содержит штаммы различных серовариантов (А, В, 0); концентрирование с помощью центрифугирования позволяет максимально сконцентрировать антиген, полностью очистить его от культуральной жидкости, оказывающей черезмерную неспецифичес кую нагрузку на иммунную систему продуцентов, а также исключить реактогенные алюмокалиевые квасцы; способ более прост в исполнении и .

25 менее трудоемок, т.,: а) культивируют 3 штамма в течение

5 — 6ч; . б) сокращается количество инъекций и, следовательно. длительность цикла гипер- . иммунизации;

e) в 7-8 раз снижается объем вводимого антигена;способ позволяет избежать аллергических реакций и пэстереллоносительства у продуцентов, т.к. используется только

35 инактивированный антиген; способ инактивации позволяет сохранить полноценность

50

Формула изобретения

Способ получения сыворотки для ле- 55 чения и профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно свиней, пушных зверей и кроликов, включающий отбор штэммов

Pasteurella multocida сероварианта В, cot инъекциями с интервалом 2-3 дня при общем объеме вводимого антигена 85 — 95 мл.

Полученную сыворотку вводят животным с целью профилактики подкожно в следующих дозах: взрослым свиньям 3040 мл, поросятам 10 — 30 мл, кроликам 5--10 мл, пушным зверям 5 — 10 мл, С лечебной целью сыворотку вводят животным в двойной дозе внутримышечно или внутривенно в начальной стадии заболевания при остром лечении, В связи с тем, что активность сыворотки повышается, профилактические и лечебные дозы не изменяются по сравнению со способом-прототипом, при том, что спектр ее действия значительно расширяется.

Пример 1. Для приготовления антигена используют штамм: N 656 серовариан. та В, М 8683 сероварианта А и Т-80 сероварианта D. Данные штэммы культивируют в течение 5,5 часов на бульоне Хоттингера при шуттелировании. После окончания культивирования определяют концентрацию микробных тел фотометрически и чистоту выращенной культуры, Выращенные культуры пастерелл концентрируют путем центрифугирования при факторе разделения 2500g 40 мин. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 20 млн. м.т, в 1 мл. К концентрированным культурам добавляют формальдегид до концентрации 0,02% и инактивируют при

45 С в течение 5 часов. Полученным антигеном проводят 9 внутримышечных инъекций с интервалом 2 дня, при этом общий объем вводимого антигена составляет 90 мл. Для . лучшего рассасывания антиген вводят подогретым до температуры 37 С в 3 — 5 мест.

Через 8 дней у волов берут кровь для определения титра в РНГА. Целевой продукт выделяют из крови известным способом.

Результаты.

Титр полученной сыворотки в РНГА; на антиген сероварианта А — 1:2048;

-"-  — l:1024;

-"- D — . 1:1024.

Длительность цикла гипериммунизации

28 дней. антигена, т.к.: а) инактивации подвергается 5-6-часовая культура, полноценная в антигенном отношении; б) режим инактивации щадящий, не вызывающий деструктивных изменений клеток бактерий.

Сыворотка, полученная предложенным способом, найдет применение в хозяйствах, неблагополучных по пастереллезу, позволит лечить и профилактировать различные формы пастереллезов сельскохозяйственных культур. вместное культивирование отобранных штаммов в жидкой питательной среде, концентрирование клеток, их инактивацию, гипериммунизацию продуцентов полученным энтигеном в возрастающих дозах с последующим крововзятием и выделением целевого продукта. отл ича ю щ и йс я тем, что, 1 792700 с целью повышения активности целевого продукта. сокращения длительности и упроЩения способа, из штаммов Pastleurella

multoclda сероварианта В используют штамм Pasteurella multoclda В ГН КИ

N 656-ДЕП, дополнительно отбирают культуры штаммов Pasteurella multocida ВГНКИ

М 8683-ДЕП сероварианта А и Pasteurella

rrj!ultoclda ВГНКИ N T80-ДЕП сероварианта

D, культивирование проводят в течение 5-6 ч при шуттелировании, клетки концентрируРезультаты опытов по получению сыворотки против пастереллезов сельскохозяйственных животных

Способ кон- Способ Кол-во Способ центриров. инактивации инъекций введения, а/г!

Пример

В ремя культивир. ч

Состав антигенэ

9 Внутримышечно

5,5

Центрифуги" О, 02В ФА, рование 5 ч,45 С

Серовар. А, В, D

1 ! !

5,0

«!!

«I!»!!»!!

»!!

6,0

«!!»

«! !»

«I!

«!!»

«!!

«! !»

«I!»

«!!»

4,0

7 «!!» 5,5

О Серовар. А, В

9!!»

«I!»

«!!

9 Серовар. B,Ð

Подкожно

С использ.

»!!

«!!

«!!» алюмокалиевых квасцов

0,5 ч,60 С

«I!»

Внутри" иышечно

«!!»

Ц!ентри@угировайие

«I!»

12

10 «!!»

4 инъек.

0,5 ч,60 С, Ь инъекц. живой а/г!!

0,02ь ОЛ,5 ч, 45 ю

С использ. 4 — 30 мин,60 алюмокалиев. 10 - живой квасцов

13 ! .

Подкожно

14 Серовар. В

24,36

14 Подкожно

1 0 Серовар. А, В, D !

1

11

I ют центрифугированием при факторе разделения 2500g в течение 39 — 41 мин, полученный осадок ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 20

5 млрд,кл/мл, инактивацию проводят 0,02 ным формальдегидом при 44.5 — 45,5 С в течение 4 — 6 ч, а гипериммунизацию осуществляют 8-10-кратными внутримышечными инъекциями в интервалом 2 — 3 дня

10 при общем объеме вводимого антигена 85—

95 мл.

1792708

Продолжение таблицы

Пример

Примечания

1:1024 1 .1024 28-35

90 . 1:2048

1:2048 1:1024 1:1024

1:2048 I:1024 1:1024

28 -35

28-35

«11

1: 1024 1: 1024

1: 1024 1: 1024

1: 2048

1:204Ь

Ь

1: 2048 1: 1024 1: 1024

1: 512 1: 512

1:1024 1; 4

22"28

1: 1024

1: 2048

90

1:1024 1: 1024

1: 512 1: 512

28-35

1:4

1: 1024

«I l

28-35 Увел"ся трудоемк (большие объемы),плох. самочувствие продуцентов

270

90 1: 512 1: 256 1: 256 28-35 1: 1024 1: 1024 1: 512 30-40 Плох. самочувст. пастереллоносит. ч5

13 90 1: 512 1: 512 1: 512 28-35

1:512 1:4

14 750- 1:4

770

50" 51

Составитель В.Свиридова

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор И.Муска

Редактор Л.Волкова

Заказ 469 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издател ьский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Обций объем, aIã

Титр в РПГА Длительность на А на В на D д ни

25-32

30-40

28-35

Уменьшается выход а/г (к-во микробных тел) Неэффективна при легочн. формах и-зов