Способ повышения иммуногенности антигенов

Способ повышения иммуногенности антигенов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4889577/14 (22) 10.12.90 (46) 07.02,93. Бюл. N. 5 (71) Одесский научно-исследовательский институт вирусологии и эпидемиологии им.

И.И,Мечникова (72) А.И.Пономаренко. И.M.Áåçáðîæ и

Г,С.Скрипченко (73) А,И.Пономаренко (56) Авторское свидетельство СССР

N 1552421, кл. G 01 N 33/53, 13,07.88.

Изобретение относится к медицине и биологии, может быть использовано при получении специфических высокоактивных

-антигенов различной природы и предназначено как для научно-практической работы, так и для создания высокоэффективных биологических препаратов специфического действия.

Известны способы повышения иммуногенности антигенов с использованием адъювантов, иммуностимуляторов путем встраивания антигенов в состав липосом.

Однако использование адъювантов и иммуностимуляторов требует специальных технологий, приводит к дополнительной антигенной нагрузке на организм, при их применении возможны побочные реакции.

Получение липосомальных препаратов нуждается в выделении очищенных антигенных белков и не может быть использовано для повышения специфической активности живых вакцин.

Известен способ стимуляции иммунологического статуса животных и иммунного отÄÄ5QÄÄ 1794250 А3 (54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ИММУНОГЕННОСТИ АНТИГЕНОВ (57) Использование: в области медицины и иммунологии. Поставленная цель достигается тем, что для иммунизации используют антиген, обработанный электрическим током. Сущность изобретения: антиген обрабатывают постоянным электрическим током в специальной камере, разделенной полупроницаемой мембраной, причем антиген помещают в катодную часть камеры.

Изобретение позволяет ускорить получение антигена. 2 табл, вета на антигены, по которому для стимуляции иммунного ответа на антигены животным вводят одновременно с этими антигенами штамм Entегоvirus suis-3 УНИВИ, двукратно. с интервалом 12-21 день в дозе 104-10 ТЦДБо íà 1 кг массы тела.

Недостатком указанн6го способа является двукратное введение в организм помимо нужного антигена культуральной жидкости, содержащей дополнительный вирус. При этом требуются расходы на получение культурального вируса. на повториую иммунизацйю, удлиняются сроки иммунизации, нельзя предсказать возможные последствия генетического взаимодействия вводимого вируса с другими вирусами, цир, кулирующими среди животных.

Цель изобретения — ускоренное повышение иммуногенности антигенов и получение целевого продукта с повышенной специфической активностью.

Поставленная цель достигается путем обработки растворов антигенов электрическим током. Для этого в камеру, разделен1794250

Формул з и зоб р.ете н и я 50 целью ускорения способа, антиген, помеСпособповышейияиммуногенностиан- щенный в катодную часть камеры, отдетигенов. включающий иммунизацию живо- ленную полупроницаемой мембраной, тных предварительно обработанным обрабатывают постоянным электрическим антигеном, отличающийся тем, что, с током.

55 ную на две части полупроницаемой мембраной; помещают раствор антигена, через который пропускают постоянный электрический ток в определенном режиме.

Изучение иммуностимулирующих свойств антигена проводят путем иммунизации животных и последующей оценки иммуногенности по изменению титров антител в сыворотках крови. Антигенную активность антигена оценивают методом иммунофер- "0 ментного анализа (ИФА) в реакциях со стандартными диагностическими сыворотками.

В качестве антигенов используют антиген, не обработанный электрическим током, и антиген, полученный после электрохимиче- "5 ской обработки из катодной части камеры.

По сравнению с прототипом предлагаемый способ повышения иммуногенности антигенов имеет следующие преимущества."

1) повышение специфической активности 20 . антигена не сопровождается введением в

- организм дополнительных, балластных белков (антигенов); 2) сохраняются биологические свойства антигена; 3) повышение специфической активности антигена осуще- 25 сталя ется в короткие сроки (5-30 мин).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Аллантоисную жидкость, содержащую вирус гриппа А/Ленинг- .30 рад/92/17/89 (Н1 Ю), титр ГА 1:64, в количестве 9 мл помещают в катодную часть камеры, разделенной полупроницаемой мембраной, в анодную часть помещают 9 мл раствора: нормальной аллзнтоисной жидко- 35 сти куриных эмбрионов. В течение 5 мин пропускают постоянный электрический ток силой 15 мА. напряжением 6 В. В дальнейшей работе используют рзстворантигенаиз катодной части камеры. Две группы живо- 4О тных (белые мыши) иммунизируют под эфирным наркозом ао 0,3 мл внутрибрюшинно: вируссодержащей жидкостью, не прошедшей и прошедшей обработку элект45 рическим током. Сыворотки крови животных исследовали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) . на наличие специфических антител спустя 5 недель от момента иммунизации. РТГА ставили по общепринятой методике в плексиглассовых пластинах с 1 0/0 взвесью куриных эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия. Данные РТГА (табл.1) свидетельствуют о том, что. иммуногенная активность вируса гриппа А/Ленинград/92/17/89, обработанного электрическим током, в 2,35 раза превышает иммуногенную активность необработанного вируса.

Пример 2, Стандартный токсоплазменный антиген из.ИФА-тест-системы в рабочем разведении разделяют на две части: одну часть оставляют в качестве контроля, а вторую часть подвергают обработке постоянным электрическим током, 10 мл раствора антигена помещают в катодную часть камеры, разделенной полупроницаемой мембраной. в анодную часть помещают 10 мл фосфатного буфера. В течение 10 мин пропускают постоянный электрический ток силой 2мА напряжением 2 В. Раствор из катодной части камеры отбирают, выдерживают 3 ч при 4 С и используют в дальнейшей работе. Одну половину планшеты для ИФА сенсибилизируют необработанным раствором токсоплазменного антигенз, другую половину — обработанным раствором антигена. После инкубации в течение 16 ч при 4ОС и отмывки, в лунки планшета вносят контрольные сыворотки: положительную и отрицательную. Учет результатов проводят на аппарате "Мультискан" МСС/340 Р. Результаты опыта (табл.2) свидетельствуют о том, что специфическая активность оЬработзнного Электрическим током токсоплазменного антигенз по выявлению специфических антител достоверно превышает соответству.ющую активность необработанного антигена в 1.5-2 раза.

1794250

Таблица1 уровень антигемагглютининов в сыворотках крови животных после иммунизации вирусом гриппа А/Ленинград/92/17/89, прошедшим и не прошедшим обработку электрическим током

Препарат для иммунизации

Титры антигемагглютининов в сыворотках крови животных через 5 недель после иммунизации (обратные величины

Гемагглютинирующая активность в препарате

1. Исходный вирус гриппа

2. Вирус, обработаннь(й электрическим током

44,17 10,14

103,76 +. 16,63

1:64

1:64

Кратность прироста титра антител остове ность отличия

2,35

<0,01

Таблица2

Результаты ИФА при использовании в тест-системе обработанного и необработанного электрическим током токсоплазменных антигенов

Оптическая плотность в лунках, со- Кратность увелидержащих контрольную положи- чения оптическ. тельн ю сыво отк плюс: плотности

Разведения антигена

Достоверность отличий необработанный антиген

П р и м е ч а н и е: Контроль антигена с отрицательной сывороткой: необработанный — 0,069 обработанный — 0,060

Составитель А. Пономаренко

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор А,Мотыль

Редактор Г, Федотов

Заказ 532 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 х х:2 х:4 х:8

x:16

0,358 + 0,0020

0,235 «+ 0,0030

0,170 + 0,0020

0,081 + 0,0015

0,045 и 0,0020 антиген, обработанный электич. током

0,537 "= 0,0044

0,423 + 0,0050

0291 ч=00021

0,159 0,0064

0,082 + 0,0043

1,5

1,8

1,7

2,0

1,8 р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,001