N-[3-(3,6-ди-о-метил- @ -д-глюкопиранозилокси)пропил] акриламид в качестве мономера для синтеза статистического сополимера с акриламидом, статистический сополимер n-[3-(3, 6-ди-о-метил- @ -д-глюкопиранозилокси)пропил]акриламида с акриламидом, обладающий свойствами искусственного антигена со специфичностью микробактерии лепры и способ его получения

Патент 1794943

Авторы

Классы МПК

Иллюстрации

Показать все

Реферат

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„, рЦ„„1794943 А1 (я)з С 08 F 220/56, А 61 К 31/78

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

g(i!!ЯД.", 4pQ 1 " . -, ы,и! дрЦ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4371035/05 (22) 09.02.88 (46) 15.02.93. Бюл. N 6 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72) Л.Т. Сухенко„Н.Э. Байрамова, Л.М, Андрианова и Н.В, Бовин (56) Bren S.I., Payne S.N., Gigg 1., Burgess P ..

Gigg R. Use of Synthetic glycoconjugates

containing the Mycobacterium leprae specific ,and imrnunodominant epitope of phenolic

91усоир1о l in the sегоlogy of leprosy.

Ciin.åõð, immunologic, 64, 1.986, р.476-483. (54) и (3-(3 6-ДИ-О-МЕТИЛСЯ -0-ГЛ ЮКОПИРАНОЗЙЛОКСИ)ПРОПИЛ) АКРИЛАМИД В

КАЧЕСТВЕ MOHOMEPA ДЛЯ СИЙТЕЗА

СТАТИСТИЧЕСКОГО СОПОЛИМЕРА С АКРИЛАМИДОМ, СТАТИСТИЧЕСКИЙ СОПОЛИМЕР

N-(-3-(3,6-ДИ-О-МЕТИЛ- j3 -0-ГЛЮКОПИРАНОЗИЛОКСИ)ПРОПИЛ)АКРИЛАМИДА С

АКРИЛАМИДОМ, ОБЛАДАЮЩИЙ СВОЙCTBAMN ИСКУССТВЕННОГО АНТИГЕНА

СО СПЕЦИФИЧНОСТЬЮ МИКРОБАКТЕ-.

РИИ ЛЕПРЫ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ (57) Изобретение относится к области химии полимеров и медицины и может быть использовано в иммунологии. Изобретение позволяет создать искусственный антиген со специфичностью микробактерии лепры, что достигается новой структурой веществавЂ” сополимера -N(3(3,6-ди-О-метил- Р -0-глюкопиранозилокси)пропил)акриламида (ГА) формулы

H |=сК

СО-ВН-(СН24 2+ 3 O

l и новой структурой сополимера акриламида с указанным сомономером общей формулы: н с-.сн т н . -cn> соии, совн-(си,), I

СН20снз О

H 0H где х = 1;0-97,6 мол,%,; где у.= 2.4 вЂ” 99,0 мол. с молекулярной массой 10 -10, получаемого радикальной сополимеризацией 1-40 молей акриламида с

1-100 молями ГА в водном растворе под действием иницииру@щей системы персульфат аммония N,N,N,N -тетраметилэтилендиамин в. присутствии 1,5-6.3 мас. цистеина или 375-1060 мас, 2-пропанола от массы сомономера. 2 табл, Изобретение относится к области хи- -локси)пропил)-акриламиду. его сополимеру мии полимеров и медицины, а именно к сакриламидомиспособуполучениясополимеN-(3-(3,6-ди-Q-метил- Р -0-глюкопиранози- ра; и може быть использовано в иммунологии.

1794943

Целью изобретения является создание искусственного антигена со специфичностью микобактерии лепры.

Пример 1, Получение мономера (способ М 1). 5

К раствору 23 мг (87 мкмолей) 3-(3,6-диО-метил- j3 -D-глюкопиранозилокси)пропиламина (ПА) в 1 мл метанола и 0,1 мл пиридина прибавляют 30 мкл (260 мкмолей) ангидрида акриловой кислоты, через 3 ч добавляют еще 15 мкл ангидрида, выдерживают 3 ч и упаривают, получают 25 мг

N-(3-(3,6-ди-0-метил- /3 -0-глюкопиранозилокси)пропил)акриламида(ГА) с В (диметилглюкоэа) 1 ° 9 (хлороформметанол 9;1).

Мономер достаточно чист для проведения сополимеризации с акриламидом, Аналитический образец получен очисткой на колонке с силикагелем в системе хлорофоомметанол 9:1. Аморфное вещество с (а)o

68.8 (с 0.54. хлороформ). Найдено, %: С

52,89; Н 7,95; Й.4.15. C>4HggN10y. Вычислено, %; С 52,65; Н 7.89; N4,38. Данныеспектра ПМР подтверждают строение продукта.

Пример 2. Получение монсмера (способ 2).

К смеси 23 мг (87 мкмолей) ПА, 2 мл смолы Дауэкс в НСОз-форме,2 мл воды и

0,5 мл метанола прибавляют 260 мкмолей ангидрида или хлорангидрида акриловой 30 кислоты, перемешивают в течение 3 ч, Смесь фильтруют, смолу промывают метгнолом, водой, объединенные фильтраты упаривают досуха, получают 24-25 мг мономера, идентичного полученному по пр.1.

Пример 3 (получение сополимеров).

К раствору ГА и акриламида (AA) (соотношения всех реагентов приведены в табл.1) в 2,7 мл воды прибавляют цистеин или 2-пропанол, затем N,N.N,N -тетраме- 40 тилэтилэтилендиамин (ТМЗД) и персульфат. аммония, вакуумируют и выдерживают 2 ч при. 30 вЂ” 35О. Раствор охлаждают, до 20ОС и выливают в 30 мл метанола, твердый осадок отделяют, промывают метанолом и сушат. 45

Выход сополимера 95-98%.

Формула изобретения

1.N-(3-(3,6-ди-О-ме ил- /3 -О-глюкопиранозилокси)пропил)акриламид формулы; н,с-сн

1 сонн-(сн, 1 сн,ссн„, н„р, сайф н он

Соотношение мономерных звеньев в сополимере вычисляют путем определения (спектрофотометрически, реакция с феноломсерной кислотой, поглощение при 490 нм) содержания диметилглюкозы после кис-. лотного гидролиза сополимеров, приводящего к отщеплению диметилглюкозы.

Содержание диметилглюкозы в сополимерах составляло 94-106% от количества, ожидаемого при константе сополимеризации мономеров, равной "..

MM определяли с помощью гель-фильтрации на сефадексе G-100.

Данные по условиям. выполнения примера 3, примеров 3-18, и свойствам сополимеров, приведены в табл.1.

Пример 19. Взаимодействие сополимеров с антителами, Синтезированные сополимеры были испытаны следующим образом.

1. Активация полистирольных планшетов, Раствор 1,0 мкг сополимера в 1 мл би- . карбонатного буфера (рН = 96) наносят в лунки 96-луночного планшета по 50 мкл и выдерживают 15 ч при 4 С. После промывки водой наносят сыворотки в разведении

1:800 (в фосфатно-солевом буферном растворе, содержащем 0,5% Tween-20, и выдерживают 1 ч при 37ОC. промывают водой, добавляют коньюгат анти-igM-перонсидаза, промывают, прибавляют субстрат (смесь перекиси водорода с о-фенилендиамином), интенсивность окраски измеряют на фотометре с вертикальным лучом. "Muitiskan".

2. Полистироловый планшет с нанесенным сополимером хранят при 20 вЂ” 26ОС в течение 60 суток в открытом виде п и влажности 60-100%, После промывки планшет не отлйчается в иммуноанализе от свежеприготовленного.

Данные по иммунной активности сополимеров приведены в табл,2.

Сенсибилизированные планшеты могут быть использованы 00ВТорНо после отмывки раствором с рН 2,0. в качестве мономера для синтеза сополимеров с акриламидом, обладающих свойствами искусственного антигена со специфичностыю микобактерии лепры.

2.Статистический сополимер акриламида с N-(3-(3;6-ди-0-метился -0-глюкопиранозилокси) пропил)-акриламидом общей формулы:

1794943 где x =- 1,0-97,6. мол,%; у =- 2.4-99,0 мол,% с молекулярной массой 10 вЂ” !0, обла4 5 дающего свойствами искусственного антигена со специфичностью микобактерии лепры, заключающийся в радикальной сополимеризации акриламида с

N-P-(3,б-ди-О-метил- Р -D-глюкопиранозилокси)пропил)-акриламидом, взятых в мольных соотношениях 40:1-1:100 в водном растворе под действием инициирующей системы: персульфат аммония вЂ” N,N.N,N -тетраметилэтилендиамин в присутствии

1,5-6.3 мас. / цистеина или 375-1060 мас. Д

2-пропанола от массы сомономеров. Н1С-СН ) вЂ” (Н С - CH +

СОНН СОКНфСН7)3

СНОСН с где х = 1,0-97,6 мол, g,: у = 2.4-99,0 мол.% с молекулярной массой 10 вЂ” 10, обладающий

4 5 свойствами искусственного антигена со специфичностью микобактерии лепры, З,Способ получения статистического сополимера акриламида с N-f3-(3,6-ди-О. метил- j3 -О-гл юкоп иран озилокси) и ро пил)акриламидом общей формулы: (Н С-СНффН С-СН-).

EONH) CONHtCHdy

СН,ОН О ! нн

ОСНз "н

ОН

Н ОН

Таблица 1

Условия синтеза сополимеров, акриламида с N-(3-(3,6-ди-О-метил- 3-0-глюкопиранозилокси)пропил)акриламидом

Состав еак ионной смеси, мг

Пример

АА

2-пропанол

АГ

ТМЭД пе рсул ьфат аммония цистеин

850

Продолжение табл.1.3

5 б

11К

13К

14К

15К *

72,0

72.0

14,2

42,0

72,0

69,0

70.0

0.2

72,0

72.0

72,0

7.9

7,9

63.0

38,0

15,8

1 1,0

7.0

70,0

7.9

7,9

2,65

1,2

5,0

2,65

2.0

2,65

0,6

О,б

0.6

0,6

0.6

0,6

0.6

0,6

6,6

6.6

6,6

6.6

6,6

6.6

6,6

6.6

20,0

5,0

6,6

6.6

Продолжение табл.1

* Сополимер плохо сорбируется на полистироловых планшетах из-за низкой молекулярной массы.

** Сополимер частично нерастворим в воде.

Таблица 2

Антигенные свойства сополимеров. Способность сополимеров специфически связываться с антителами против микобактерии лепры у больных лепрой, э также туберкулезом* и здоровых доноров

Сравнение с туберкулезными больными делается ввиду большого сходства (в том числе и антигенного) микобактерий лепры и туберкулеза.

Составитель В,Чупов

Техред М.Моргентал

Корректор С.Шекмар

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент",т. Ужгород. ул.Гагарина, 101

Заказ 406 . Тираж : Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР .

113035, Москва, Ж-35, Раушскаю наб., 4!б,