Способ оценки защитного потенциала клеток костного мозга при миелотрансплантации
Патент 1798310
Авторы
Классы МПК
Способ оценки защитного потенциала клеток костного мозга при миелотрансплантации
Иллюстрации
Реферат
Изобретение относится к медицине, преимущественно к иммуногематологии и может быть использовано при исследовании функциональной полноценности миелотрансплантата. Целью изобретения является повышение точности оценки. Цель достигается тем, что определяют количество Thy -1,2 клеток в костном мозге и пропорционально ему оценивают защитный потенциал. Положительный эффект за ключается в повышении точности оценки в 2,5 - 4 раза, 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/53
ГОСУДАРСТВЕННОЕ. ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
О
Ы
С>
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4818047/14 (22) 24.04.90 (46) 28.02.93. Бюл. Рв 8 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) А. И, Гольцев и Е, Д. Луценко (56) Источники информации, принятые во внимание при экспертизе. 1. Radlat Res. . 1961, V.14. р. 213. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ЗАЩИТНОГО ПОТЕНЦИАЛА КЛЕТОК КОСТНОГО M03ГА
ПРИ МИЕЛОТРАНСПЛАНТАЦИИ
Изобретение относится к медицине, в частности, иммуногематологии и может быть использовано при исследовании функциональной полноценности миелотрансплантата.
Целью изобретения является повышение точности оценки защитного потенциала костного мозга при миелотрансплантации.
Поставленная цель достигается тем, что в костном мозге определяют количество Thy — 1,2 кроветворных клеток — КОЕс.
Способ осуществляется следующим образом, После предварительной фиксации моноклональных антител (MAT) к антигену
Thy — 1,2 в лунках пластмассового планшета на них наслаивают суспензию костного мозга, Сорбированные на антителах клетки вводят облученным реципиентом и определяют их колониеобраэущую активность. Процентное содержание Тпу — 1,2... Ы,, 1798310 А1
2 (57) Изобретение относится к медицине, преимущественно к иммуногематологии и может быть использовано при исследовании функциональной полноценности миелотрансплантата. Целью изобретения является повышение точности оценки. Цель достигается тем, что определяют количество Thy — 1,2 клеток в костном мозге и пропорционально ему оценивают защитный потенциал. Положительный эффект заключается в повышении точности оценки в 2,5—
4 раза. 1 табл.
КОЕс в костном мозге определяют по формуле: Х вЂ”, где Х вЂ” количество (%)
АВ
С
Thy — 1,2 КОЕс, А — количество (%) Thy — 1,2 клеток в костном мозге.
 — количество колоний после введения
Thy — 1,2 фракции костного мозга, С вЂ” количество колоний, образованных после введения исходной суспенэии костного мозга.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Суспензию костного мозга получали на гемодезе, содержащем 7,5% криопротектора полиэтиленоксида м. м. 400, ресуспендировали, доводили концентрацию до
2 10 ядерных клеток в 1 мл, Суспензию б делили на две части, одну из которых криоконсервировали при — 196 С. другую оставляли в качестве контроля (нативный костный мозг). Моноклональные антитела к антигену Thy —. 1,2, разводили фосфатным
1798310 буфером до концентрации 1, 300, в объеме
300 мкл вносили в ячейки пластикового планшета и экспонировали при температуре 4 С втечение 12 часов. После связывания антитела с пластиком надосадок с несвязавшимися антителами удаляли пастеровской пипеткой, Приготовленные суспензии нативного в консервированного костного мозга вносили в лунки с моноклональными антителами в объеме 0,5 мл и экспонировали в течение 70 мин при 4 С. Несвязавшиеся с антителами клетки удаляли
"мя гким" смыванием средой 199, Сорбированные на антителах Thy — 1,2+ клетки удаляли таким же образом жестким смыванием. Снятые Thy — 1,2 клетки доводили до необходимой концентрации; исходные 5 10 /мл, сорбированные 5 10 /мл, и
4 вводили внутривенно по 0,2 мл летально облученным мышам — реципиентам, в селезенках которых на 10-е сутки определяли количество гемопоэтических колоний.
Как видно иэ данных, после криоконсервирования костного мозга его колониеобразующая активность снижается в сравнении нативным. При этом в криоконсервированном костном мозге значительно снижается содержание Thy — 1.,2 клеток вообще, в том числе и Thy — 1,2 КОЕс, Об этом свидетельствует тот факт, что из криоконсервированной суспензии элиминируется, только 17;
Thy — 1,2 КОЕс от исходного количества всех КОЕс в криоконсервированном костном мозге. В сравнении с нативным контролем это составляло не более б-77 (р > 0,05).
Пример 2. Суспензию сорбированных нативных и криоконсервированных
Thy .— 1,2+ клеток вводили внутривенно в различных дозах облученным реципиентам и определяли их 20 дневную выживаемость.
Р" — степень достоверности различий в сравниваемых группах. Показано, что защитный потенциал костного мозга находится в строгой зависимости от наличия в нем
Thy — 1,2+ кроветворных клеток: с увеличением дозы вводимых облученных мышей повышается. Низкая выживаемость реципиентов, котором вводили криоконсервированные Thy — 1,2 клетки, подтверждает более низкое содержание в этой фракции
Thy — 1,2 кроветворных клеток, обеспечивающих защитный потенциал костного мозга. Очевидно, что более низкая концентрация Thy — 1,2 КОЕс во всей фракции криоконсервированных Thy — 1,2 клеток связана с потерей кроветворными клетками мембранного антигена Thy — 1,2 и способности связывается с антителами к этому антигену. Следовательно основная масса кроветворных клеток после криоконсервирования становится Thy — 1,2, Это приводит к изменению защитного потенциала крио10 консервированного костного мозга в целом. Так, выживаемость в течение 20 дней облученных реципиентов с трансплантатом
1 10 ядерных клеток нативного костного
5 мозга выше, чем криоконсервированного
"5 (табл. 1).
Таким образом, заявляемый способ повышает точность оценки защитного потенциала костного мозга. Оценка количественного содержания Thy — 1,2 кроветворных клеток к суспензии миелокариоцитов дает основание считать, что костный мозг, содержащий около 15 — 17%
Thy — 1,2 КОЕс во всей популяции кроветворных клеток (КОЕс) обладает достаточным защитным потенциалом при восстановлении гемопозза облученных реципиентов.
При снижении концентрации клеток данного типа, в частности, после криоконсервирования, снижается и защитный потенциал
30 костного мозга.
Повышение точности оценки защитного потенциала костного мозга подтверждается также тем, что при сравнительной оценке колониеобразующей активности нативного
35 и криоконсервированного костного мозга, содержания Thy — 1,2 кроветворных клеток в обоих миелотрансплантатах и выживаемости облученных реципиентов, коэффициент корреляции между содержанием в костном мозге Thy — 1,2 КОЕс и выживаемость животных для нативного костного мозга в 4, а для консервированного в 2,5 раза выше, чем между содер>канием колоний в селезенке и выживаемостью (р > 0,05).
Формула изобретения
Способ оценки защитного потенциала клеток костного мозга при миелотрансплантации путем определения колониеобразующей активности, отл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения точности оценки, определяют количество Thy — 1,2 клеток в костном мозге и пропорционально ему оценивают защитный потенциал.
1798310
Составитель П, Бонарцев
Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор С, Лисина
Редактор Л. Пигина
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101
3аказ 749 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5