Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм

Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование изобретения: может быть использована в биофармации, к способам оценки биодоступности лекарственных веществ. Сущность заключается в том, что для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственной формы используют состав, включающий специфический для каждого фермента субстрат в количестве 0,01-1 мас.%; агар 1,2 мас.% и воду -- остальное , Разработанная среда позволяет оценить степень высвобождения ферментов из лекарственных форм. 3 ил., 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК.

ГОсудАРстВеннОе. пАтеНтнОе

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 .. (21) 4844869/14 (22) 23.05,90 (46) 28.02.93. Бюл, Nò 8 (71) Казанский государственный медицинский институт им, С.В, Курашова (72) Л,А. Поцелуева, Э.Г, Куприянов-Ашин и

А.А, Баранова (56) В патентной литературе предложенная среда не описана, (54) СРЕДА ДЛЯ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ВЫСВОБОЖДЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ ИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ

Изобретение относится к биоформации, а именно, к способам оценки биодоступности лекарственных веществ из лекарственных форм по интенсивности высвобождения активного вещества из лекарственной формы в модельную среду, . имитирующую ткани организма.

Целью изобретения является разработка состава среды для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм.

Пример 1. Состав среды для оценки степени высвобождения РНКазы бактериальной из лекарственных форм, В качестве вводимого в модельную среду субстрата использована высокополимерная дрожжевая рибонуклеиновая кислота (PНК) производства НПО "Вектор", имеющая степень неферментативного гидролиза не более 5%.

Готовят модельную среду. для чего агар после его набухания растворяют в воде при кратковременном кипячении. Точную навеску РНК растворяют в дистиллированной

„„5U ÄÄ 1798686 А1 (51)5 G 01 N 33/15, А 61 К 37/48 (57) Использование изобретения; может быть использована в биофармации, к способам оценки биодоступности лекарственных веществ, Сущность заключается в том, что для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственной формы используют состав, включающий специфический для каждого фермента субстрат в количестве

0,01 — 1 мэс,%; агар 1,2 мас.% и воду — остальное, Разработанная среда позволяет оценить степень высвобождения ферментов из лекарственных форм. 3 ил„1 табл, воде, раствор смешивают с 2 ч. охлажденного до 37 — 40 С агарового геля. Жидкую смесь разливают в чашки Петри с диаметром 38 мм (ТУ 64-2-19-78). В каждой чашке в центре застывшего геля делают по одной стандартной лунке, куда помещают 22,5 мкл 0,5%ного водного раствора бактериальной 0} рибонуклеазы. Количество образцов опре- Q(j деляется количеством составов модельных 0 сред и количеством оцениваемых временных интервалов инкубации, Пробы термостатируют при 37 + 2 С, в течение различных интервалов времени, По окончании инкубации на поверхность геля наносят на 5 мин по 0,5 мл охлажденного до + 5 С а

0,75% раствора урэнилацетата в 25% хлорной кислоте, который осаждает высокополимерные фрагменты РНК. В результате вокруглунок с лекарственной формой РНКазы (водный раствор фермента) образуются прозрачные зоны, свидетельствующие о диффузии РНКаэы в гель и отражающие область образования продуктов гидролизэ

РНК.

1798686

На фиг.1 представлены результаты, характеризующие интенсивности протекания процесса диффузии фермента иэ раствора в гель во времени в зависимости от состава модельных сред, различающихся только по процентному содержанию специфического для данного фермента субстрата. Следует отметить, что использование в составе среды PHK в концентрациях 0,1 и 1,0% обусловливает образование четко выраженных прозрачных зон при всех временных интервалах, причем увеличение времени инкубации сопровождается увеличением величины прозрачных эон, что подтверждает факт . протекания диффузии фермента в гель во времени. Интерес вызывают результаты сопоставительной оценки диаметра эон диффузии РНКаэы при использовании РНК в концентрациях 0,1, 0,2 и 1,0%, более значимые в первых двух случаях. Причем для кон- 20 центрации субстрата 0,2% характерна более четкая, чем для концентрации 0,1 %, граница раздела прозрачной зоны и зоны преципитации при всех временных интервалах, что имеет большое значение для количественной оценки степени высвобо>кдения фермента в гель, При использовании

РНК в концентрации 0,02% и ниже не наблюдается четко выра>кенной прозрачной, видимой невоору>кенным глазом, зоны диф- З0 фузии, имеются лишь очень слабо выраженные ее контуры к 4-му часу исследования, Таким образом. визуальная оценка полученных результатов позволила выделить для дальнейшего анализа составы сред, содержащие PHK в концентрациях 0,1 и 0,2%, обеспечивающие воэмо>кность адекватной количественной оценки эффекта, Сделанное заключение подтверждается расчетным способом, результаты которого представле- 40 ны в таблице и отражают интенсивность высвобождения фермента в гель во времени в зависимости от концентрации в ием субстрата, причем как видно из таблицы, для всех временных интервалов величина диф- 45 фузии фермента в гель, содержащий 0,1% субстрата, несколько выше, чем при его содержании 0,2%, Однако несмотря на статистическую достоверность различий оии очень малы и составляют от 1,07 до 1,12 50 раза. 8 то же время, возвращаясь к фиг,1, следует подчеркнуть уже упоминавшийся ранее факт наличия более четкой границы между прозрачной зоной и зоной преципитации при использовании геля, содержаще- 55 го 0,2% РНК.

Пример 2. Состав среды для оценки степени высвобождения панкреатической

РНКазы из лекарственных форм.

Методика проведения эксперимента и вид использованного субстрата (дрожжевая

PHK) идентичны методике и субстрату, приведенным в примере 1, Нэ фиг,2 иллюстрируют результаты диффузии панкреатической РНКазы из 0,5% водного раствора в модельную среду с различным содержанием субстрата. Они свидетельствуют о том, что, как и в случае изучения бактериальной

РНКазы, наиболее приемлемым для биофармацевтической оценки лекарственных форм пэнкреатической РН Казы является состав модельной среды, содержащей 0,2% субстрата (РНК), обеспечивающий образование наиболее четкой границы двух зон. В то же время данные таблицы свидетельствуют о близости расчетных значений величин зон диффузии в среды, содержащие PHK в концентрациях 0,1 и 0,2%, Пример 3, Состав среды для оценки степени высвобождения панкреатической

ДНКазы из лекарственных форм, Методика проведения эксперимента аналогична методике, описанной в примере

1, Однако в качестве субстрата для ДНКазы, вводимого в модельную среду, использована натриевая сол ь дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК натриевая соль) иэ зритроцитов цыплят. На фиг.З иллюстрируют результаты диффузии панкреатической ДН Казы из водного раствора в модельную среду с различным содержанием субстрата (ДНК натриевая соль). Они свидетельствуют как и в первых двух примерах, о некотором преимуществе модельной среды, содержащей субстрат в концентрации 0 2%, Данные, представленные в таблице, отражают интенсивность высвобождения фермента в гель во времени в зависимости от концентрации в нем субстрата.

Таким образом, содержание РНК или

ДНК в модельных средах при оценке степени диффузии в них ферментов (РНКаз и

ДНКаз) вследствие высвобождения последних иэ лекарственных форм должно находиться в интервале концентраций

0,02 — 1,0%, Оптимальное содержание РНК или ДНК в модельной среде соответствующей концентрации 0,2%, что обеспечивает образование наиболее четкой границы между прозрачной зоной и зоной преципитации. В,качестве заявляемого объекта предлагается следующий состав модельной среды для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм; 0,01—

1,0% специфического для фермента (группы ферментов) субстрата, 1,2% агара и до 100% воды.

Результаты визуальной и математической оценки высвобождения ферментов из .

1798686 лекарственных форм в модельную среду данного состава, проиллюстрированные фиг.1 — 3 и таблицей, могут быть использованы для характеристики биодоступности ферментов в опытах in vitro, Формула изобретения

Среда для оценки степени высвобождения ферментов из лекарственных форм, включающая специфический для каждого фермента субстрат, агар и воду в следующем соотношении указанных компонентов, мас.%:

5 Специфический субстрат

Агар

Вода

0,02-1

1,2

До 100

Показатели диффузии нуклеаз из 0,5 -ных водных растворов в модельные среды с различным содержанием субстрата ски достоверно при всех временнь;х интервалах е. Различие (P < 0,05).

0,002 0,0I О,О2 0,I 0,2 I,О 2,0

Фий. 5 римечни

IlP" n,nZZNT < ЛЬН ) CTb

3K0rI93NIJNN

WGC, КРЕЦ(ИТ;Зй—

Ц1 R C$607-"" Эй ГЖ В MOJfÂËÜÈÎÈ

СРЕ,лбэ fîo

О,I 0,Р

0,02

Пр"1должительн 1сть экспозиции час. Риг. я

17986 86

Концентрация субстрата з мэделъней среде, 7.

1798686 б

0,2

0,I

%uz, Л

Редактор

Заказ 768. Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул,Гагарина, 101

Кбнц6Йтда- О, О"= ция субстрата з ма ,IIIJIbHQN

СЯВД6, g

Прпдалжительнесть эксп®Зиции, час

Составитель Л;Поцелуева

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор С.Юско