Способ моделирования сахарного диабета

Способ моделирования сахарного диабета

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(Использование: экспериментальная медицина , способы моделирования сахарного диабета, изучение патогенеза возникновения и развития заболевания, разработка способов его профилактики и лечения. Цель изобретения - сокращение сроков получения начальных стадий сахарного диабета, упрощение способа, получение стойкой формы заболевания. Сущность изобретения: белым лабораторным крысам линии Вистар обоего пола вводят сахароснижающий препарат из группы производных сульфонилмочевины - букарбином в дозе 6-7. мг/кг на протяжении 14-17 дней совместно с полным адъювантом Фрейнда. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВFННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОспАтент сссР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21):4910365/14 (22) 12.02.91 . (46) 15.03.93. Бюл. ¹ 10 (71) Запорожский медицинский институт (72) О.М.Колесник, Л.В.Абрамов и Г.В.Василен о (56). Авторское свидетельство СССР

N 1439658, кл, С 09 В 23/28, 1988, ( (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ CAXAPHOI0 ДИАБЕТА (57) использование: экспериментальная медицина, способы моделирования сахарного изобретение относится к медицине, а именно к способам моделирования сахарного|диабета, что может быть использовано для изучения патогенеза возникновения и развития заболевания, а также разработки спосрбов его профилактики и лечения.

Цель изобретения — ускорение воспроизве ения доклинической стадии инсулинзави имаго сахарного диабета и получение стой ой формы заболевания.

Способ осуществляется следующим образом, (. целью ускорения воспроизведения доклин ческой стадии инсулинэависимого сахарного диабета и получения стойкой формы заболевания, в качестве производного сульфонилмочевины используют букарбан (М/пар -аминобензолсульфонил/-N-н-бутилмоче ина) в дозе 6 — 7 мг/кг, препарат вводят крыс м подкожно, ежедневно в течение 1417 дней, причем, первую, пятую и десятую инъекции проводят одновременно с равным объемом полного адьюванта Фрейнда.

„„Я2„„1802330 А1 (л1)5 G 01 N 33/50, С 09 В 23/28 диабета, изучение патогенеза возникновения и развития заболевания, разработка способов его профилактики и лечения. Цель изобретения — сокращение сроков получения начальных стадий сахарного диабета, упрощение способа, получение стойкой формы заболевания, Сущность изобретения: белым лабораторным крысам линии

Вистар обоего пола вводят сахароснижающий препарат из группы производных сульфонилмочевины — букарбином в дозе 6-7 мг/кг на протяжении 14 — 17 дней совместно с полным адьювантом Фрейнда, 2 табл.

Пример. Испольэовали 10 крыс-самцов линии Вистар массой 230-250 г. До начала эксперимента определяли исходный уровень глюкозы (до этого животные 24 ч не получали пищи), На протяжении 15-ти дней животным производили подкожные инъекции суспензии букарбана в дозе 6 мг/кг, причем, первая, пятая и десятая иньекции — . в равном объеме с полным адъювантом

Фрейнда. Через 15 дней уровень глюкозы у животных, определяемый натощак, достоверно возрастал (табл,1), изменялся тест толерантности к глюкозе по диабетическому типу (через 2 ч после внутрибрюшинного введения глюкозы в дозе 4 г/кг уровень глюкозы оставался достоверно выше исходного, а у контрольных становился ниже (табл. 1).

После определения глюкозы животных под легким эфирным наркозом забивали, брали кровь для радиоиммунного определения гормонов, а также извлекали поджелудочные железы, которые для дальнейшей морфологических исследований фиксирова1802330

Таблица 1 ли в жидкости Буэна. Выделяли плазму и сыворотку, в которых при помощи стандартных наборов определяли инсулин (РИО-ИНС-ПГ-125 1, СССР), С-пептид (8ykSangtec-Dlagnostlca, ФРГ), глюкагон (BI0DATA, Италия) и соматостатин (Incstar, США). Контролем служила группа животных, получавших на протяжении 15-ти дней подкожные инъекции чистого физиологического раствора в таком же объеме. Определение уровня гормонов проводилось одновременно у опытных и контрольных животных. Через 15 дней эксперимента, по сравнению с контролем, уровень инсулина и С-пептида в сыворотке крови достоверно снижался (табл.2), а глюкагона и соматостатина в плазме возрастал.

Поджелудочную железу после фиксации и стандартной обработки в спиртах возрастающей концентрации заливали в парэфиновые блоки, из которых готовили гистологические срезы толщиной 4 мкм.

Срезы окрашивали гематоксилин-зозином, а также хромовым гематоксилин-флоксином для дифференцировки А-, В- и Д-клеток.

Морфометрия ядер В-клеток выявила уменьшение их площади по сравнению с контролем, а также отмечены дегенеративные изменения в клетках, что является признаком морфофункциональных нарушений инсулярного аппарата поджелудочной железы. Кроме того, с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции проводилось количественное выявление содержания инсулина в В-клетках. Срезы поджелудочной железы толщиной 4 мкм после депарафинирования подвергали трипсинизации в течение 60 мин, а затем инкубировали с моноклональными антителами к инсулину (AMERSHAM, Англия) в течение 6 ч, а затем со вторичными антителами, конъюгированными с FITC (AMERSHAM, Англия) 60 мин.

После этого препараты изучались под люминесцентным микроскопом ЛЮМАМ-И2. Интенсивность свечения, прямо связанная с количеством инсулина в В-клетках, определялась фотометрической насадкой ФМЭЛ1А, с последующей обработкой данных на

ЭВМ, Установлено, что при введении букарбана количество инсулина в В-клетках резко снижается (табл.2), что соответствует обнаруженному уменьшению концентрации инсулина в сыворотке крови, а также наблюдается деструкция части островков.

Кроме того, к концу 15-дневного срока у животных наблюдались повышенная жажда и аппетит, полиурия и агрессивное поведение, что является субъективными признаками сахарного диабета, Эти же изменения

"5 (гормональные и морфофункциональные) сохранялись и через 30 дней после прекращения инъекций букарбана.

Аналогичные результаты получены как у самцов, так и самок, как половозрелых, так

20 и неполовозрелых.

Преимуществом данного способа моделирования инсулинзависимого сахарного диабета является быстрота получения доклинической стадии заболевания, по срав25 нению с прототипом в 6 — 18 раз, простота воспроизведения, стабильность результатов, экономичность благодаря использованию крыс, высокая степень приближения к клиническому течению заболевания.

30 Формула изобретения

Способ моделирования сахарного диабета, включающий ежедневное введение животным производного сульфонилмочевины, отличающийся тем, что, с целью

35 ускорения воспроизведения доклинической стадии инсулинзависимого диабета и получения стойкой формы заболевания, в качестве производного сульфонилмочевины используют букэрбан N-(парааминобензол40 сульфонил)-N-н-бутилмочевина в дозе 6-7 мг/кг, препарат вводят крысам подкожно ежедневно в течение 14 — 17 дней, причем первую, пятую и десятую инъекции проводят одновременно с инъекциями равного

45 объема полного адиовата Фрейнда.

Таблица 2

Составитель Ю.Колесник

Редактор В.Трубченко Техред М.Моргентал Корректор M,Ñàìáoðñêàÿ!

Заказ 847 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101