Способ определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток
Иллюстрации
Показать всеРеферат
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушениях. Цель изобретения - упрощение и снижение травматичности способа. Цель достигается тем, что пробу цельной крови пациента инкубируют в им-% мунологических планшетах с неспецифичеекими митогенами или специфическими аллергенами, добавляют раствор тетрациклин гидрохлорида. После инкубации переносят суспензию клеток из лунок планшета на предметные стекла и подсчитывают в флюоресцентном микроскопе число флуоресцирующих клеток по отношению к контрольным пробам. 1 табл.
COIO3 СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я>5 G 01 М ЗЗ/533
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ в
1 (21) 4753701/14 (22) 24.07.89 (46) 30.03.93. Бюл. M 12 (71) Всесоюзный научный центр радиационной медицины AMH СССР (72) В.Г,Бебешко, А.А.Чумак, Д,А.Базыка, В.В,Талько и Ж,НлМинчейко . (56) Иммунологические методы/Под ред.
Г.Фримеля, M.: Медицина, 1987, с. 294-302. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и аллергологии, и
Изобретение относится к медицине, в частности, к иммунологии и аллергологии, может быть использовано в целях диагностики и контроля эффективности терапевтического воздействия при различных иммунопатологических состояниях.
Цель изобретения — упрощение способа при сокращении травматичности.
Указанная цель достигается тем, что у больного забирают кровь из пальца, инкубируют ее в иммунологических планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, флюоресцентным зондом — раствором тетрациклина, переносят на предметные стекла, готовят мазки и подсчитывают число флюоресцирующих клеток, Способ осуществляют. следующим образом.
Кровь пациента, взятую из пальца, вносят в лунки планшета по 0.025 мл, В лунки. Ж 1805394 А1 может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушениях. Цель изобретения— упрощение и снижение травматичности способа, Цель достигается тем, что пробу цельной крови пациента инкубируют в им- мунологических планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, добавляют раствор тетрациклин гидрохлорида. После инкубации переносят суспензию клеток из лунок планшета на предметные стекла и подсчитывают в флюоресцентном микроскопе число флуоресцирующих клеток по отношению к контрольным пробам. 1 табл, и» вносят раствор митогена или аллергена и инкубируют планшет при 37 С в течение 1 ч, Затем в лунки вносят раствор тетрациклина гидрохлорида B конечной концентрации
1,0-2,0х10 г/л и инкубируют при 37 С в течение 5-15 мин и переносят суспензию клеток из лунок на предметные стекла., (л
Проводят учет результатов, определяя Ы спонтанную, митоген- и аллергенезависи- Ч0 мую флюоресцентную клетку с определени- Д, ем индекса стимуляции.
Пример. У больного Н. (исследование
N. 88!431) отбираем иа пальца 0,1 мл крови
° и мй в капилляр, предварительно обработанный раствором гепарина в обычной концентрации, Кровь вносим по 0,025 мл в лунки планшета для иммунологических исследований, Вносим в контрольную лунку 0,025 мл забуференного раствора Хенкса) рН 7;4 (в опытную соответственно 0,025 мл раствора ФГА в концентрации 20 мкг/мл, а также 0.025 мл
1805394 ионизирующей радиации при аварии на
Чернобыльской АЭС (таблица).
Обнаруженная корреляция способа реакцией бласт-трансформации с + Н-тими5 диновой меткой и реакцией торможения миграции лейкоцитов позволяет рекомендовать способ для ранней оценки иммунного статуса при различных нарушениях иммунитета, /
Формула изобретения
Способ определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток путем инкубации крови больного с неспецифи15 ческими митогенами или специфическими аллергенами, последующей регистрации результатов и подсчета индекса стимуляции по отношению к спонтанному уровню активности, о т л и ч э ю шийся тем, что, с целью
20 упрощения и снижения травматичности способа, перед регистрацией в среду вносят тетрациклин гидрохлорида в концентрации (1,0-2,0)х10 г/л и регистрируют число флуоресцирующих лейкоцитов.
Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток у больных, пострадавших при аварии Чернобыльской АЭС
% бластов в
РБТЛ
% светящ. клеток по предлож. способ
Индуктор кле- N- исследоваточной проли- ния еаии
Индекс сти- Индекс тормоМуляции по Н жения мигратими ин ии 2
ФГА
20,7
30,5
18,0
36,8
44,8
24,2
19,5
26.3
13,5
17,8
2
4
6
8
10 г*
Кортизол
2
4
6 . 7
9
5,0
2,1
4,6
3,9
6,0
13,0
1,7
5,3
2,8
3,6
Стафилококковый антиген
9,3
13.2
16.0
12,5
10,1
17,1
25,1
18,3
2
4 раствора кортизолэ (II опыт) и 0,025 мл раствора стафилоантигена (III опыт). Планшет инкубируем в течение 60 мин при 37 С, после чего вносим в опытные и контрольные лунки по 0,02 мл раствора тетрациклина концентрации 5,0х10 г/л. Планшет инкубируем 10 мин. при 37 С, после чего каплю суспензии переносим на предметное стекло, приготавливаем мазки . Учет результатов проводим на флюоресцентном микроскопе
Л ЮМАМ Р-5 или аналогичном с использованием длины волны возбуждающего света
380 нм (фильтры ФС-1-2, БС-8-3, СЭ3-24.4) и света флюоресценции 540 нм (запирающие фильтры ЖС-18, ЖЗС-19). Определяем число флюоресцирующих зеленым светом лейкоцитов в опытных пробах, по отношению к контрольной и вычисляем индексы стимуляции — контроль 3%, ФГА — 23,5%. кортизол — 2,6%, стафилоантиген — 14,1%, соответственно индексы стимуляции — 7,83, 0,87, 4,70, Способ был применен при исследовании больных, подвергшихся воздействию с
11,6
21,6
10,4
25,8
17,4
14,6
12,3
12,4
1 1,2
10,0
0,76
1,3
0,7
3,2
2,8
2,4
5.1
3;9
2,4
2,0
2,2
36,3
61,4
32,0
63,5
71,0
42,0
38,6
30,0
17,4
21,2
0,92
8,7
4,8
12,9
7,3 .
8,0
16,8
1,0
10,8
6,4
4,0
0,86
20,7
29,5
36.5
25,2
0,66
0,56
0,74
0,60
0,40
0,62
0,78
0,64
0.88
0,80
0,93
0,92
0,95
0.84
0,87
0,75
0,80
0,98
0,88
0,95
0.93 — 0,70
0.49
0,66
0.60
0,70
1805394
Продолжение таблицы г* — коэффициент корреляц
Составитель И. Башкаев
Редактор Т.Горячева Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор, М.Керецман
Заказ 939 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101