Способ прогнозирования течения острого вирусного гепатита

Способ прогнозирования течения острого вирусного гепатита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита. Цель, достигаемая изобретением, заключается в повышении точности прогноза развития тяжелой формы вирусного гепатита. Сущность изобретения: осуществляют определение уровня восстановленного глутатиона и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах и при соотношении между этими показателями, равном и превышающем 1,0, диагностируют тяжелую форму острого вирусного гепатита. Способ позволяет в ранние сроки прогнозировать тяжесть течения вирусного гепатита.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si>s G 01 N 33/68

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

М

С:

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ ЬСТВУ. (21) 4870096/14 (22) 01.10.90 (46) 30.03.93, Бюл. и 12 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им, акад. И,П.Павлова (72) Т.В.Антонова и В,Б.Барановская (56) Соринсон С.M. Вирусные гепатиты. Л.:

Медицина, 1987, с. 42-46. (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАЙИЯ ТЕЧЕН И Я ОСТРОГО В И РУС Н О ГО. ГЕПАТИТА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита (ОВП.

Целью настоящего изобретения является повышение точности способа прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита, Поставленная цель достигается тем, что в известном способе прогнозирования тяжелой формы острого вирусного гепатита, включающем биохимическое исследование крови, согласно изобретению, определяют содержание восстановленного глутатиона (ВГ) и активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) в эритроцитах и их соот- ношение и при значениях соотношения, равном и более 1,0, диагностируют тяжелую форму заболевания.

При обследовании 70 больных легкой, среднетяжелой и тяжелой формами острого вирусного гепатита было установлено, что,. Я2„, 1805401 Al тяжелой формы острого вирусного гепатита;

Цель, достигаемая изобретением, заключается в повышении точности прогноза развития тяжелой формы вирусного гепатита.

Сущность изобретения: осуществляют определение уровня восстановленного глутатиона и активности глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах и при соотношении между этими показателями, равном и превышающем 1,0, диагностируют тяжелую форму острого вирусного гепатита. Способ позволяет в ранние сроки прогнозировать тяжесть течения вирусного гепатита. величина отношения содержания Вà — ведущего компонента антиоксидантной системы клетки — к активности Г-6-ФДГ, фермента, участвующего в метаболизме антиоксидантов, уже в ранние сроки отражает степень тяжести заболевания и может быть использована для прогноза тяжелой формы вирусного гепатита.

Указанные выше признаки в доступной литературе не обнаружены, что свидетельствует о соответствии предлагаемого решения критерию "существенные отличия".

Способ может быть осуществлен следующим образом.

Венозную кровь забирали утром натощак в силиконированные пробирки содержащие 1 мл раствора состава: трехзамещенный цитрат натрия 1,9%, хлорид натрия 0,9%; желатина 3%. Кровь перемешивали с указанным раствором и центрифугировали (3000 оборотов/мин, 4 С, 7 минут). Плазму и лейкоцита рный слой отсасывали и удаляли. Эритроциты троек1805401 ратно отмывали в 0,9 растворе хлорида натрия (3000 оборотов/мин, 4 С, 5 минут).

Надосадочную жидкость удаляли, а в эритроцитах определяли содержание ВГ и ак- тивность Г-6-ФДГ, 5

Уровень ВГ определяли по модифицированному методу, основанному на восстановлении нитропруссида натрия глутатионом в щелочной среде с образованием окрашенного соединения. 0,5 мл гемо- 10 лизата, полученного при разведении взвеси эритроцитов дистиллированной водой (1:1), смешивали с 1 мл 10 раствора трихлоруксусной кислоты. После перемешивания и 10минутной инкубации на ледяной бане пробы центрифугировали 5 минут при 3000 оборотов/мин. 1 мл надосадочной жидкости вносили в пробирку, содержащую 2 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Затем к смеси добавляли 0,5 мл 0,08 М раствора нитропруссида натрия и 0,5 мл

20 раствора углекислого натрия, Через 15 сек после быстрого тщательного перемешивания пробы фотометрировали при длине

25 волны 540 нм. Содержание ВГ определяли по калибровочному графику. Результаты выражали в мкмоль ВГ на 1 г гемоглобина, содержание которого определяли стандарт ным гемиглобинцианидиым методом.

Принцип метода заключается в том, : что гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству гемоглобина. 0,02 мл гемолизата приливали к 5,0 мл трансформирующего раствора в пробирке, хорошо перемешивали и через 10 мин измеряли на спектрофотометре при длине волны 540 нм против "холостой" пробы (воды). Расчет содержания гемоглобина производили по калибровочному графику.

Определение активности Г-6-ФДГ в эритроцитах производили по динамике уровня НАДФН спектрофотометрическим методом, основанным на определении количества восстановленного НАДФ, образующегося при окислении глюкозо-6-фосфата в 6-фосфоглюкозолактон, Измерение содержания НАДФН регистрируется по возрастанию оптической плотности раствора при длине волны 340 нм, Инкубационная среда содержала 0,05 М триэтаноламиновый буфер, рН вЂ” 7,5-2,9 мл; 10 мМ раствор НАДФ—

0,1 мл; гемолизат, полученный при разведении взвеси эритроцитов дистиллированной водой (1;5) — 0,04 мл; 30 мМ раствор глюкозо-6-фосфата натрия (" Серва" ) — 0,05 мл, Оптическую плотность раствора определяли

50 о

55 через 10 с и через 5 минут после внесения в среду глюкозо-6-фосфата натрия. Инкубацию осуществляли при комнатной температуре, Активность фермента рассчитывали на основе миллимолярного поглощения

НАДФН, равного 6,22 мМ см ", и выражали в мкмоль НАДФН/г гемоглобина в мин. Содержание гемоглобина оценивали приведенным выше гемоглобинцианидным методом.

Затем определяли соотношение

ВГ и при значениях, равных и более

1,0, диагностировали тяжелую форму заболевания.

Выбор данной величины соотношения в качестве прогностического критерия обусловлен ретроспективным анализом результатов обследования 70 больных острым вирусным гепатитом, у 14 из которых была легкая форма заболевания, у 32 — форма средней тяжести, у 24 — тяжелая. Оказалось, что у всех больных легкой и средней тяжести формами ОВГ величина соотношения

ВГ в первые дни желтушного периода была ниже 1;0 и составила соответственно 0,62 + 0,06 и 0 41 + 0,02. При тяжелой форме вирусного гепатита, не осложненного острой печеночной недостаточностью, величина показателя превысила 1,0 (в среднем 1,04 0,09), а в случаях с развитием печеночной энцефалопатии составила

1,31 + 0,13, При этом важно отметить, что у большинства больных (16 из 24) тяжелой формой вирусного гепатита соотношение

ВГ было выше 1.0, а у 5 больных значения показателя были близкими к 1,0 (0,87-0,98).

Способ иллюстрируется следующими примерами;

Пример 1. Больной С., 21 года. история болезни 5552, поступил в стацио- нар на 8 день болезни с жалобами на слабость, боль в коленных суставах. Начало заболевания постепенное, нарастала слабость, на 6 день болезни было зарегистрировано повышение температуры до 380, был однократно жидкий стул. При поступлении состояние расценено как удовлетворительное, отмечалась субиктеричность склер, печень на 1 см выступала из-под реберной дуги, пальпировэлась селезенка. Пульс 68 у/мин, артериальное давление 150/80 мм. рт.ст. Лабораторные показатели: АлАТ—

58,0 MMQ/lb/÷ л, билирубин — 30 мкмоль/л, сулемовый титр — 2,0 мл, тимоловая проба—

1,6 ед. Обнаружен Нв, Ао. Соотношение

1805401

ВГ . составило 1.01, что позволило предположить возможность развития у больного тяжелой формы ОВГ В. И действительно, состояние больного постепенно 5 ухудшалось, сохранялась слабость, появились боли в правом подреберье, снижение аппетита вплоть до анорексии, прожилки крови в отделяемом из носа, субфибрильная температура, нарушение сна, стала нара- 10 стать желтуха, увеличились размеры печени (+2 см), сохранялась гиперферментемия, На

68 день болезни АлАТ вЂ” 60,0 ммоль/ч л, билирубин — 302 мкмоль/л, сулемовый титр—

1,3 мл, тимоловая проба — 6,5 ед.. протром- 15 биновый индекс — 72, Проводилась стандартная терапия тяжелой формы вирусного гепатита. Лишь на 98 день болезни больной был выписан из стационара с остаточной гипербилирубинемией и гиперферменте- 20 мией, Пример 2, Больной Ш„17 лет, история болезни 24484, поступил в клинику . на 5 день болезни, 2 день желтухи с жалобами на слабость, снижение аппетита, 25 тошноту, однократно рвоту, боль в зпигастральной области. Заболел остро, в течение

2 дней регистрировалось повышение температуры до 38-39 С, отмечались слабость, снижение аппетита, тошнота, боли в су- 30 ставах, При поступлении состояние расценивалось как "относительно удовлетворительное", Умеренная желтуха кожи и слизистых. Печень на 2 см выступала из-под реберной дуги, селезенка не пальпирова- 35 лась. Пульс 72 у/мин, АД вЂ” 110/60 мм рт.ст, Лабораторные показатели: АлАТ вЂ” 53,8 ммоль/ч л, билирубин 167 мкмоль/л, сулемовый титр — 1,64 мл, тимоловая проба — 6,3 ед. Обнаружен Нв, Ag. Соотношение 40

ВГ составило 1,29, указывая на вероятность развития тяжелой формы ОВГ, что и подтвердилось при дальнейшем наблюдении за больным. Состояние прогрессивно 45 ухудшалось и на 8 день болезни уже расценивалось как тяжелое, нарастала слабость, отмечались тошнота, анорексия, появились прожилки крови в отделяемом из носа, сократились размеры печени. АлАТ вЂ” 39,4 50 ммоль/ч л, билирубин — 190 мкмоль/л. протромбиновый индекс 51%. Больной был переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии, Проводимое лечение. позволило купировать синдром интоксика- 55 ции. однако желтуха неуклонно нарастала и к 25 дню болезни содержание билирубина составляло 364 мкмоль/n. Постепенно самочувствие больного улучшалось, стала угасать желтуха. Больной выписан на 56 день болезни в удовлетворительном состоянии с остаточной гипербилирубинемией, Пример 3, Больной К„55 лет, история болезни 115, поступил в стационар на 7 день болезни. 1 день желтухи с жалобами на слабость, снижение аппетита, тошноту, боль.в правом подреберье, зпигастрии, кожный зуд. Заболел остро, в течение 3 дней отмечалось повышение температуры (38-38,4 ), затем температура субфибрильная, беспокоили слабость, снижение аппетита, боль в правом подреберье, боль в суставах. При поступлении состояние средней тяжести,, температура 38,2О, умеренная желтуха кожи и слизистых, гепатомегалия, пальпировалась селезенка. Пульс 90 у/мин, АД вЂ” 120/80 мм рт.ст, Лабораторные показатели: АлАТ—

33 ммоль/ч л, билирубин — 146 мкмоль/л, сулемовый титр — 1,78 мл, тимоловая проба—

4,0 ед, Соотношение составило

ВГ

1,18, свидетельствуя о возможном развитии тяжелой формы заболевания. Дальнейшее наблюдение подтвердило такой прогноз, Состояние больного прогрессивно ухудшалось, на 9 день болезни — резкая слабость, тошнота, рвота, головокружение, черный стул. Состояние расценивалось как тяжелое, желтуха нарастала. На 10 день болезни протромбиновый индекс снизился до 517ь.

Больной переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии. В результате проведенного лечения самочувствие улучшилось. В удовлетворительном состоянии на 56 день болезни больной выписан из стационара с остаточной гипербилирубинемией, Приведенные примеры демонстрируют преимущества предлагаемого нами способа (повышение точности диагностики, возможность прогнозирования тяжелой формы

ОВГ уже в ранние сроки заболевания) по сравнению с прототипом.

Использование изобретения позволяет достичь следующего:

1. Обеспечить прогнозирование тяжелой формы ОЕГ уже в ранние сроки заболевания, 2. Повысить точность диагностики формы тяжести ОВГ.

3. Обеспечить назначение своевременной и адекватной терапии в соответствии с формой тяжести заболевания.

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения острого вирусного гепатита, включающий клиническое обследование больного и лабораторный анализ крови, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет более раннего про1805401

Составитель В.Барановская

Техред М,Моргентал Корректор H.Ìèëþêîâà

Редактор А,Егорова

Заказ 939 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 гноза, в эритроцитах определяют уровень восстановленного глутатиона и активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы с последующим расчетом отношения первого показателя к второму и при значении этого отношения равном единице и более прогнозируют осложненное течение заболевания в виде тяжелой формы.