Штамм соrynевастеriuм аммоniаgеnеs - продуцент инозин-5 @ - монофосфата

Штамм соrynевастеriuм аммоniаgеnеs - продуцент инозин-5 @ - монофосфата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: биотехнология, микробиологическая промышленность и касается микробиологического синтеза инозин-5-монофосфата . Сущность изобретения: штамм Corynebacterium (Brevlbacterlum) ammonlagenes ВКПМ В-5534 получен генетико-селекционным путем без применения мутагенной обработки с использованием ступенчатого отбора мутантов, резистентных к повышающимся концентрациям арсената из родительского штамма Br. ammonlagenes 79-5 (ВКПМ В-3279). В отличие от родительского штамма В-3279, накапливающего смесь четырех продуктов пурмнового и пиримидинового происхождения - уридин-5-монофосфата, урацила, инозин-5-монофосфата и гипоксантина. штамм В-5534 является продуцентом исключительно инозин-5-монофосфата. Штамм В-5534 обладает наиболее высокой активностью накопления инозин-5- монофосфата (до 35,0 г/л) среди эффективных из патентной литературы штаммов. Кроме того, он более эффективно использует глюкозу на образование целевого продукта . 1 табл.

СОЮЗ COBETCKVIX

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (l 9) lI I) (st)s С 12 Р 19/32, С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) .4934057/13 (22) 06.05.91 (46) 30.03.93 Бюл. ¹ 12 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (72) Л.А.Казаринова, Е,С.Преображенская, Е.В.Сладкова и P.Ñ,Øàêóëoâ (73) Всесоюзный НИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 575783, кл, С 12 P 19/32, 1974.

Патент Японии № 57-206381-А, кл. С 12 N 1/20, опублик, 1982.

Заявка Японии ¹ 58-46319, кл. С 12 Р 19/32, опублик. 1983., (54) ШТАММ CORYNEBACTERIUM

AMMONlAGENES - ПРОДУЦЕНТ ИНОЗИН5-МОНОФОСФАТА (57) Использование: биотехнология, микробиологическая промышленность и касается микробиологического синтеза инозин-5-моИзобретение относится к микробиологической промышленности и касается микробиологического синтеза иноэин-5 монофосфата (5,-ИМФ).

5 -ИМФ находит широкое применение в пищевой промышленности как высокоактивная вкусовая приправа.

Целью изобретения является увеличение уровня накопления 5,-ИМФ и повышение эффективности использования

ГЛЮКОЗЫ.

Это достигается получением нового штамма Corynebacterium (8revibacterium) авглоЫаоепеэ AS72-26, депонированного нофосфата, Сущность изобретения: штамм

Corynebacterlum (Brevlbacterlum)

ammonlagenes ВКПМ В-5534 получен генетико-селекционным путем без применения мутагенной обработки с использованием ступенчатого отбора мутантов, реэистентных к павы ша ющимся концентрациям арсената из родительского штамма Br. ammonlagenes

79-5 (ВКПМ В-3279), В отличие от родительского штамма В-3279, накапливающего смесь четырех продуктов пуринового и пиримидинового происхожденил — уридин-5-монофосфата,урацила, инозин-5-монофосфата и гипоксантина. штамм В-5534 является продуцентом искл ючител ь но иноэин-5.- монофосфата. Штамм В-5534 обладает наиболее высокой активностью накопления иноэин-5монофосфата (до 35,0 г/л) среди эффективных из патентной литературы штаммов.

Кроме того, он более эффективно использует глюкозу на образование целевого продукта, 1 табл.

0 во Всесоюзной коллекции промышленных

° ететее микроорганизмов под номером ВКПМ В5534.

Штамм В-5534 получен генетика-селек ииОннмм путем бее применение мутегенной обработки с использованием ступенчатого отбора мутантов, резистентных к повышающимсл концентрациям арсената. Исходным материалом длл селекции послужил пигментообраэующий штамм Br.ammonlagenes

79-5 (ВКПМ В-3279), накапливающий смесь четырех продуктов пуринового и пиримидинового происхождения — уридин-5 -монофосфата (УМФ), урацила 5 -ИМФ и

1806199 нату штамм 8-5534 полностью потерял способность к накоплению пигмента и обрааоаанию но гипоксантина. Штамм В-5534 отличается от родительского штамма 8-3279 устойчивостью к арсенату, улучшенным ростом на жидких и твердых средах, утратой способности к образованию пигмента при росте на агаризованной среде Хоттингера, В отличие от родительского штамма, он накапливает исключительно 5,-ИМФ.

Культурно-морфологические признаки.

Грамположительная палочка длиной до

1,5 мкм, шириной 0,6-0,8 мкм, без жгутиков, неподвижная, не образует спор, На агариэованной среде Хотингера после 1-2 суток культивирования при 30-34 образуе колонии круглой формы диаметром 2,0-3,0 мм с ровным краем бледно-желтого цвета, Поверхность колоний гладкая, с матовым блеском и слабой концентрической исчерченностью. При посеве петлей на твердую среду Хоттингера после инкубации в течение 24 ч при 30-34 наблюдается умеренный рост, поверхность штриха гладкая, блестящая, бледно-желтого цвета. В отличие от родительского штамма, заявляемый штамм

8-5534 утратил способность к выделению в среду красно-бурого пигмента при инкубации на полноценной агаризованной среде

Хоттингера.

Аэроб, При посеве уколом в полноценный агар растет только на его поверхности.

При инкубации на жидких полноценных средах при 30-34 беэ встряхивания рост отсутствует, пленки на поверхности не образуется. При встряхивании, через 24 ч наблюдается значительное помутнение. = .

Для роста на жидкой и агаризованной средах требуется добавка аденина, биотина, витаминов 81 иВз, Культуру поддерживают на косяках с агаризованной средой Хоттингера с добавкой аденина в концентрации 10 мг на 1 л среды.

Физиолого-биохимические признаки.

Штамм 8-5534 является ауксотрофом по аденину. Желатину не разжижает, на крахмальном агаре и обезжиренном молоке роста нет. На ломтиках картофеля рост умеренный, клетчатку не разрушает и не усваивает. Нитраты не восстанавливает, Усваивает глюкозу, фруктоэу, рибоэу, цитрат, пуриновые и пиримидиновые рибонуклеозиды, плохо усваивает сахарозу, сорбит, маннит, не потребляет лактоэу, галактозу, фумарат, сукцинат., ксилозу, арабинозу, глицерин, рамноэу, маннозу, Антагонистических свойств не обнаруживает. Не патогенен, Устойчив к арсенату в концентрации

2 мМ. 8 результате резистентности к арсепиримидиновых производных (УМФ и урацила).

Как следует из данных, приведенных в таблице, при культивировании штамма В5534 он образует до 32,2-35,0 г/л 5 -ИМФ, в то время как штамм-прототип накапливает

26,8 г/л 5 -ИМФ, При этом скорость накопления 5,-ИМФ и степень конверсии глюкозы у заявляемого штамма значительно превышает соответствующие показатели штаммапрототипа.

Пример 1, Культуру CoryrIebacterium (Brevlbacterlum) ammorIlagenes 8-5534 со скошенного агара Хоттингера переносят в

15 жидкую посевную среду следующего состава, мас. : глюкоза техническая 2,0 пептон 1.0 дрожжевой экстракт 1,0

20 NaCI 0,25 вода до 100

Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 75 мл среды, на качалке, делающей 240-250 об/мин при 34 в течение 24 ч, Посевной материал в количестве 10 об. переносят в ферментационную среду следующего состава, ь: глюкоза техническая 15,0 кукурузный экстракт 6,0

30 КН2Р04 3,0

MgS04 7Н20 1,0 мочевина 0,84 вода до 100

Среду стерилизуют при 0,8 атм в тече35 ние 30 мин, мочевину стерилиэуют отдельно в-диде 40 -ного раствора при 0,5 атм

30 мич,. После стерилизации рН среды подводят до 7,3 раствором КОН 7N и добавляют раствор мочевины.

40 Процесс ферментации осуществляют в колбах емкостью 750 мл, содержащих 30 мл среды, на качалке, делающей 350 об/мин, что соответствует скорости растворения кислорода 3,8 г Oz/л ч при 34, После-144 ч

45 ферментации в культуральной жидкости накапливается 32,2 г/л 5 -ИМФ, Степень конверсии глюкозы 21,5 (в прототипе 17,8 ).

Пример 2. Штамм, условия выращивания rIcceBHoro материала и условия фер50 ментации те же, что в примере 1. Отличия заключаются в составе ферментационной среды мас глюкоза техническая 14,0 кукурузный экстракт 8,0

55 KHzP04 3,0

MgS04 7HzO 1,0 мочевина 0,84 вода до 100

После 144 ч ферментации в культуральй жидкости накапливается 35,0 г/л 5 -ИМФ, 1806199

Сравнение основных показателей, характеризующих заявляемый штамм и штамм-прототип

Составитель Л. Казаринова

Техред М.Моргентал Корректор 3. Салко

Редактор 3. Ходакова

Заказ 966 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101

Степень конверсии глюкозы 25,0О(, (в прототипе 17,8 )

Таким образом, заявляемый штамм

Corynebacterlum (8revlbacterium)

ammonlagenes ВКПМ В-5534 обладает следующими преимуществами по сравнению со штаммом-прототипом: превосходит штамм-прототип по количеству накапливаемого целевого продукта

5 -ИМФ на 20-30 j; обладает большей скоростью накопления 5 -ИМФ; отличается более высокой эффективностью использования глюкозы на единицу

5 продукции.

Формула изобретения

Штамм Corynebacterium ammonlagenes

ВКПМ В-5534 — продуцент инозин-5 -моно10 фосфата.