Способ подготовки т-розеткообразующих клеток крови для их светового и электронномикроскопического исследования на цитологических мазках-блоках

Способ подготовки т-розеткообразующих клеток крови для их светового и электронномикроскопического исследования на цитологических мазках-блоках

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: в области иммунологии, гематологии и цитологии. Сущность изобретения: готовят мазки и затем проводят выбор Т-розеткообразующих клеток, подлежащих электронномикроскопическому изучению, фиксируют их, обезвоживают, заключают материал в эпоксидную смолу, причем мазки готовят на площадке пирамиды блока, заточенного для получения ультратонких срезов, а фиксацию и обезвоживание клеток осуществляют до выбора клеток, подлежащих электронномикроскопическому изучению. Способ позволяет повысить точность исследования клеток. 1 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР . (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

О 4 (А)

О

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4876719 /14 (22) 22.10.90 (46) 07.04.93. Бюл. N 13 (71) Казахский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной хирургии им. А, Н. Сызганова (72) М. А. Алиев, В. А. Писанка, Е. Л. Зумеров и Г, В. Федотовских, (56) Ростоян М, А. и др. Ультраструктура клеток крови. Изд. А, Н, Арм, CCP. 1975, с.

8 — 9. (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ Т-РОЗЕТКООБРАЗУЮЩИХ КЛЕТОК КРОВИ ДЛЯ ИХ СВЕТОВОГО И ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКОГО

Изобретение относится к медицине. а именно к гематологии, цитологии и иммунологии.

Цель изобретения — повышение точности выделения специализированных иммунных Т-розеткообразующих клеток.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения клеток крови на цитологических мазках-блоках при световом и электронномикроскопическом исследовании. включающего приготовление мазка, выбор клеток подлежащих электронномикроскопическому изучению, фиксацию, обезвоживание, заключение материала в эпоксидную смолу, специализированные иммунные Т-розеткообразующие клетки наносят на площадку пирамиды блоке, заточенного для ультратонкой резки, и обезвоживание материала осуществляют до выбора клеток подлежащих электронномикроскопическому исследованию.

„.,5U „„1807398 А1 (я)5 G 01 N 33/48 //1/28

ИССЛЕДОВАНИЯ НА ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ

МАЗ КАХ-БЛОКАХ (57) Использование: в области иммунологии, гематологии и цитологии, Сущность изобретения: готовят мазки и затем проводят выбор

Т-розеткообразующих клеток, подлежащих злектронномикроскопическому изучению, фиксируют их, обезвоживают, заключают материал в эпоксидную смолу, причем мазки готовят на площадке пирамиды блока, заточенного для получения ультратонких срезов, а фиксацию и обезвоживание клеток осуществляют до выбора клеток, подлежащих электронномикроскопическому изучению. Способ позволяет повысить точность исследования клеток. 1 ил, Предлагаемый способ осуществляют следующим образом:

Иммунные Т-розеткообразующие клетки . Т-системы иммунитета, полученные после завершения реакции розеткообразования фиксируют в пробирке в 17ь-ном растворе глютаральдегида на 0,1 M фосфатном буфере (рН 7,2 — 7,4) при 20 — 25 С в течение 15 мин, затем. после кратковременной промывки в фосфатном буфере, в 1 -ном растворе четырехокиси осмия на том же буфере на 10 мин.

После промывки в буфере проводятдегидратацию и инфильтрацию клеток в 70 спирте в течение 5 мин по 2 смены, в абсолютном ацетоне на 5 мин, затем клетки осаждают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 3 мин (при объеме взвеси клеток -0,2 см ), Надосадочный слой удаляют. Осадок клеток ресуспендируют в 0,04 — 0,05 см" абсолютного ацетона, Мазки готовят на площадке пирамиды блока, заточенного для ультратонкой резки. Полученные мазки Т-клеток просмат1807398

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью выделять специализированные иммунные Т-розеткообразующие клетки для получения высококачественных срезов в исследовательской работе, Составитель В.Писанко

Тех ред М.Моргентал Корректор Н. Ревс кая

Редактор С.Кулакова

Заказ 1376 Тираж Подписное, ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101 ривают в светооптическом микроскопе посредством объектива с увеличением в 20 раз, блоки для этого устанавливают на предметных стеклах в вертикальном положении.

В таком положении Т-розетки достаточно освещены светом. проходящим, параллельно оси блока, При отсутствии интересующей клетки, площадку пирамиды блока очищают от клеток ватным тампоном и на очищенную поверхность вновь наносят порцию клеток.

Процесс повторяют до нахождения нужной клетки. Когда интересующая клетка найдена, то на поверхность площадки наносят каплю эпоксидной смолы с катализатором.

Полимеризацию материала производят при

60 С в течение 48 ч. Площадки для мазков готовят на блоках ранее использованных для электронномикроскопических исследований.

На чертеже показана Т-розеткообразующая клетка, расположенная на площадке блока-шаблона, заточенного для ультратонкой резки.

Т-розеткообразующая клетка 1, 2, 3;

Эритроцит 1„Лимфоцит 2, Контакты между лимфоцитом и эритроцитом 3, Площадка блок-шаблона 4. . Блок-шаблон 5.

10 Формула изобретения

Способ подготовки Т-розеткообразующих клеток для их светового и электронномикроскопического исследования на цитологических мазках-блоках, включаю15 щий приготовление мазка. выбор клеток, подлежащих изучению, их фиксацию, обезвоживание, нанесение на площадку пирамиды блока и заключения в эпоксидную смолу с последующим микроскопическим

20 исследованием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности исследования, мазки готовят на площадке пирамиды блока, заточенного для получения ультратонких срезов, при этом фиксацию и обезвоживание клеток проводят до выбора клеток, подлежащих изучению.