Способ дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артрита

Способ дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артрита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, точнее к ревматологии. Цель изобретения - 2 ;...повышение точности способа. У больных производят забор крови и определение в ней уровня С- реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов, В лимфоцитов , нерастворимых белков сыворотки крови, а также функцию тимуса, вычисляют дифференцировочный коэффициент и при его значении менее 0 диагностируют псориатический артрит, а при его значении более 0 - ревмэтоидный артрит. По сравнению с прототипом увеличивается точность дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артритов. со С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4829310/14 (22) 24.05.99 (46) 07.04.93. Бюл. N 13 (71) Свердловский государственный медицинский eHcTN (72) Л.Н.Сергеева и M.t0,Ãîëèê0B (56) Трушина Л.С. — Разработка дифференциально-диагностических признаков псориатического и ревматоидного артритов.

Автореферат канд. диссерт„М., 1983. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПСОРИАТИЧЕСКОГО И РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА (57) Изобретение относится к медицине, точнее к ревматологии. Цель изобретения-Изобретение относится к медицине, точнее к ревматологии.

Целью изобретения является повышение точности способа, Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования СРП, нерастворимых белков сыворотки крови (HECK) и ЦИК получают сыворотку крови, центрифугируя

: свернувшуюся венозную кровь. Определение СРП осуществляют методом кольцепреципитации в стеклянных капиллярах: капилляр опускают концом во флакон с антисывороткой, набирая. его на 1/3 длины капилляра (3 см), протирают ваткой и набирают тем же концом исследуемую сыворотку на 1/3 длины. Покачивают капилляр, перемешивая реагенты и погружают в пластилин . свободный конец капилляра так, чтобы уровень жидкости в ней был выше пластилина на 10 мм. Учет реакции проводят через 24 часа. Выпадение преципитата в капилляре

„„Я2„„1807413 А1

2 повышение точности способа, У больных производят забор крови и определение в ней уровня С- реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов, В лимфоцитов, нерастворимых .белков сыворотки крови, а также функцию тимуса, вычисляют дифференцировочный коэффициент и при его значении менее 0 диагностируют псориатический артрит, а при его значении более 0 — ревматоидный артрит. По сравнению с прототипом увеличивается точность дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артритов. свидетельствует о наличии СРП в сыворотке .больного, оценивают в мм.

Определение ЦИК проводят методом О©

ПЭГ-приципитации, основанном на селек- 0 тивной преципитации комплексов антигенантитело (АГ-АТ) в 3,75 $ ПЭГ с ô последующим фотометрическим определением плотности преципитата. Для проведе- () ния реакции готовят два раствора: раствор

М 1 — 0,1 M боратный буфер PH — 8,4 (3,410

r борной кислоты и 4,275 г буры растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1,0 л); раствор N. 2 — 10,0 г ПЭà — 6000 растворяют в 240,0 мл раствора М 1. Ход реакции: 0,3 мл сыворотки крови вносят в пробирку, добавляют 0,6 мл раствора М 1, перемешивают и переносят в пробирку, добавляют 0,6 мл раствора М 1, перемешивают и переносят по 0,3.мл в 2 пробирки. В одну из них приливают 2,7 мл раствора гв 1 (контроль), в другую — $,7 мл раствора М 2 (опыт). Содержимое перемешивают и оставляют на 60 мин. при комнатной температуре, 1807413 после чего определяют плотность на спектрофотометре СФ-46 в кювете 1 X 1 при длине волны 450 нм, Высчитывают разность показаний оптической плотности между опытом и контролем, результат умножают на 1000 получают количество ЦИК в 100 мл сыворотки крови, За положительный результат принимают значения более 156 единиц.

Определение НЕСК, основным компонентом которых являются иммуноглобулины M и G, ЦИК грубодисперсные белки, проводят исследуя свежую сыворотку крови. К 0,5 мл сыворотки добавляют 4,5 мл дистиллированной воды, через 30 мин измеряют оптическую плотность нефалометрически при 400 нм на ФЭК (кювета 10 мм) против воды. Затем добавляют 0,13 мл 1 M

NaCI (êîíå÷íaÿ концентрация 0,025 M), затем еще 0,26 мл этого же раствора (0,072 М), через 10 мин после каждого добавления

NaCI учитывают убыль оптической плотности. Величина, на которую уменьшилась плотность после первого добавления NaCI соответствует 1 и 2 фракции НБСК. Фракцию 3 получают после добавления 0,52 мл 1

M NaCI (0,154 M — физиологическая система). Величина, на которую уменьшилась оптическая плотность после третьего добавления соответствует третьей фракции

НЕСК. При расчете суммы трех фракций

HECK остаточную оптическую плотность не учитывают. Единицы оптической плотности переводят в условные единицы умножением на 1000. За положительный результат принимают значения более 17 ед.

Для определения B-лимфоцитов в функции тимуса исследуют венозную гепаринизированную кровь: в пробирку с 50 ед гепарина забирают 2 мл из локтевой вены перемешивают кровь и выделяют лимфоциты на градиенте плотности фиколл-гипак (Pharmacla Швеция), плотность 1,077, наслаивая на 2 мл фикола 4 мл разведенной 1: 1 раствором Хенкса крови. Пробирки центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин (400) после чего извлекают лимфоциты из интер фазы и отмывают раствором Хенкса 2 раза по 10 мин при 100 об/мин, Концентрацию клеток доводят до 2 — 4 Х10 /мл средой 199, Определение В-лимфоцитов проводят методом розеткообразования с эритроцитами барана в системе EAC-РОК. Для приготовления ЕАС-комплексов смешивают 1 мл

1 % эритроцитов барана и 1 мл кроличьей гемолитической антисыворотки против эритроцитов барана в суббагглютинирующем разведении, Смесь инкубируют 40 мин при 37 С, осторожно встряхивая каждые 10 мин, После чего эритроциты 3 раза отмывают раствором Хенкса при 1500 об/мин 10 мин, Супернатант отбрасывают, а к осадку добавляют первоначальный объем раствора

Хенкса и равный объем мышиной сыворотки, содержащей комплемент в разведении 1

: 10, Смесь инкубируют при 37" С в течение

30 мин, вновь отмывают 3 раза раствором

Хенкса готовят 0,5 . суспензию эритроцитов. Далее к 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют 0,1 мл сенсибилизированных эритроцитов (соотношение эритроцитов к пимфоцитам 20; 17) инкубируют 45 мин при

37 С, после чего 30 мин в холодильнике и

"5 производят подсчет лимфоцитов, присоединивших 3 и более эритроцитов. Результат выражают в %. За положительный результат принимают значения выше 12,7 %

Определение функции тимуса проводят

20 после выделения лимфоцитов как описано выше. В пробирку ¹ 1 и ¹ 2 наливают по

0,2 мл 2 X 10 суспензии лимфоцитов, добавляют 0,2 мл 0,5 % взвеси эритроцитов барана, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, затем пробирку № 1 — тотальные Е-РОК— помещают в холодильник на 18 ч, а пробирку

N 2 — комплексные E-РОК вЂ” в термостат при

37 С на 1,5 ч, после чего суспендируют энергичным встряхиванием до получения гомогенной взвеси, осаждают при 1000 об/мин — 5 мин и инкубируют 18 часов в холодильнике 40 С. Подсчет Е-РОК производят под микроскопом как и определении

В-РОК. Вычисляют отношение Е- тотальных и Е-комплексным и при снижении отношения количества лимфоцитов по сравнению с нормой определяют снижение функции тимуса. А при повышении отношения и снижения количества лимфоцитов несущих

40 и не несущих Е-рецептор определяют повышенную функцию тимуса. Формула для расчета функции ти муса:

X 66, снижение функŠ— комплексная

45 ции тимуса принимают при значении менее

0,75.

Полученные значения 5 параметров подставляют в формулу;

Х = 0,944 ХА1+ 0,013 X А2 + 0,083 X

X Аз - 0,046 X А4 — 0,22 х А5 - 3,41, где А1 — уровень СРП (мм)

А2 — уровень ЦИК {усл. ед.)

A3 — уровень В-лимфоцитов (%)

А4 — уровень НЕСК (усл. ед. j

As — функция тимуса

1807413

Формула изобретения

X = 0,944 X 1+ 0,013 х 78 + 0,083 х х 3 - 0 046 X 10 - 0,22 х 2,16 - 3,41

X = 0,944 X A> + 0,013 X А2 - 0,083 х хАз — 0,046 х А4 — 0,22 X Ag - 3,41

X = 0,944 х 4+ 0 013 х 206+ 0,083 х х18-0,046 х29,5-0,22 х0,355-3,41

Х =+ 3,1, что свидетельствует о наличии у больной диагноза РА, Данные клинического обследования больной (утренняя скованность. симметричСоставитель Л,Сергеева

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Н.Кешеля

Редактор С.Кулакова

Заказ 1377 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

+ 0,944. + 0,013, + 0.083, - 0,046, - 0,22,—

3,41 — выявленные коэффициенты соответственно к А1, А2. Аз, А4, Ав и при.значении X

1 менее О диагностируется ПА. а при значении

Х более 0 диагностируется РА.

Способ иллюстрируется следующим образом, Пример 1, Больная К„40 лет, страдает полиартритом в течение 6 месяцев. Показатели иммунной системы: СРП 1 мм; ЦИК

79 ед.; В-лимфоциты — 3 ; НБСК вЂ” 10 ед,; функция тимуса — 2,16. Подставка значения показателей в формулу получаем:

Получают значение X = -2,13, что указывает на принадлежность больной к группе больных ПА, Из анамнеза выявлено, что больная в течение 12 лет страдает кожными проявлениями псориаза, что подтверждено наличием псориатических бляшек.

Пример 2. Больная Н„68 лет, страдает полиартритом в течение 3 лет, Показатели иммунной системы; СРП 4 мм: ЦИК 206 ед.; В-лимфоциты 18 %; HECK 29,5 ед„функция тимуса 0,335. Используя формулу получаем: ный артрит пр0ксимальных межфаланговых суставов), а также наличие ревматоидного фактора в крови в титре i/64 подтверждают правил -ность расчетов по формуле.

5 Предложенный способ дифференциальной диагностики применен у 10 больных, в . 100 случаев было распознано то или иное заболевание, т. е. ПА или PA. По сравнению с прототипом увеличивается точность спо10 соба при осуществлении дифференциальной диагностики ПА и РА, 15 Способ дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артрита, включающий забор крови, определение циркулирующих иммунных комплексов, уровень С-реактивного белка, о т л и ч а ю щ и и

20 с я тем, что, с целью повышения точности диагностики, в крови дополнительно определяют уровень нерастворимых белков сыворотки крови, В-лимфоуитов и функцию тимуса, рассчитывают дифференциальный

25 показатель по формуле где Х вЂ”; А1— уровень С-реактивного белка; А2 — количество циркулирующих иммунных комплексов;

Аз — количество В-лимфоцитов; А4 — уровень

35 нерастворимых белков сыворотки крови; А5 — функция тимуса, (и при X меньшем 0 диагностируют псориатический артрит, а при X большем 0 — ревматоидный артрит,