Способ определения генеза желтухи

Способ определения генеза желтухи

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для дифференциальной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза. Цель изобретения - упрощение способа дифференциальной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза. Сущность изобретения состоит в исследовании сыворотки крови, которой пропитывается фильтр из бумаги для электрофореза, диаметром 25-30 мм, в центр его наносится 0,01 мл азотной кислоты с присутствием азотистой и при появлении в течение первой минуты на месте нанесения окислителя окраски оттенков от красного до сиренево-фиолетового диагностируют вирусный гепатит, а при появлении в центре нанесения бирюзовой окраски - опухолевую желтуху. Изобретение предназначено для экспресс диагностики в эпидемических очагах. ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4667028/14 (22) 27.03.84 (46) 30.04,93. Бюл. М 16 (71) Нижегородский медицинский институт им. С.М.Кирова, Институт прикладной физики АН СССР (72) С.М. Горский, К.В.Ильичева и.С.Н.Сори нсон (56) Руководство к клиническим и лабораторным исследованиям.М: Медицина, 1960,: с. 375.

А.с. СССРНГ 830682, кл, А 61 В 10/00, 1979, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНЕЗА

ЖЕЛТУХИ (57) Изобретение относится к медицине, э именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для дифференциаль Изобретение относится к медицине, э именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для дифференциальной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза.

Цель изобретения -упрощение способа и возможность экспресс.-диагностики.

Поставленная цель достигается тем, что предлагаемый способ включает исследование сыворотки крови путем пропитывания ею фильтра из бумаги. для электрофореза диаметром 25-30 мм. В центр пропитанного таким образом фильтра найосят 0,01 мл азотной кислоты желтой от присутствия азотистой. При появлении в течение первой минуты в месте нанесения капли оттенков от красного до сиренево-фиолетового диаг,, Ы, „1812491 А1

2 ной диагностики желтух опухолевого и вирусного генеза. Цель изобретения — упрощение способа дифференциальной диагностики желтух опухолевога и вирусного генезэ. Сущность изобретения состоит в исследовании сыворотки крови, которой пропитывается фильтр из бумаги для электрофореза, диаметром 25-30 мм, в центр его наносится 0,01 мл азотной кислоты с присутствием азотистой и при появлении в течение первой минуты на месте нанесения окислителя окраски оттенков от красного до сиренево-фиолетового диагностируют вирусный гепатит, а при появлении в центре нанесения бирюзовой окраски— опухолевую желтуху. Изобретение предназначено для экспресс- диагностики в эпидемических очагах.

° пил

СО ностируют вирусный гепатит, при появле- в нии бирюзовой окраски — опухолевую желтуху, Изобретение основано на установлении того, что сыворотка крови и моча больных О вирусными гепатитами и опухолевыми желтухами различным образом реагирует на азотную кислоту желтого цвета от присутствия азотистой. При вырусных гепатитах в д центре фильтра, пропитанного биологической жидкостью больного, через 1 — 2 мин после нанесения 0,01 мл окислителя появляется окраска оттенков от красного до фиолетово-сиреневого, При опухолевой желтухе в центре нанесения капли моментально развивается окраска бирюзово-лазурного цвета, т.е, в любом случае наблюдается

1812491 появление колец, расходящихся от центра к периферии, которые не смешиваются, т.к. идет постоянный форез. Реакцию следует

"читать" в первые минуты (не позднее 5 — 6-й мин), ее скорость и интенсивность окраски колец зависит от концентрации фракций.

Таким образом, установлено, что дифференциальный диагноз желтухи опухолевого и вирусного генеза можно проводить по реакции биологической жидкости (сыво- 10 ротка крови, моча) с азотной кислотой желтого цвета от присутствия азотистой, Ранее азотная кислота с присутствием азотистой использовалась в лабораторной диагностике при исследовании мочи на би- 15 лирубин — проба Гмелина, Реакция описана следующим образом: после нанесения смеси азотной и азотистой кислот вокруг капли образуются концентрические кольца: снаружи зеленое, затем кнутри синее, фйолето- 20 вое, красное. Для желчных пигментов характерно зеленое. Хилизм реакции за-. ключается в окислении билирубина до биливердина.

В предлагаемом способе по истечении 25

8-10 мин после нанесения капли в реакцию включаются билирубин и другие пигменты, о чем свидетльствуют внешние круги зеленого и голубого цветов. Чтобы этого избежать, экспериментально подобраны обьем 30 исследуемого образца, окислителя, а также диаметр, фильтр и время "чтения" реакции.

Для анализа выбрана непроклеенная бумага для электрофореза с характеристиками: масс 1 кв.м. 245 + 15 г, толщина 35

44 +3 мкм, капиллярная всасываемость при поперечном направлении 80 + 7 мм, впитываемость при погружении менее 2 с. Все характеристики приведены для воды. При анализе сыворотки крови приходилось учиты- 40 вать, что она содержит крупные молекулы би- ологических соединений, в частности пигменты — цейи молекул, упакованные в особые "упаковки". Поэтому, чтобы бумага пропитывалась сывороткой максимально, 45 выбрано время, равное 10-15 мин. flo истечении этого времени объем остаточной капли варьировал в пределах 0,02-0,15 мл, что зависело от состава сыворотки крови. При времени меньше 10 мин разброс был значи- 50 тельно большим (0,05-0,2 мл).

Обьем 0;01 мл кислоты определен путем расчета; т.к. допустимый уровень содержания фракций известен.

Концентрация 9-8,5 ИНМОз соответст- 55 вует концентрированной кислоте. Коммерческая кислота имеет плотность t,37-1,405 г/см и соответственно концентрацию 616S при таких характеристиках пределы колебаний нормальности 8,95 — 8,52. Выбирают эти значения в пределах 9,0-8,5. Концентрация азотистой кислоты не определяется, поэтому указывается только цвет(желтая от присутствия азотистой).

Выбранный объем окислителя 0,01 мл, при его нанесении на фильтр форезировал от центра на радиус 8 мм (соответственно диаметр 16 мм) за 5 мин, на 6-й мин этот круг начинал сужаться, (улетучивалась вода). При нанесении этого же объема кислоты на фильтр, пропитанный дистиллированной водой, диаметр круга достигал 22 мм, а в отдельных случаях 30 мм. Т.к. объем и концентрация были уже выбраны, то выбрали фильтр диаметром 25-30 мм.

При выборе обьема исследуемого образца исходили из следующего: концентрация уробилина в крови очень низка. 5 мл сыворотки крови в патологии могут содер= жать максимально 17,2 мкг и минимально, 5,2 мкг фракции —,уробилина, а 0,5 мл—

1,72 — 0,52 мкг. Это минимальное предельное количество сыворотки, определяемое чувствительностью ю метода.

Для анализа большего объема сыворотки необходимо увеличивать диаметр фильтра и объем окислителя. Возрастает и время реакции.

Учитывая, что на. 7-8 мин в реакцию вступают пигменты-билирубин, биливердин, что приведет к появлению дополнительных колец, то "чтение" фореграммы с целью выделения истинных уробилинов будет затруднено. Сохранение диаметра фильтра и обьема окислителя при увеличении обьема сыворотки крови приведет только к увеличению объема невпитавшейся сыворотки, Т.к. авторы стремились сокра-. тить обьем исследуемой сыворотки крови, то выбрали его равным 0,5 +. 0,05 мл, В центр пропитанной таким образом бумаги наносится капля азотной кислоты желтого цвета от присутствия в ней азотистой и по появлению концентрических колец последовательно: бирюзового, далее всех оттенков от красного до фиолетового и желтого (центре, всех вместе или какого-то одного, судят о присутствии всех или одной из фракций.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

В центр фильтра из непроклеенной бумаги диаметром 25-30 мм на горизонтальном столике для равномерного пропитывания, находящемся в чашке Петри и предварительно смоченным дистиллированной водой, наносится 0,5 мл исследуемой сыворотки крови. Фильтр пройитывается

10-15 мин, оставшаяся, невпитавшаяся сы1812491 воротка крови стряхивается, а фильтр поме- (60 ). На основании других лабораторных щается на горизонтальное стекло. В центр исследований и.клинических данных, поего наносится 0,01 мл азотной кислоты жел- ставлен диагноз: вирусный гепатит, типичтого цвета от присутствия азотистой. Азот- ное течение, желтушная форма. ная кислота в качестве окислителя вместо 5 Тихообразова А,В., 70 лет, история боЕеОз взята, как наиболее сильный и практи- лезни М 1603 чески бесцветный окислитель. Окраска раз- Диагноз при поступлении — механичевивается в первые же секунды. Появление ская,желтуха, желчно-каменная болезнь. на фильтре лазурной окраски (только одной) Для биохимического исследования вэяили с последующим кольцом всех оттенков 10 та кровь из вены, 0,5 мл сыворотки крови красного и фиолетового цветов свидетель- взято для исследования по предлагаемому ствуето наличии одной фракции 0-уробили- способу. Этот объем пипеткой наносится на на или 0-и J-уробилина, Наблюдая реакцию фильтр, расположенный в чашке Петри на в динамике(2-3 исследования с интервалом горизонтальном столике ф дн) при постоянном присутствии отме- 15 вается 10 мин. Остаток сыворотки стряхиваченных колец диагностируют опухолевую ется и фильтр помещается на с . В ту у, р исчезновении кольца лазурной центр пипеткой наносится 0 01 и текло. ок эски ви ны мл азотно р русныи гепатит, атипичная фор- кислоты желтого цвета от присутствия азома с холестатическим компонентом, При тистой. В первые же секунды в центре появпоявлении на фильтре только колец с от- 20 ляется лазурно-бирюзовое пятно и тенками красного и фиолетового цветов — сиреневое кольцо вок г.2-я ми диагности ют ви ная о ма. т руют вирусныи гепатит, типич- сиреневое кольцо растет, пятно расте а ф р . О сутствие этих колец, нали- лазурно-бирюзовым внутренним коль ом, в к ется чие только желтого пятна свидетельствует центре белое пятно (коагулировавший бестан в о физиологической норме или полном вос- 25 лок), 3 мин — картина много ярче. Н 6-й о лении функции печени после перене- во внешнем круге после си енев г рч. а - мин сенного ви сног г л иреневого кольца спо ру го гепатита. Предлагаемый намечается бирюзовое кольцо что соб может быть использован как для вается как продукт окисления фракции Jдифференциальной диагностики, так и для уробилина при его избытке. "Чтение" ранней диагностики вирусных гепатитов в 30 реакциидалоследующийрезультат:данный зпиднеблагоприятных регионах для скри- образец сыворотки крови содержит две фракции уробилина О и J. Спектральный

Примеры конкретного использования анализ показал уровень фракции О-уробиданы в виде выписок из историй болезни. лина 38), J-уробилина 52 . Н

Липи с Н.П. Ист илина . а основании ду .. стория болезни f4 1379. 35 этих и других клинических данны б и

Диагноз: и и пос пл

Д . р ту ении и выписной — ви- поставлен диагноз рак гепатодуоденальной русный гепатит, острая жел шная р лтушная форма. эоны, больная переведена в хирургический

Для подтверждения диагноза взята стационар. кровь из вены для проведения унифицированных лабораторных исследований, в том 40 Демин Н.И. Истор б hh 1593 редлагаемым способом, Фильтр, по- Диагноз: вирусный гепатит, Больном (пемещенный в чашк Пет и асп л у етри, расположенную ред выпиской) из вены для контрольного . н и гепатит, ольному (пегоризонтально, пропитывается 0,5 сыворот- анализа взята кровь. И 0,5 ки крови в течение 10 мин. Оставшаяся сы- исследования предложенным способом. На воротка стряхивается, Фильтр помещается 45 фильтр, находя ий П на стекло, в центр пипеткой наносится 0,01 ризонтальном столике наносится 0,5 мл сымл, азотной кислоты цвета от присутствия воротки крови. Фильт и о азотистой. В пе вые же 30 р е с, на месте нане- течение 12 мин, невпитавшуюся сыворот сения окислителя развивается р фиолетовое крови удаляют на край чашки. Фильтр помеотку мин пятно пятно с сиреневыми вкраплениями, через 1 50 щается на горизонтальное стекло растекается в виде кольца, а в наносится 0,01 мл окислителя. В первые же ., в центр оявляется елое пятно (коагулируюцентре появляется желтое пятно. Через 2 30 с появляется б ( мин — все цвета более яркие, 5 мин картина. щий белок), только к кон 3-й цу - мин на месте ния" фо ег аммы мо н с вживается. На основании "чте- нанесения кислот ра в р эвивается слабая желный об аэ

" ф реграммы можно сказать, что дан- 55 тая окраска что свидетельс е р ец сыворотки крови содержит концентрации стеркобилина и полном восфракцию -уробилина и стеркобилин, что . становлении функци ха акте из ет ви н р р у т вирусныи гепатит, типичное сенного гепатита. Спектральный анализ течение. Спектральный анализ показал присутств J- б (40 ь) ие -уро наина (Я и стеркобилнна выписан. р - подтвердил полученный результат. Больной

7 1812491

Составитель С. Горский

Техред М. Моргентал Корректор Н. Ревская

Редактор

Заказ 1573 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

1.13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г; УжгороД, ул.Гагарина, 101

Таким образом, в первой и третьей сыворотках крови анализ на фракционный состав уробилина подтвердил клинический диагноз, а во второй было показано онкологическое заболевание, больная переведена .в специальный стационар.

Всего с помощью предлагаемого способа обследовано 20 сывороток крови здоровых людей, 75 больных вирусными гепатитами в разные сроки болезни, с типичным цитолитическим и античным холестатическим течением болезни и 50 сывороток крови больных с желтухой опухолевого происхождения. Во всех случаях диагноз подтверждался.

Способ отличается простотой исполнения„зкспрессностью, не требует специального оборудования, подготовки, обеспечивает скрининг.

Формула изобретения

Способ определения генеза желтухи пу5 тем биохимического исследования крови, о т л и. ч- а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа дифференцированного опухолевого и вирусного генеза при экспрессном обследовании в эпидемических

10 очагах, сйворотку крови наносят на гигроскопическую белую бумагу, затем наносят каплю 61-68®-ной азотной кислоты и при появлении в течение первой минуты окраски or красной до сиренево-фиолетовой оп15 ределяют желтуху вирусного генеза, а при появлении ll центре нанесения кислоты бирюзовой окраски — опухолевого генеэа,