Способ определения иммуногенности противочумных вакцин

Способ определения иммуногенности противочумных вакцин

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: медицинская микробиология . Сущность изобретения: на 6-8 сут после подкожной иммунизации перитонеальные макрофаги экспериментальных животных разделяют на субпопуляции методом адгезии в градиенте температур 2,10, 28 и 37°С, определяют соотношение между субпопуляциями, полученными при 37°С и 2°С и по величине этого соотношения судят об эффективности иммунизации. 3 табл,

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 Q 1/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) а "@@ар

ОП И САН И Е ИЗОБРЕТЕ Н ИЯ;-„ -,, ..""," àì

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4878651/13 (22) 29.10,90 (46) 30.05.93. Бюл. М 20 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Г.И,Васильева, Л.Н.Ткаченко, Е.П.Дорошенко, А.К.Киселева, Х.П.Гамлешко и Л.М,Веркина (56) Проблемы особо опасных инфекций, 1972, М 6, с. 126 — 127. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОСТИ ПРОТИВОЧУМНЫХ ВАКЦИН (57) Использование: медицинская микробиология. Сущность изобретения: на 6 — 8 сут после подкожной иммунизации перитонеальные макрофаги экспериментальных животных разделяют на субпопуляции методом адгезии в градиенте температур 2, 10, 28 и 37 С, определяют соотношение между субпопуляциями, полученными при 37 С и

2 С и по величине этого соотношения судят об эффективности иммунизации. 3 табл, В

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам определения эффективности иммунизации против чумы.

Целью изобретения является ускорение способа оценки эффективности иммунизации против чумы, экономия экспериментальных животных и упрощение исследования (исключение необходимости работы с вирулентным штаммом чумного микроба).

Это достигается определением соотношения субпопуляций перитонеальных макрофагов на 6 — 8 сутки после иммунизации экспериментальных животных подкожно в область верхней трети бедра.

Для этой цели перитонеальные микрофаги опытных и контрольных животных разделяют на отдельные субпопуляции методом адгезии в градиенте температур.

Разделение осуществляют последовательно при четырех температурах (2, 10, 28 и

37 С соответственно), при которых,как показали наши предварительные исследования, происходит наиболее четкое разделение на субпопуляции, обладающие

„„Я2„„1818348 А1 разнонаправленной активностью при взаимодействии с чумным микробом. Монослои субпопуляций макрофагов, полученные при

2 С (А) и 37 С (Д) промывают культуральной средой, смывают с поверхности чашей, подсчитывают концентрацию клеток в камере

Горяева и определяют соотношение между субпопуляциями Д и А, условно названные нами индексом распределения субпопуляций(ИРС). ИРС=Д/А, гдеДи А- концентрация клеток субпопуляций Д и А соответственно.

В контроле ИРС< 1. Чем эффективнее иммунизация, тем выше ИРС. В случае выживания всех животных () = 1) ИРС > 15, Пример 1. На 6 сутки после подкожной иммунизации морских свинок.. Y. pestic ЕУ в дозах 1х102 — 1х10 м.к, перитонеальные макрофаги опытных и контрольных животных наносили на чашки из полистирола, предварительно обработанные бычьим сывороточным альбумином(БСА) и после инкубации при 2 С в течение 30 мин суспензию неприлипших клеток переносили на другие чашки, которые затем инкубировали 30 мин при 10 С, Эту процедуру адгезии-смыва по1818348

Таблица 1 вторяли при температуре 28 и 37 С. Монослои субпопуляций макрофагов, полученные при 2 и 37 отмывали в 4-х порциях культуральной среды для удаления неприкрепившихся клеток, снимали с поверхности чашек резиновым шпателем, определяли концентрацию клеток в камере Горяева и подсчитывали индекс распределения субпопуляций макрофагов (ИРС) по формуле:

ИРС - Д/А, где А и Д вЂ” субпопуляции макрофагов, выделенные при 2 и 37 С соот. ветственно. Статистическую обработку результатов исследования проводили методом доверительных интервалов с помощью таблиц Стрелкова.

Параллельно определяли иммуногенность препаратов по индексу эффективности иммунизации ф):I -Ь/и, где Ь вЂ” количество выживших после заражения, à n — общее число взятых в опыт животных. Полученные данные представлены в табл.1.

Иэ табл 1 видно, что эффективность иммунизации, оцениваемая в опытах ин витро с помощью предлагаемого способа соответствует индексу эффективности иммунизации, рпределяемому в опытах заражения иммунизированных животных вирулентным штаммом чумного мликроба. Изученная субкультура Y. резбз ЕУ обеспечивает резистентность экспериментальных животных к чуме в дозах 1x10 — 1х10 м.к.

П риме р 2. Условия опыта те же, что в примере 1, Изменен только срок взятия макрофагов, Он составляет 7 суток. Иммунизацию проводили антигеном Р! В в дозах

6-400 мкг. Полученные данные представле.ны в табл.2.

Иэ табл.2 видно, что эффективность иммунизации оцениваемая в опытах ин витро с помощью предлагаемого способа (ИРС), соответствует индексу эффективности иммунизации, определяемому в опытах заражения иммунизированных животных вирулентным штаммом чумного микроба.

Антиген FIB без адъюванта не защищает экспериментальных животных от чумы.

Пример 3. Условия опыта те же, что в

5 примере 1. Изменен только срок взятия макрофагов. Он составляет 8 сут. Иммунизацию проводили антигеном FIB в неполном адъюванте Фрейнда (НАФ). Полученные данные представлены в табл.3.

10 Иэ табл,3 видно, что эффективность иммунизации, оцениваемая в опытах ин витро с помощью предлагаемого способа (ИРС), соответствует индексу эффективности ммунизации, определяемому в опытах за15 ражения иммунизированных животных вирулентным штаммом чумного микроба, Антиген FIB в НАФ обеспечивает резистентность к чуме в дозах 25-100 мкг.

Предлагаемый способ дает возможность быстро определить эффективность иммунизации и иммуногенность препаратов, применяемых для профилактики чумы, в 8 раз сокращает сроки исследования. в

10 раз уменьшает количество испольэуе2б мых животных, исключает необходимость работы с вирулентным штаммом чумного микроба и содержания животных в заразноэкспериментал ьном отделе, Формула изобретения

Способ определения иммуногенности противочумных вакцин путем подкожной иммунизации исследуемой вакциной экспериментальных животных и оценкой результатов, отличающийся тем, что, с целью

35 ускорения и упрощения способа, на 6-8-й сутки после иммунизации. выделяют перитонеальные макрофаги, разделяют их на субпопуляции адгезией в градиенте температур 2, 10, 28 и 37ОС, определяют величину

40 соотношения между субпопуляциями, полученными при 37 и 2 С, а иммуногенность вакцины оценивают по величине этого соотношения.

1о18348

Таблица 2

Таблица 3

Составитель Л. Веркина

Техред M.Ìîðråíòàë Корректор М, Куль

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101. Заказ 1926 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5