Способ получения инактивированного антигена вируса бешенства для постановки серологических реакций

Способ получения инактивированного антигена вируса бешенства для постановки серологических реакций

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Область использования: ветеринария, вирусология Сущность изобретения: предложен способ инактивации вируса бешенства акролеином в концентрациях 0,5% при 22°С в течение 60 мин или 1% при 37°С в течение 30 мин. Предлагаемый способ инактивации позволяет получить антиген вируса бешенства утрачивающий инфекционность и сохраняющий специфическую активность в серологических реакциях энзим-меченых антител и длительного связывания комплемента . 2 табл

СОЮЗ СОВЕ ТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si)5 А 61 К 39/205

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) .;; .АЗИИ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4914516/13 (22) 25.02.91 (46) 30.06.93. Бюл. ¹ 24 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт (72) Н.А.Хисматуллина, Р,X,Þñóïos, К.Ф.Бусыгин, Н,Я,Зуева и Н,К.Гизатуллина (56) Селимов M.À., Морогова В,М, В кн.: Методы лабораторных исследований по бешенству. 3-е изд, Женева, 1975, В03, с. 201. (54) СПОСОБ, ПОЛУЧЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОГО АНТИГЕНА ВИРУСА БЕШЕНСТИзобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к способу получения неинфекционного антигена вируса бешенства животных, и рекомендовано для использования егоs иммунобиологических реакциях, например в реакции энзим-меченых антител (РЭМА), в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) и других.

Целью изобретения является разработка способа получения неинфекционного антигена вируса бешенства, исключающего риск заражения бешенством лабораторных работников, обладающего высокой иммуногенной активностью для использования его в иммунобиологических реакциях: РЭМА, РДСК и др.

Цель достигают путем инактивации суспензии вируса бешенства акролеином — химическим соединением щадящего действия на вирус в концентрации 0,5-17. Акролеин (акриловый альдегид, пропенал) с химической формулой СНз = СНСНО представляет

„„сЫ„„1824196 А1

ВАДЛЯ ПОСТАНОВКИ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ

РЕАКЦИЙ

I (57) Область использования: ветеринария, вирусология. Сущность изобретения: предложен способ инактивации вируса бешенства акролеином в концентрациях: 0,5% при

22 С в течение 60 мин или 1", при 37 С в течение 30 мин. Предлагаемый способ инактивации позволяет получить антиген вируса бешенства, утрачивающий инфекционность и сохраняющий специфическую активность в серологических реакциях энзим-меченых антител и длительного связывания комплемента. 2 табл. собой бесцветную жидкость с молекулярным весом 56,07, легко воспламеняющуюся. с температурой кипения 52,5 С, растворяющейся в зтаноле, эфире, воде (407).

Пример 1. Антиген вируса бешенства получают из мозга зараженных белых мышей вирусом бешенства шт, Овечий ГНКИ, полученным из Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов (паспорт от

21.И.1981 г. прилагается), Результаты титрования вируса бешенства шт. Овечий

ГНКИ до инактивации представлены на табл. 1.

Последовательная технология получения антигена.

Для приготовления инактивированного антигена вируса бешенства используют следующую методику. Мозг экспериментально зараженных белых мышей штамм "Овечий"

ГИКИ тщательно растирают в ступке пестиком и готовят 107ь-ную суспензию на 0.85$1824196

Формула изобретения

Способ получения инактивированного антигена вируса бешенства для постановки серологических реакций, включающий получение суспенэий иэ мозга белых мышей, экспериментально зараженных вирусом бешенства — штамм овечий ГН КИ, инактивирование вируса, отличающийся тем, что, с целью снижения инфекционности антигена вируса и повышения его иммунологической активности, вирусную суспенэию инактивируют 0,5 -ным раствором акролеина при 22 С в течение 60 мин или 1 -ным раствором акролеина при 37 С в течение

30 мин.

Таблица1

П р и м е ч а н и е: П вЂ” пал;  — выжил. Цифры обозначают количество зараженных вирусом бешенства мышей. Титр инфекционности составил в ЛДм/0,03 мл — 10 тз ном растворе хлорида натрия. Суспензию зкстрагируют в течение 18 ч при 4 С, центрифугируют.при 3000 об/мин в течение 15 мин. В надосадочную вируссодержащую жидкость добавляют 0,5 акролеина. если инактивируют при 22 С, в течение 4 часов, и 17ь акролеина, если инактивируют при

37 С в течение 30 мин, Пример 2. Опыты по определению иммунологической активности антигена в зависимости от концентрации акролеина, времени инактивации и температуры. Результаты представлены в табл. 2, Из таблицы следует, что оптимальная концентрация акролеина, надежно инактивирующая вирус бешенства при 22 С в течение 1 — 4 час, составляет 0,5, а при 37 С в течение 30 мин — 1 . Титр инактивированного акролеином антигена вируса бешенства в РЭМА составляет 1:3200 (0,5 o, 22 С, проба М 4) и 1:6400 (1, 37 С, проба N 14), Из таблицы видно, что при тепловой инактивации антигена активность его в

РЭМА и РДСК снижается в 4-8 раз по сравнению с предложенным способом инактивации. Титр вирусного антигена в

РЭМА при тепловой инактивации составил

1:800 (Ксп = 2,58).

При инактивации фенолом не обеспечивается полная утрата инфекционности вируса бешенства (пробы 11 и 25), а также снижается активность антигена вируса бешенства в серологических реакциях, Титр антигена в РЭМА составил 1:800 (проба М 26).

Инактивация акролеином антигена вируса бешенства позволяет испольэовать этот антиген в РДСК, т,к, после инактивации антиген не обладает антикомплементарными свойствами и его активность снижается очень незначительно(пробы с 16 по 20, с 24 по 26 и 31).

Пример 3. Опыты по определению безвредности, токсичности акролеина.

Для определения безвредности и токсичности акролеина 10 ),-ную взвесь мозга от клинически здоровых мышей обрабатывали акролеином в концентрации 4 и вводили интрацеребрально по 0,03 мл 10 белым мышам. Белые мыши в течение наблюдения эа ними 25 дней были внешне здоровы, что свидетельствует о безвредности и отсутствии токсичности акролеина, Технико-экономическая эффективность изобретения заключается в том, что: а) разработан простой и технологичный по исполнению способ приготовления инактивированного акролеином антигена вируса бешенства; 6) указанный способ дает возможность получить антиген с высоким титром в РЭМА (1:3200 — 1:6400) в отличие от прототипа (1:800); в) приготовленный антиген неинфекционен и, следовательно, безопасен при использовании его в иммунобиологических тестах; г) приготовленный антиген может быть применен в РЭМА, РДСК и других серологических реакциях.

1824196

Биопроба

Титр антигена

Условия инактивации

РДСК пало

РЭМА доэв, (Ксп выжило температура время, ч

22 С

О

2,3

1:3200

0,2 н. и.

N И и е н. и, 10

1О

1О

2,4

1:1600

It Н

И N И N

5

7

8 н, и.

2,0

2,05

2,0

2,24

1:3200 н и

0,5

Н Н I н. и, 2

4 и и и и и и и и

« н. и.

N И

tt и и и н. и.

0 и н н. и. фенолом (прототип) 1:1600

0,5

3,4 и !е

1,0 н. и. н. и, 2,09

1,0

2,0

4,0 и

11 н. и. н. и, 3,1

3,4 и н н. и.

П It н. и.

37 С

Н Н

1 3200

0,04

О

0 н. и.

0,1

13 н. и.

1:6400

1: 160

П °

1,0

0,5 и

14

1:160

1,0

10 и и и и

tl И

1; 160

10, 10

1.0

2,0

0

N N Н I и

4,0 п н ее н

«и

1,0

2,0

2,0 и и и и

0

О

О

19

21

22

23

1 ° И

4,0

° и

И N

1:3200

4,0

0,5

N Н N N н, и, 1,0

2.0

4.0 и и п

N» и и п и н. и.

tl Н П П

° I И и и

Н N н. и, 1:160

» п

° Н Н 1 и и

24

1:800

N N

2,37

56 C и

40 мин

2,58

10 и»

37 С 1:3200 (контроль) 0.5

10 н. и.

1:80 и и е п

28 и и и»

1,0

2,0

f4 Вирус бешенстпроб ва, шт. НОвечий" ГНКИ инактивированный: акролеином (опыт) акролеином (опыт) фенолом (прототип) нагреванием (аналог) 27 без инактивации

\ 1

1,0

2,2

2,2

2,0

2,09

2,09

2,09

2,14

2,09

2,13

3,1

2.58

2,06

2.09

Таблица 2

1824196

Продолжение табл. 2

Составитель Я. Крылов

Техред М.Моргентал Корректор Г, Кос

Редактор Л. Павлова

Производственно-издательский комбинат -Г1этент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2204 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5