Способ извлечения эстрогенов

Способ извлечения эстрогенов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности , и касается способа извлечения эстрогенов. Целью изобретения является повышение эффективности извлечения . Сущность изобретения заключается в том, что подвергают кислотному гидролизу соляной кислотой воздушно-сухой сапропель при соотношении 1:1, оставляют на сутки, затем нагревают в течение часа на водяной бане и затем трижды экстрагируют спирто-эфирной смесью при соотношении 1:1, затем экстракт обезвоживают сульфатом натрия, выпаривают досуха и растворяют в этиловом спирте, а разделение проводят на незакрепленном слое окиси алюминия в системе хлороформ - этанол в соотношении 9:1. Положительный эффект заключается в том, что предлагаемый способ позволяет четко получить индивидуапьные эстрогены.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5 )5 А 61 К 35/10

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4919516/14 (22) 15.03.91 (46) 07.07.93. Бюл. М 25 (72) M.Ã.×åðíèõîâñêàÿ и Н.А.Волкова (73) M.Ã.×åðíèxoâñêàÿ

{56) П.Владев-Иорданова, Химические исследования экстрогеннодействующих веществ в некоторых наших пелоидах. София, НИИ курортологии и физиотерапии, труды института, 1962, М 22, с. 53-55. (54) СПОСОБ ИЗВИЕЧЕНИЯ ЭСТРОГЕНОВ

{57) Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа извлечения эстрогенов. Целью изобретения является повышение эффективности извлеИзобретение относится к лекарственным препаратам и может быть использовано для извлечения экстрогенов из сапропеля.

Цель изобретения — повышение эффективности способа.

Поставленная цель достигается тем, что в способе извлечения эстрогенов иэ лечебных грязей, заключающемся в том, что исходный продукт подвергают экстракции, для чего его смешивают с зкстрагирующим веществом, а после экстракции производят разделение и идентификацию эстрогенов, в качестве исходного продукта используют воздушно-сухой сапропель, который перед экстракцией подвергают кислотному гидролизу, для чего заливают его концентрированной. соляной кислотой при соотношении масс 1:1, тщательно перемешивают и оставляют на сутки, после чего нагревают в тече„„ „„1826908 АЗ чения. Сущность изобретения заключается в том, что подвергают кислотному гидролизу соляной кислотой воздушно-сухой сапропель при соотношении 1:1, оставляют на сутки, затем нагревают в течение часа на водяной бане и затем трижды экстрагируют спирто-эфирной смесью при соотношении

1:1, затем экстракт обезвоживают сульфатом натрия, выпаривают досуха и растворяют в этиловом спирте, а разделение проводят на незакрепленном слое окиси алюминия в системе хлороформ — зтанол в соотношении 9: f. Положительный эффект заключается в том, что предлагаемый способ позволяет четко получить индивидуальные эстрогены, ние часа на водяной бане, после остывания полученную массу трижды экстрагируют спирто-эфирной смесью при отношении масс экстрагируемого вещества и спиртоэфирной смеси 1:1, затем полученный экстракт обезвоживают и выпаривают досуха, после чего производят разделение и идентификацию зстрогенов. При этом, разделение и идентификацию эстрогенов производят методом тонкослойной хроматографии, для этого полученный сухой остаток растворяют s этиловом спирте.

Хроматографию проводят следующим образом: стеклянные пластинки покрывают неЗакрепленным слоем окиси алюминия, затем на этот слой микрошприцем наносят стандартные растворы экстрогенов и исследуемый раствор, после чего проводят двукратную разгонку в системе хлороформ— этанол с соотношением масс 9:1 соответст1826908 венно, затем пластины опрыскивают реактивом Фолина-Чиокалтеу и выдерживают в нарах аммиака до появления на них темносиних пятен, по которым и определяют наличие эстрогенов. 5

Положительный эффект достигается благодаря тому, что в качестве исходного продукта в предлагаемом способе извлечения эстрогенов используют сапропель, который на порядок больше содержит 10 органических веществ, чем минеральные лечебные грязи, а именно, в l00 г минеральной грязи содержится 3,0 органических соединения, в то время как в 100 г. сапропеля содержится 80;ь органических соединений.

Это уже заранее обеспечивает повышенную концентрацию эстрогенов в конечном продукте способа, что повышает его эффектив- . ность.

Уменьшение количества примесей в 20 сапропеле достигается благодаря тому, что сапропель перед экстракцией подвергают кислотному гидролизу, для чего заливают его концентрированной соляной кислотой, тщательно перемешивают и оставляют на 25 сутки, после чего нагревают в течение 1 часа в водяной бане. Причем, в качестве исходного продукта берут воздушно-сухой сапропель, для того, чтобы не снизить концентрацию кислоты. ЗО

В результате происходит разрушение карбонатов, содержащихся в сапропеле.

Благодаря тому, что в качестве экстрагирующего вещества в предлагаемом способе используют спирто-эфирную смесь, в кото- ЗБ рой хорошо растворяются эстрогены, это позволяет произвести практически полное извлечение эстрогенов из сапропеля, вэятого в качестве исходного продукта, Полученный экстракт обезвоживают сульфатом 40 натрия и выпаривают досуха. Для разделения полученных эстрогенов и их идентификации в предлагаемом способе используют метод хроматографии .в тонком слое. Для этого сухой конечный продукт растворяют в 45 этиловом спирте, так как он хорошо испаряется. Хроматографию проводят на стеклянных пластинах, покрытых незакрепленным слоем окиси алюминия. Для индентификации полученных эстрогенов на пластинки 50 наносят стандартные эстрогены, Система хлороформ — этанол, с массовым соотношением 9:1 соответственно, как показали эксперименты, позволяет достичь лучшего разделения трех классических эстрогенов. 55

Двукратная разгонка обеспечивает более четкое разделение эстрогенов.

Способ используют следующим образом

В качестве исходного продукта для извлечения эстрогенов в предлагаемом способе используют воздушно-сухой сапропель, что позволяет исключить примеси. содержащиеся в отстойных водах, которые присутствуют в жидком сапропеле. Кроме того, использование воздушно-сухого сапропеля позволяет уменьшить расход реактивов для осуществления способа. Перед экстракцией воздушно-сухой сапропель подвергают кислотному гидролизу, для чего заливают его концентрированной соляной кислотой при соотношении масс 1:1. Тщательно перемешивают и оставляют на сутки. После этого нагревают в течение 1 ч на водяной бане.

После остывания полученную массу экстрагируют трижды спиртно-эфирной смесью при соотношении масс экстрагирующего вещества и спирто-эфирной смеси 1:1. Полученный экстракт обезвоживают сульфатом натрия и выпаривают досуха, после чего производят разделение и индентификацию эстрогенов методом тонкослойной хроматографии. Для этого полученный сухой остаток растворяют в этиловом спирте, стеклянные пластинки покрывают незакрепленным слоем окиси алюминия. На этот слой наносят микрошприцем стандартные растворы эстрогенов и исследуемый раствор. После этого. производят двукратную разгонку в системе хлороформэтанол с соотношением масс 9 1, соответственно. Затем пластины опрыскивают реактивом

Фолина-Чиокалтеу и выдерживают в парах аммиака до появления на них темно-синих пятен, по которым и определяют наличие эстрогенов. Для кислотного гидролиза воздушно-сухой сапропель помещают в емкость из кислотостойкого материала и заливают его концентрированной соляной кислотой. Тщательно перемешивают до образования однородной массы и оставляют на сутки при комнатной температуре для постепенного удаления СОг при разложении карбонатов, Через сутки емкость со смесью ставят на водяную баню и нагревают в течение 1 ч. В результате карбонаты, всегда присутствующие в сапропеле, разрушаются, что способствует дополнительной очистке исходного продукта от примесей.

После остывания полученную массу экстрагируют спирто-эфирной смесью. Для этого полученную массу смешивают со спиртоэфирной смесью в массовом соотношении

1:1. Тщательно перемешивают и отстаивают. После того, как четко обозначится граница отстоя, верхний слой сливают.

Оставшийся осадок еще раз смешивают со спирто-эфирной смесью и процедуру повторяют. Экстракцию спирто-эфирной смесью

1826908 проводят трижды, что позволяет наиболее полно выделить зстрогены иэ исходного продукта. Полученный экстракт обезеоживают сульфатом натрия и выпаривают досуха.

После этого полученный сухой продукт разделяют на конкретные эстрогены, Для этого используют метод тонкослойной хроматографии. Для проведения хроматографии полученный сухой продукт растворяют в этиловом спирте. Хроматографию проводят на стеклянных пластинках, покрытых незакрепленным слоем окиси алюминия, C помощью микрошприца на пластинки наносят стандартные эстрогены и исследуемый раствор, Стандартные эстрогены позволяют идентифицировать эстрогены, содержащиеся в исследуемом растворе, Как показали опыты, разделение трех классических эстрогенов лучшие всего достигается в системе хлороформ — этанол в массовом соотношении 9:1 соответственно. Для более четкого разделения эстрогенов применяют двукратную разгонку. Для обнаружения стероидов пластину опрыскивают реактивом

Фолина-Чиокалтеу и выдерживают в парах аммиака до появления на пластине темносиних пятен. Темно-синие пятна указывают на наличие эстрогенов, которые проявляются в виде темно-синих пятен.

При проявлении хроматограм обнаружено четкое пятно, имеющее такую же константу передвижения, как и эстрон стандартного раствора. Расстояние между стартовой линией фронта составило 15,0 см.

Пятно исследуемого раствора находилось в зоне 10,5-10,7 см (Рт = 0,70).

Из 100 r воздушно-сухого сапропеля было выделено с помощью предлагаемого способа 25 мГ эстрогенов. Биологическая активность полученных эстрогенов была проверена на белых мышах. Сравнение проводилось с фолликулином, который в весовом количестве равнялся также 25 мГ.

Опыты показали, что биологическая активность выделенных эстрогенов превышает биологическую активность фоликулина, По сравнению с прототипом, предлагаемый способ извлечения эстрогенов из лечебных грязей является более эффективным. Прежде всего эффективность способа повышается благодаря тому, что в качестве исходного продукта для извлечения эстрогенов используют canponenb, который на порядок больше содержит органических веществ, чем минеральные грязи, а именно в 100 r минеральной грязи содержится 3,0 оoр гrа нHи ч еeсcкKи х x в ещ е rст вs, в то

20 время как в 100 r сапропеля — 80$ органических веществ. Зто уже заранее обуславливает повышенную концентрацию эстрогенов в конечном продукте способа, что повышает его эффективность„по сравнению с прототипом, Кроме того, благодаря тому, что GBflpGABili; используют воздушносухой, исключаются примеси. содержащиеся в отстойных водах, к; торые присутствуют в жидком сапропеле, уменьшение 1римесей в воздушно-сухом сапропеле достигэе-,ся и благодаря гому; «то перед з ..,тракцией сапропель подве(гзют кислоч ь!Ом" идролизу что приводит к разрушениго карбонатов, содержащихся в сапропеле, Наиболее полно и.-вле ь эстрогенные ве! ества из гидрочизованного сапропеля, по сравнению с прототипом, газволяет использование для экстракции спирто-эфирной смеси, так как эстрогены хорошо растворяются в эфире, что также повышает эффективность способа, по срав25 нению с прототипом. Благодаря тому, что при разделении эстрогенов методом хроматографии в предлагаемом способе используют двукратную разгон",у в системе хлороформ — зтанол при их массовом соот30 ношении 9:1 соответственно, удается достичь более четкого разделения трех классических зстрогенов, что также повышает эффективность предлагаемого способа, по сравнению с прототипом.

35 Таким обр;. зом, r!o сравнению с прототипом, предлагаемый способ извлечения эстрогенов является более эффективным.

Формула изобретения

Способ извлечения зстрогенов путем

40 экстракции лечебных грязей органическим растворителем, разделения методом тонкослойной хрома.-ографии и идентификации экстрогенов,отлича ю щийс я тем, что, с целью повышения эффективности разде45 ления, в качестве лечебной грязи, используют воздушно-сухой сапропель, перед зкстракцией его подвергают кислотному гидролизу соляной кислотой при соотношении 1:1, тщательно перемешивают и остав50 ляют на сутки, после чего нагревают в течение 1 ч на водяной бане, после остывания полученную массу трижды экстрагируют спирто-эфирной смесью при соотношении 1:1, затем полученный экс55 тракт обезвоживают сульфатом натрия, выпаривают досуха и растворяют в зтиловом спирте, а разделение проводят на незакрепленном слое окиси алюминия двукратно в системе хгороформ-зтанол в соотношении 9:1.