Способ прогнозирования тяжести течения клещевого энцефалита

Способ прогнозирования тяжести течения клещевого энцефалита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике нейровирусных инфекций и может быть использовано при обследовании и лечении больных клещевым энцефалитом. Цель - повышение точности способа прогнозирования течения клещевого энцефалита. Способ предусматривает применение трех иммунологических тестов: определение JgM-антител, Т-лимфоцитов и ГЗТ, и при значении обратного титра JgM-антител 4-6 Iog2, Т-лимфоцитов 600-900 клеток в 1 мл и 15-20% торможения миграции лейкоцитов прогнозируют тяжелое течение клещевого энцефалита. Предлагаемый способ усовершенствует прогнозирование тяжести течения клещевого энцефалита, а, следовательно, оптимизирует тактику лечебно-профилактических мероприятий, снижает частоту хронизации процесса и инвалидизации больных, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4863309/14 (22) 31.08.90 (46) 15.07.93. Бюл. N. 26 (71) Омский научно-исследовательский институт природноочаговых инфекций (72) Э.А. Кветкова, Л.П. Ил юшенко и

B.Ã. Ш матко (56) Диагностическое и прогностическое значение JgM при клещевом энцефалите.

Тез.докл. Пленума Всесоюзн.проблемной комиссии. Таллинн, 1984. (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике нейровирусных инфекций и может быть использовано

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике нейровирусных инфекций и может быть использовано при обследовании и лечении больных клещевым энцефалитом (КЭ).

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляются следующим образом.

У больных КЭ на первой и второй неделях заболевания в периферической крови оп ределя ют содержание Ig М-антител, число

Т-лимфоцитов и уровень клеточного иммунитета (ГЗТ). Титр Ig М-антител определяют с помощью метода хроматографии на колонках с ДЕАЕ-целлюлозой.

Кол. чество Т-лимфоцитов определяют методом Е-розеткообразования. Венозную кровь вносят в пробирку с ЭДТД (0,1 мл на

10 мл крови), разводят в 1,5 раза средой 199.

ÄÄ5UÄÄ 1827633 А1 при обследовании и лечении больных клещевым энцефалитом, Цель — повышение точности способа прогнозирования течения клещевого энцефалита, Способ предусматривает применение трех иммунологических тестов; определение JgM-антител, Т-лимфоцитов и ГЗТ, и при значении обратного титра JgM-антител 4 — 6 logy, Т-лимфоцитов

600 — 900 клеток в 1 мл и 15 — 207ь торможения миграции лейкоцитов прогнозируют тяжелое течение клещевого энцефалита. Предлагаемый способ усовершенствует прогнозирование тяжести течения клещевого энцефалита, а, следовательно, оптимизирует тактику лечебно-профилактических мероприятий, снижает частоту хронизации процесса и инвалидизации больных, 1 табл.

Лимфоциты получают в градиенте плотности фиколл-верографина. После 3-кратного центрифугирования при 1500 об.мин и последовательного отмывания количество клеток подсчитывают в камере Горяева и разводят средой 199 до концентрации

2.10 /мл. Клетки (0,1 мл, смешивают с равным объемом 0,5% взвеси эритроцитов барана, инкубируют на водяной бане при 37 С

10 мин, центрифугируют и помещают в термастат(37 С) на 1 ч, Образовавшиеся розетки фиксируют глютаровым альдегидом и осаждают центрифугированием. Из осадка клеток готовят мазок на предметйом стекле, фиксируют его метанолом, окрашивают метиловым синим и подсчитывают 300 клеток, Определяют процентное содержание розеткообразующих клеток, Абсолютное количество Т-лимфоцитов рассчитывают, исходя из общего числа лимфоцитов в крови больного, 1827633 которое принимают за 100. Уровень клеточного иммунитета выражают процентом торможения миграции лейкоцитов (ПТМ)— количественным показателем ГЗТ.

Из венозной крови больного получают культуру лейкоцитов, для чего 5 мл крови помещают в пробирку с гепарином (40 ед/мл) и желатином (0,8 мл 10 ампульного желатина на 10 мл крови), выдерживают в термостате (37 С) 40 мин. Плазму переносят в силиконированную или пластиковую пробирку, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин. Осадок дважды отмывают раствором Хенкса, а затем питательной средой 199 с 15 лошадиной сыворотки, I-глютамином и антибиотиками.

Подсчитывают количество клеток в камере Горяева и разводят питательной средой до концентрации (3 — 4) 10 /мл.

В предлагаемом способе использовали вариант постановки реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в агаровой среде. Состав агаровой среды: 0,5 бактоагара в среде 199, 15 лошадиной сыворотки без консерванта, антибиотики, 375 мкг/мл бикарбоната натрия, рН 7,2 — 7,4. Агаровую среду разливают в чашки Петри разового применения, стальным пробойником пробивают лунки, В качестве антигена используют концентрированную очищенную вакцину против

КЭ. Антиген в равном по объему соотношении смешивают с суспензией лейкоцитов и после контакта (30 мин, 37 С) вносят в лунки. Контролем служат лейкоциты в смеси с физиологическим раствором. Чашки помещают во влажную камеру с содержанием 5 С02 на

18 — 24 ч, Мигрирование клетки фиксируют 96 этиловым спиртом 18 — 24 ч, Результат учитывают с помощью бинокулярного микроскопа

МБС вЂ” 9 и выражают в виде процента торможения миграции лейкоцитов, который определяют по формуле радиус миграции в присутствии антигена 100

RTM = 100 — радиус миграции без антигена

Количественные показатели, а также динамика иммунологических тестов, используемых в заявляемом способе, у больных и переболевших различными формами

КЭ представлены в таблице.

Таким образом, при обратном титре lgMантител в крови больного на первой и второй неделях болезни от 4 до 6 logz, количество

Т-лимфоцитов от 600 до 900 в 1 мкл и ПТМ, равном 15 — 20, у больных лихорадочной формой КЭ прогнозируют тяжелое клиническое течение инфекции, реализующееся в виде затяжного субхронического, а в ряде случаев и хронического процесса

У больных с поражением вещества мозга прогностически неблагоприятны в эти же сроки заболевания следующие показатели специфической иммунологической реактивности: обратный титр IgM-антител 6 — 8 logz, количество Т-лимфоцитов 500 — 600 в 1 мкл, ПТМ 25 — 30. Длительная персистенция Ig Мантител (выявление через 1 год и позже) у переболевших КЭ свидетельствует о продолжающейся персистенции вируса, что дает основание прогнозировать опасность развития хронического течения инфекции.

Пример 1. Больной П., 34 года, поступил в клинику с диагнозом клещевой энцефалит менингеальная форма, На третий день болезни обратный титр IgM-антител 8,3 logz, количество Т-лимфоцитов 838 в

1 мкл, ПТМ 23,3. Иммунологические показатели на 14 день болезни: обратный титр

Ig М-антител 6,3 logz, количество Т-лимфоцитов 450 в 1 мкл, ПТМ 29,0. Иммунологические показатели явились основанием для прогнозирования тяжелого течения КЭ в остром периоде заболевания и возможного затяжного течения инфекции. Прогноз подтвердился. У больного через месяц после острого периода развился синдром Кожевниковской эпилепсии, Чрез 7,5 мес,от начала заболевания из крови изолирован вирус

КЭ. Через 1 и 2 года обратный титр IgM-антител составил 5,3 logy, количество Т-лимфоцитов 1046 в 1 мкл, ПТМ 12,9. При катамнестическом обследовании клинический диагноз: прогредиентное течение КЭ, синдром Кожевниковской эпилепсии.

Пример 2. Больной Л., 36 лет, поступил в клинику с диагнозом лихорадочная форма КЭ. На 4 день болезни обратн ый титр

Ig М-антител 6,3 logs, количество Т-лимфоцитов 1146 в 1 мкл, ПТМ 27,6, На 14 день обратный титр Ig М-антител 5,3 logz, количество Т-лимфоцитов 805 в 1 мкл, ПТМ 30,1, Длительный субфебрилитет. Через 1 год от начала заболевания — обратный титр ig Mантител 4,3 logz, число Т-лимфоцитов в 1 мкл

1040, ПТМ 2,1. При катамнестическом клиническом обследовании отмечено сохранение астенического и появление у больного миелитического синдромов.

Пример 3. Больной LU., 15 лет поступил в клинику с диагнозом клещевой энцефалит менингиальная форма. На 5 день болезни обратный титр Ig M-натител 8,3 loge, количество Т-лимфоцитов 406 в 1 мкл, ПТМ

17,9. К концу второй недели болезни обратный титр IgM-антител 7,3 logz, количество

Т-лимфоцитов 623 в 12 мкл, ПТМ 20,9. Через

1 год от начала заболевания иммунологические показатели составили соответственно;

5,3 logz, 1106 мкл, 13,8, Неблагоприятный

1827633

Формула изобретения

Обратный титр lg M-антител (log2) Клиническая форма

Количество Т вЂ” лимфоцитов, тыс. мкл

Процент торможения миграции лейкоцитов

Срок обследования со дня заболевания (дни) 4 — 7

4 — 7

1 год

1 год

1 год

0,7—

0,6—

Лихорадочная

4 — 5

5 — 6

0,8

0,9

1,2

20

Формы с поражением вещества моз6 — 7

7 — 8

5 — 6

0,6

1,2

0,5

30

13 га

Контроль1,4+0,1

5 ПТМ ная группа (доно ры крови) Составитель Э.Кветкова

Техред М,Моргентал Корректор М Андрушенко

Редактор

Заказ 2357 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Ра шская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 прогноз подтвердился. При клиническом обследовании через 1 и 2 года у больного выявлено вялое прогредиентное течение КЭ с гипертензионным синдромом. Через 8 лет от начала заболевания из крови больного изолирован вирус.

Способ апробирован при клинико-лабораторном обследовании 127 больных с различными клиническими формами заболевания, госпитализированных в Омскую областную клиническую больницу.

Положительный эффект — повышение точности прогнозирования тяжести течения

КЭ позволяет оптимизировать тактику лечебно-профилактических мероприятий, а следовательно, снизить частоту хронизации процесса и инвалидизации больных.

Способ прогнозирования тяжести течения клещевого энцефалита путем определе5 ния количества специфических Jg М-антител в крови больного, о тл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно одновременно определяют количество Т-лимфоцитов и уровень ги10 персенсибилизации замедленного типа по реакции торможения миграции лейкоцитов, и при значении обратного титра JgMантител, равном 4 — 6 logy, количестве

Т-лимфоцитов 600 — 900 клеток в 1 мл и при

15 15 — 90 % торможении миграции лейкоцитов прогнозируют тяжелое течение клещевого энцефалита.