"способ получения комплекса липидов "тимихол" из животного сырья"

"способ получения комплекса липидов "тимихол" из животного сырья"

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

М е

И

С

P в

S н о с н э ти н о н

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) (g1) 5014086/14 (P2) 20.11.91 (6) 23.08.93. Бюл. М 31

1) Институт биохимии им. А,В.Палладина (2) С.Н.Тихонова, С.В.Комиссаренко, .А.богуславский и В,П.Вендт (3) Малое предприятие "Биохим"

6) Патент США N. 4474773, . А 61 К 31/685, 1984, (4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА .ИПИДОВ "ТИМИХОЛ" ИЗ ЖИВОТНОГО

ЫРЬЯ

7) Изобретение относится к химико-фарацевтичеекой промышленности, а получае ый комплекс липидов может

Изобретение относится к химико-фарцевтической промышленности, а получаый комплекс липидов может пользоваться в медицине как средство, особствующее очищению гнойной раны, генерации мягких тканей, реорганизации бца и эпителизации раневой поверхности словиях нарушенной трофики.

Новый способ предлагает использовать ачестве сырья вилочковую железу крупго рогатого скота и включает следующие ерации: измельчение и гомогенизация рья в физиологическом растворе, отделее жидкой фазы (центрифугирование). и ри м обрузуется осадок и супернатант с отирующей липидной фракцией, из флоующей липидной фракции экстрэгироваизопропанолом комплекса липидов, еление твердой фазы (центрифугировэили декантация), растворение в гексане

„„ЯЦ„„1836091 АЗ (я >s А 61 К 35/24// 31/685 использоваться в медицине как средство для очищения гнойных ран, регенерации мягких тканей, реорганизации рубца, эпителизации раневой поверхности в условиях нарушенной трофики. Сущность изобретения: в качестве сырья используют вилочковую железу крупного рогатого скота. которую измельчают, гомагенизируют в физиологическом растворе, центрифугируют из флотирующей фракции суспернатанта путем зкстракции изопропанолам при соотношении 1;{5 — 10) выделяют комплекс липидов, центрифугируют, осадок растворяют в гексане при соотношении 1:(5-10) и выделяют целевой продукт, биологически активных липидов, центрифугирование, концентрирование супернатанта (вакуумная отгонка гексана) и сушка конечного продукта.

Получаемый комплекс биологически активных липидов содержит следующие компоненты, %: глицериды 30-45, глицерофасфаты 40-70, холестерин (в csaбодном и этерифицированном состоянии)

1,5-4, неомыляемые вещества 3-5, жирные насыщенные кислоты при массовом отношении к ненасыщенным 2: l.

В настоящее время вилочковую железу используют нерентабельно, исключительна как сырье для получения иммунокаррегирующих белковых препаратов типа "вилазен", "тимэлин", "тактивин", при этом выход целевого продукта составляет 5-7% от веса сырья. Новый способ позволяет, не исключая параллельного выделения указанных

1836091 белковых препаратов, получать липиды за счет опгимэльной утилизации фракций гомогенизировэн1чого cl,tpbsl после центрифугирования: суг ернатэнт — для выделения выгвеуказэнных препаратов. флотлрующая лиг11лд11эя фракция — для выделен1чя нового

ЛИПИДНОГО КОМПЛЕКСЭ, Следо11этельно, 11спользование вилочковой х<елезь1 для выделения колчплекса липидов, несмотря, на разнообразие исто1ников сырья, является решением неординэрIII:II 1 и рациональным, (ОВЫЙ комплекс липи11ОВ, выделенный из богатой Mа широкий спекгр липидов флотлрующей фракции путем экс Гракцил изопропэнолом, центри<(угироваrIMH. экстракцией липидОВ из Осадка гекса11ом, повторного центрифуирования M концентрирования супернатанта, обладает лэчебным эффектом — ускоряет

;1pОцесс рсгенерации мягких тканел. M оказываетт бактерицидное действие Ilа инфицированные рэ -II,.

Изобретение иллюстрируется примералч1И ко 1крет I<>fQ DLI! IO>líåíè I способа (примеры 1-,Ц и испытания биологической активности получаелчог0 продукта (примеры

4 — 6)

Пример 1, 10 кГ вилочковой железы измельчак>г нэ мясорубке с диаметром ф IIII epI;I 2 I.I; I, гомоге н изиру1от В двух обьема . ф11зиологического раствора, центрифуГиру1от 30 мин при 3000 об/мин и те sir!epa;уре -4 "С в рe<)>pM>I<е(>атооной центрифуге, Г(олучэ::ìI Ié супернатант использ)ют для ьыделения Гlpeïэрэтов .типа

"Вилозен". Из флотиру1ощей фракции супернатанта экстрагиру(от комплкс липидов иэопропанолом В соотношении гомогенат: спирт 1:5 В тече-IMе 2 ч при комнатной темперачуре, затем снова центрифугируют при 3000 об/мин, 30 мин. Осадок смешивают с гексаном в соотношении 1:10, провод11т реэкстракцию пpM переме<11ивании в течение 3 ч при комнатной гемпературе, а затем оставля от нэ 16 ч для разделения фаэ. Нэдосадочну1о жидкость декантируют, растворитель удаля1от вакуумной отгонкой, комплекс биологически активных липидов сушат, Целевой продукт составляет 5% QT веса железы или 25% от флотирующей фракции гомогената. Полученный липидный комплекс "тимихол" соде рж Чт -l5% ГлицериДОВ, Ma HMx 1 1 моноглицеридов, 12% Диглицеридов, 22% триглицеридов, 1,5% холестерина M 54,5% глицерофосфатов, в составе которых 30% фосфолипидов и 70% д,член-1-иловых эфиров глицерина.

П р и и е р 2. Все операции по получеIIHIC ф!1ОТИР> 1О1ЦЕЙ <(>P;II;LI11M ГIРОВОДЯТ СО5

50 гласно описанию примера 1, Флотиру(ощую фракцию обрабатыва1от изопропанолом в соотношении 1;5 в течение 30 мин при 25—

30 С с последующим центрифугированием при 3000 об/мин, ЗО мин и отделением центрифугэта, Из осадка липиды экстрагируют гексаном в соотношении 1:7 в течение 2 часов при 40 С, снова центрифугируют при

3000 об/мин, в течение 30 мин. Из супернатанта удаляют гексан вакуумной отгонкой, а зэтелч сушат получаемый комплекс биологически активных липидов. Целевой продукт составляет 7% веса железа и 30% веса флотирующей фракции гомогената, Полученный липидный комплекс "тимихол" содержит 36% глицеридов, из них 6% моноглицеридов, 9% диглицеридов и 21% триглицеридов, 4% холестерина и 60% глицерофосфатов.

Г! р и м е р 3, Все операции по получению флотирующей фракции проводят согласно описанию примера 1, Из флотирующей фракции экстрэгиру1от липидные компоненты изопропанолом в соотношении к растворителю 1:5 в течение 1 ч при комнатной температуре, Смесь центрифугируют при 3000 об/мин, 30 мин, Осадок ресуспендируют с гексаном в соот(чошен1чи

1:5. Экстракци1о проводят при перемешивэнни B те1ение 2 часов при 45 С, choea центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 30 мин. Из супернатанта удаляют гексгн вакуумной отгонкой, а затем сушат получаемый комплекс биологически активных липидов.

Цe!leHO iI продукт составляет 7% веса железы и 30% веса флотиру1ощей фракции из гомогената.

Б составе целевого продукта: 30% глицеридов, из них 5% моноглицеридов, 8% диглицеридов и 17% триглицеридов; 3%.холестерина, остальные липиды представлены глицерофосфатами: 25% фосфолипидов и 75% алкен-1-иловых эфиров глицерина.

Пример 4. Больной А., 28 лет. Диагноз: компрессионный перелом С5 позвонка, осло>кненный повреждением спинного мозга. Травма 10-ти месячной давности. Отсутствие движений в нижних конечностях, нарушена функция тазовых органов. У больного проле>кни В области крестца 5х6 см и в области вертела 4х5 см, Оперативное закрытие швами которых и аутодермопластикой были безуспешными, Местное лечение на первом этапе осуществляют "Ируксолом" и

"Левосином", После очищения ран, когда применение указанных мазей становится нецелесообразным, так как они задержива1от рост грануляций, которые приобретают мелкозернистый вид и становятся тусклыми, применяют препараты, стимулиру1ощие

1036091,, регенеративные процессы в ране, Для уско,рения роста грануляций и эпителизации

,тканей пролежень в области крестца обра-! батывают новым комплексом липидов "ти)михол", а проле>кень в области вертела 5 винилином — бальзам Шостаковского (конт! роль) в течение 3 недель ежедневно один раз в день. В конце указанного срока про лежень в области крестца полностью за>кил, :а в области вертела (контроль) уменьшился 10 по площади всего на 50%.

Пример 5, Больной Б., 42 года. иагноз: компрессионный перелом С5 — Се озвонков, синдром полного поперечного овреждения спинного мозга. Травма 17- 15 етней давности.

Пролежни размером 2х3 см на правой и евой ягодицах, вялое, малосимптомное азвитие нагноения. В раневом отделяемом

ыявлена ассоциация протея и энтеробак- 20 ерий. Общее небольшое недомогание, тойкий и длительный субфебрилитет, снисение показателей клеточного и гуморального иммунитета. На первом этапе роводят курс иммунотерапии с использо- 25 анием тактивина, декариса, а пролежни леат обычным методом с применением нтибиотиков, протеолитических ферменов, препарата "Ируксол", После очищения ролежней от некротических тканей и ис- 30 чезновения в отделяемом протея и энтероакгерий в течение 2-х недель, ежедневно, дин раз в сутки пролежень на левой ягоди е обрабатывают облепиховым маслом (контроль), а на правой новым комплексом 35 леопидов "тимихол". Последний обеспечие в ет более быструю регенерацию клеток ягких тканей, способствуя росту грануляц и и ускоряя эпителизацию, Так, в течение

2 х недель под действием нового липидного 40 к мплекса происходит полное заживление р ны, тогда как при лечении облепиховым м >слом (контроль) проле>кень уменьшается и площади только на 70%, но не зарубцов вается в те же сроки. 45

Пример б. Больной В., 27 лет. Диагн з: переломо-вывих The-Th) позвонков с и вреждением спинного мозга. Травма дави стью 1 месяц. В области крестца проле>к нь размером 4х7х3,5 см. Иэ отделяемого 50 и олежня высеяны протей и кишечная пал чка (10 /мл), чувствительные к гентамици5 ну, хлоргексидину, рифомпицину и

1 фуразолидону, Местное применение 0,02% хлоргексидина для промывания раны и "Левосина" в течение недели, ежедневно, один раз в сутки позволяет снизить число микробов до 10 на мл отделяемого, Последующее ежедневное применение один раз в сутки нового комплекса липидов "тимихол" для лечения пролежня способствует поло>кительной динамике бактериологических исследований, полному исчезновению гиберодной микрофлоры к концу 1-й недели, появлению грануляций. 3а последующие 2 недели возбудители не высеваются ни разу, а пролежень уменьшается в размерах до

2.5.1,5 см, т.е. рана подготовлена к оперативному закрытию швами или аутодермопластикой. После хирургического закрытия рана заживет первичным натяжением, что соответствует состоянию неинфицированной раны.

Результаты клинических испытаний показывают преимущество использования нового комплекса биологически активных липидов по сравнению с известными аналогами: облепиховое масло, бальзам Шостаковского, которое заключается в ускорении регенерации мягких тканей, реорганизации рубца и эпителизации раневой поверхности, заживлении ран первичным натяжением после хирургического лечения раны за счет улучшения антибактериального состояния раневой поверхности.

Формула изобретения

1. Способ получения комплекса липидов "тимихол" из животного сырья, включающий измельчение сырья, экстракцию органическим растворителем, отделение супернатанта центрифугированием с последующим концентрированием отгонкой целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве сырья используют вилочковую железу крупного рогатого скота, которую после измельчения гомогенизируют в физиологическом растворе. флотирующую фракцию супернатанта экстрагируют иэопропанолом, дополнительно центрифугируют и осадок, содержащий целевой и родукт, растворяют в гексане.

2.Способ поп1, отличающийся тем, что экстрадицию супернатанта изопропанолом и растворение осадка в гексане проводят в соотношении 1:5-10.